Antitumor Effect and Molecular Mechanism of Ophiopogonin B

Ophiopogonin B is a kind of saponin active substance extracted and purified from Ophiopogon japonicus,and plays an antitumor role by inhibiting cancer cell adhesion,invasion and proliferation,and inducing tumor cell apoptosis and autophagy.This paper reviews recent studies on antitumor effects and molecular mechanisms of ophiopogonin B,in order to provide a theoretical basis for subsequent development and clinical application of ophiopogonin B.

麦冬皂苷D的药理作用研究进展

麦冬皂苷D是从中药麦冬中提取出的甾体皂苷类成分,具有抗炎、抗肿瘤、降脂、心肌保护作用、神经保护作用、胃肠道保护、调节骨代谢等广泛的药理作用。该文对近些年麦冬皂苷D的药理作用研究进行了综述和分析,为其进一步开发提供参考。

基于网络药理学和实验验证探讨麦冬皂苷D治疗肺纤维化的作用机制

目的运用网络药理学预测麦冬皂苷D(Ophiopogonin D,OPD)抗肺纤维化潜在作用机制,进一步通过小鼠体内实验进行验证。方法本研究通过数据挖掘发现麦冬为治疗气阴两虚型肺纤维化使用频率最高的中药,为探究其物质基础,对其进行网络药理学分析。通过博来霉素构建肺纤维化小鼠模型,并给予不同浓度的OPD干预治疗,验证网络药理学结果。结果首先通过网络药理学分析发现,线粒体自噬可能是麦冬发挥抗肺纤维化作用的潜在靶点,同时对网络图拓扑学分析发现,活性成分麦冬皂苷D与线粒体自噬关系最大。动物实验发现,OPD能缓解小鼠肺纤维化,减少胶原沉积;同时对线粒体自噬相关蛋白检测发现,该化合物能够增加肺组织中PINK1、Parkin蛋白的表达,减少p62蛋白含量,降低细胞内ROS水平。结论OPD通过促进肺组织中PINK1/Parkin依赖的线粒体自噬,改善线粒体功能发挥抗肺纤维化作用。

麦冬皂苷D对小鼠力竭游泳抗疲劳作用的研究

目的通过力竭游泳构建小鼠疲劳模型,观察麦冬皂苷D的抗疲劳作用。方法本次实验共分3批进行。第1批ICR小鼠随机分为空白对照组,游泳模型组,麦冬皂苷D低(20 mg·kg^(-1))、中(40 mg·kg^(-1))和高(60 mg·kg^(-1))剂量组,在连续灌胃给予受试药物1周后,第7天通过负重游泳实验评价抗疲劳活性,次日通过非负重游泳实验测定血清肌酸激酶(CK)、甘油三酯(TRIGL)和尿素氮(UREAL)。第2、3批小鼠按上述剂量给药1周后进行非负重游泳实验,采用血乳酸检测等技术手段,分析麦冬皂苷D高、中、低剂量对小鼠体重、血乳酸、肝糖原的影响。结果与游泳模型组比较,灌胃麦冬皂苷D的小鼠负重游泳时间延长、肝糖原含量升高、血清CK水平下降、血清TRIGL含量升高、游泳后血乳酸曲线下面积下降,上述指标均有统计学意义(均P<0.05);血清UREAL下降,但无统计学差异(P>0.05)。结论麦冬皂苷D能明显增强小鼠运动耐力,并显著减少小鼠体内的乳酸堆积,增加肝糖原储备。

麦冬皂苷D通过降低自噬抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大

目的麦冬皂苷D是否抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所引起的心肌肥大及其可能机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9c2,MTS法检测麦冬皂苷D的细胞毒性;其次将1μmol·L^(-1)的AngⅡ作用于H9c2细胞24h后引起心肌肥大,用不同浓度的麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)共处理,BCA法检测总蛋白含量;实时荧光定量PCR技术检测标志性肥大基因BNP和β-MHC的mRNA表达;Western blot法检测自噬蛋白LC3B的表达,同时运用高内涵筛选技术检测心肌细胞自噬蛋白LC3B的表达以及线粒体膜电位的改变。结果细胞活力的检测结果显示,与对照组相比,AngⅡ不同浓度作用24 h后,对细胞活力无明显影响,而麦冬皂苷D的高浓度(50~100μmol·L^(-1))可明显抑制细胞的活性;AngⅡ作用于心肌细胞24h后,可引起心肌肥大,导致特异性肥大基因mRNA表达上调,并且明显增加细胞总蛋白含量;同时使心肌细胞自噬增强;线粒体膜电位降低,而麦冬皂苷D共处理能明显逆转上述指标。结论麦冬皂苷D对AngⅡ所诱导的心肌肥大有抑制作用。

麦冬皂苷D’通过RIP1/MLKL诱导前列腺癌PC3细胞程序性坏死

目的研究天然皂苷类化合物麦冬皂苷D’(Ophiopogonin D’,OPD’)对雄激素非依赖的前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤效应及其机制。方法不同浓度的OPD’处理前列腺癌PC3细胞后,MTT实验检测细胞生长能力,流式细胞术检测Annexin V-Fitc和PI双染,Western blot检测程序性坏死相关蛋白——受体相互作用蛋白1(receptor interacting protein-1,RIP1)、混合谱系激酶结构区域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like,MLKL)的表达,结晶紫染色、透射电镜观察细胞形态学的改变。结果OPD’抑制PC3细胞生长活性,24 h IC50值为(6.25±0.31)μmol/L。5μmol/L OPD’处理24 h诱导PC3细胞凋亡和坏死,5μmol/L OPD’处理6 h PC3细胞在晚期凋亡/坏死象限呈明显的时间依赖关系(r=0.728,P<0.001)。OPD’诱导PC3细胞Caspase非依赖性死亡,且其死亡能被程序性坏死(necroptosis)特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)所抑制(P=0.047),表明OPD’诱导PC3细胞程序性坏死。OPD’下调Cleaved-RIP1、上调RIP1的表达;上调p-MLKL四聚体的表达,并呈明显的时间依赖关系(r=0.907,P=0.005)。形态学上OPD’诱导PC3细胞坏死样改变。结论 OPD’抑制前列腺癌细胞生长具有明显的抗肿瘤效应,而诱导其通过RIP1/MLKL通路发生程序性坏死可能是其发挥抗肿瘤效应的机制之一。

麦冬皂苷D预处理对PM2.5介导肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性损伤的抑制作用及其机制

目的观察麦冬皂苷D预处理对大气细颗粒物(PM2.5)介导肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12炎性损伤的抑制作用并探讨其机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度麦冬皂苷D对MLE-12细胞活性的影响,结果显示麦冬皂苷D的安全用药范围为≤80μmol/L。取对数生长期的MLE-12细胞,随机分为空白对照组、PM2.5组及麦冬皂苷D组,麦冬皂苷D组分别加入浓度为10、20、40、80μmol/L的麦冬皂苷D预处理1 h,麦冬皂苷D组及PM2.5组中分别加入PM2.5混悬液(调整其终浓度为80μg/mL),作用24 h。空白对照组不作任何处理。采用ELISA法检测各组培养基上清炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达,Western blotting法检测细胞核及细胞质NF-κB p65蛋白相对表达量。结果 PM2.5组培养基上清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达均明显高于空白对照组(P均<0.01),加入80μmol/L麦冬皂苷D的麦冬皂苷D组培养基上清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达均低于PM2.5组(P均<0.01)。加入不同浓度麦冬皂苷D的麦冬皂苷D组培养基上清IL-8、TNF-α表达均高于对照组,加入10、20、40μmol/L麦冬皂苷D的麦冬皂苷D组培养基上清IL-1β、IL-6表达均高于对照组(P<0.05或<0.01)。PM2.5组细胞核NF-κB p65蛋白相对表达量高于对照组,细胞质NF-κB p65蛋白相对表达量低于对照组(P均<0.01)。加入不同浓度麦冬皂苷D的麦冬皂苷D组细胞质NF-κB p65蛋白相对表达量均高于PM2.5组,加入20、40、80μmol/L麦冬皂苷D的麦冬皂苷D组细胞核NF-κB p65蛋白相对表达量均明显低于PM2.5组(P均<0.01)。结论麦冬皂苷D预处理可减轻PM2.5引起的MLE-12细胞炎性损伤,80μmol/L浓度时作用最明显且细胞毒性较小;其机制可能与抑制NF-κB p65入核及其相关信号通路激活有关。

ELSD-HPLC法测定麦冬药材中麦冬皂苷D、D'含量

目的采用蒸发光散射检测器(ELSD)测定麦冬中麦冬皂苷D、D'的含量。方法 Waters sy-meteryC18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),水-四氢呋喃-乙腈(52∶3∶45)等度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,增益值10,压力2.5 Pa,飘移管温度65℃。结果麦冬皂苷D和麦冬皂苷D'分别在48.60～972μg·mL-1,24.75～495μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为101.7%(RSD=2.69%)和97.7%(RSD=3.25%)。结论该方法快速、准确,可用于麦冬药材中麦冬皂苷D和麦冬皂苷D'的含量测定。

麦冬皂苷D对细菌脂多糖所致小肠上皮细胞损伤的保护作用

目的研究麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)对小肠上皮细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养大鼠小肠上皮细胞IEC-6,用噻唑兰(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测麦冬皂苷D对大鼠小肠上皮细胞IEC-6活性的影响;建立细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)损伤大鼠小肠上皮细胞IEC-6模型,检测麦冬皂苷D对上皮细胞的凋亡作用以及紧密连接屏障功能作用的影响。结果 LPS可显著降低IEC-6细胞的存活率;LPS显著促进炎症指标核转录因子NF-κB、凋亡相关蛋白caspase-9以及可导致紧密连接功能紊乱的肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达;LPS抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。麦冬皂苷D可逆转LPS造成的功能紊乱,包括促进Bcl-2的表达,抑制caspase-3及MLCK的表达,一定程度上恢复黏膜屏障功能。结论麦冬皂苷D可缓解LPS造成的肠上皮细胞损伤,该作用与抗炎、抑制细胞凋亡及降低MLCK表达相关;麦冬皂苷D可能成为炎症性肠病临床治疗的一个潜在的候选药物。

LC-MS/MS法测定血浆中麦冬皂苷D’的含量

目的:测定生脉注射液中麦冬皂苷D’在Beagle犬血浆中的含量。方法:应用LC-MS/MS分析方法,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,测定血浆中麦冬皂苷D’浓度。结果:麦冬皂苷D’线性范围分别为10.90~877.50μg·L^(-1),回收率在85.40%~94.01%,日内、日间RSD值均小于15%。麦冬皂苷D’药代动力学参数t1/2(0.083±0.015)h,Cmax(116.801±2.645)μg·L^(-1)AUC0-∞(221.549±3.127)μg·h·L^(-1)。结论:本方法简便快速、灵敏度高,适用于血浆中麦冬皂苷D’的含量测定。

麦冬皂苷D通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的实验研究

背景麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)是中药麦冬提取物中重要的单体成分且具有抗癌作用,但是否具有抗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作用还未知.本研究假设OPD能够通过上调miR-519d-3p表达进而下调真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E)表达发挥抗HCC作用.目的探讨OPD对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制.方法培养HCC细胞HepG2和MHCC97,不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)的OPD作用48 h后,四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium,MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-519d-3p和EIF4E mRNA表达,Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9和EIF4E蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p和EIF4E之间关系.转染miR-519d-3p mimics、si-EIF4E构建miR-519d-3p过表达或EIF4E表达抑制的HepG2和MHCC97细胞,RT-qPCR检测细胞中miR-519d-3p表达或Western blot检测EIF4E蛋白表达验证转染效率.MTT、Transwell、Western blot分别检测过表达miR-519d-3p或抑制EIF4E表达对HepG2和MHCC97细胞增殖、迁移和侵袭,及CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.结果与对照组比,OPD组HepG2细胞抑制率显著升高(P<0.05),迁移和侵袭数显著降低(P<0.05),HepG2细胞中CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05),p21蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-519d-3p表达显著升高(P<0.05),EIF4E mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性.miR-519d-3p在HepG2细胞中靶向负调控EIF4E表达.miR-519d-3p过表达或抑制EIF4E表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭.抑制miR-519d-3p表达部分逆转了OPD对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论OPD可能通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭.

麦冬皂苷D通过PI3K/AKT通路对卵巢癌细胞8910增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的探讨天然皂苷类化合物麦冬皂苷D(OPD)对卵巢癌细胞8910增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并初步探讨其可能的抗肿瘤分子机制。方法采用不同浓度的OPD处理卵巢癌细胞8910,CCK-8法检测不同浓度OPD分别作用48 h和72 h后细胞的增殖活性及IC50;划痕实验和Transwell小室法检测OPD对细胞迁移和侵袭的影响;流式细胞仪检测OPD对细胞凋亡的影响;Western blotting法进一步检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和细胞增殖相关蛋白的表达。结果OPD组卵巢癌细胞8910的增殖能力显著降低(P<0.05),48 h的IC50为(30.97±4.21)μmol·L-1,72 h的IC50为(20.47±3.65)μmol·L-1;分别用10μmol·L-1和20μmol·L-1的OPD处理48 h后,卵巢癌8910细胞的迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),增殖相关蛋白PI3K、AKT的磷酸化水平明显受到抑制(P<0.05)。结论OPD具有明显的抗卵巢癌细胞生长效应,其机制可能是通过阻断PI3K/AKT通路抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

HPLC法测定麦冬中麦冬皂苷D含量的方法研究

目的探寻麦冬中指标性成分,建立指标性成分的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定麦冬皂苷D的含量。色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶,以乙腈-水(48∶52)溶液为流动相,检测波长为201 nm,柱温25℃。结果麦冬皂苷D进样量在0.06400~0.6400μg线性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率为103.4%(RSD为1.4%)。结论该方法准确、可靠,可用于麦冬药材及相关产品中麦冬皂苷D的含量测定,为完善麦冬药材质量标准提供参考。

麦冬皂苷D'对心肌细胞H9c2细胞的细胞毒性研究

目的探讨麦冬皂苷D'对大鼠心肌细胞H9c2的细胞毒性作用。方法麦冬皂苷D'0. 1,0. 5,5,10μmol/L作用于H9c2细胞24 h,MTS法检测细胞毒性,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期和线粒体膜电位。结果不同浓度麦冬皂苷D'作用于H9c2细胞24 h,5μmol/L及以上浓度的药物处理表现出明显的细胞毒性;流式细胞仪检测显示,5μmol/L及以上浓度的麦冬皂苷D'可诱导H9c2细胞凋亡(P <0. 05),将心肌细胞阻滞于G_0/G_1期(P <0. 01),降低线粒体膜电位(P <0. 05)。结论较高浓度的麦冬皂苷D'对H9c2心肌细胞有明显的细胞毒性作用。

高效液相色谱-电喷雾检测器法同时测定心荣颗粒的多种成分

目的建立高效液相色谱-电雾式检测器法同时测定心荣颗粒中黄芪甲苷、麦冬皂苷D、地黄苷D、五味子醇甲、芍药苷、桂皮醛的含量。方法色谱柱为Atlantis PREMIER BEH C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相以甲醇(A)-0.1%乙酸水溶液(B)梯度洗脱,柱温35℃,流速1 mL·min^(-1),进样量10μL。电喷雾检测器的雾化器温度为35℃,检测频率为10 Hz。结果黄芪甲苷、麦冬皂苷D、地黄苷D、五味子醇甲、芍药苷、桂皮醛在本文浓度范围内均呈良好线性关系,且平均加样回收率分别为黄芪甲苷98.9%(RSD为0.8%,n=9)、麦冬皂苷D 98.4%(RSD为1.4%,n=9)、地黄苷D 98.7%(RSD为1.4%,n=9)、五味子醇甲99.4%(RSD为0.7%,n=9)、芍药苷100.1%(RSD为0.9%,n=9)、桂皮醛101.3%(RSD为0.6%,n=9)。结论该方法可用于心荣颗粒中黄芪甲苷、麦冬皂苷D、地黄苷D、五味子醇甲、芍药苷、桂皮醛的含量测定。

麦冬皂苷D改善阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的机制研究

目的探究麦冬皂苷D对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知功能障碍的作用及其机制。方法将72只大鼠随机分为假手术组、模型组、麦冬皂苷D 10 mg/kg组、麦冬皂苷D 20 mg/kg组、麦冬皂苷D 40 mg/kg组和盐酸多奈哌齐组,每组12只。除假手术组外,其余各组均建立AD大鼠模型,药物干预4周。水迷宫试验检测大鼠认知能力;HE染色检测海马组织病理变化;尼氏染色检测海马组织尼氏体变化,评估神经元情况;检测海马组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平和乙酰胆碱转移酶(ChAT)、乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AChE)水平;Western blot检测脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃跑潜伏期延长(P<0.05),穿越目标象限次数减少(P<0.05),在目标象限停留时间缩短(P<0.05);与模型组比较,麦冬皂苷D 20 mg/kg组、40 mg/kg组和盐酸多奈哌齐组大鼠逃跑潜伏期均缩短(P<0.05),穿越目标象限次数增加(P<0.05),在目标象限停留时间延长(P<0.05)。模型组较假手术组出现明显神经元排列紊乱、海马组织空洞增多,尼氏体数量减少,麦冬皂苷D 20 mg/kg组、40 mg/kg组和盐酸多奈哌齐组较模型组海马组织病理情况出现不同程度的改善,尼氏体数量增多。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织MDA、AChE水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px、ChAT、Ach水平降低(P<0.05),BDNF、TrkB蛋白表达水平均下调(P<0.05);与模型组比较,麦冬皂苷D 20 mg/kg组、40 mg/kg组和盐酸多奈哌齐组大鼠海马组织MDA、AChE水平降低(P<0.05),SOD、GSH-Px、ChAT、Ach水平升高(P<0.05),BDNF、TrkB蛋白表达水平均上调(P<0.05)。结论麦冬皂苷D可改善AD大鼠认知功能障碍,减轻氧化应激,调节神经递质平衡,其机制可能与调控BDNF/TrkB信号通路相关。

RP-HPLC法测定麦冬中麦冬皂苷D’的含量

目的：建立RP-HPLC 法测定麦冬中麦冬皂苷D’的含量，方法：采用DiamonsilTM C18色谱柱（200 mm ×4.6 mm ，5μm），柱温为33℃，流动相为水-乙腈（体积比52∶48），流速0.80 mL·min^-1，检测波长208nm ．结果：麦冬皂苷D’的质量浓度在0.018～0.180 mg · mL^-1与峰面积呈良好的线性关系（r ＝0.9999），平均回收率为99.5％（RSD＝0.96％，n＝9），结论：本方法简便，准确，可用于麦冬药材的质量控制。

低速Dyon粒子电磁辐射的双矢势对偶理论

在考虑磁荷存在的情况下,引入双矢势的概念,给出了场强与双矢势的关系式;由此推导出了磁荷存在情况下的d'Alembert方程,利用这个方程的推迟解得出了带双荷粒子电磁辐射的推迟势的表达式.最后讨论了低速双荷粒子在双矢势下的电磁辐射问题.

LC-MS法测定麦冬皂苷D’浓度的不确定度评定

目的:评定LC-MS法测定血浆中麦冬皂苷D’浓度的不确定度。方法:对测定方法的全过程进行分析,建立评定其不确定度的数学模型,确定影响不确定度的因素并对各个不确定度因素进行评估,计算合成不确定度并进行扩展。结果:置信概率P为95%时,血浆中低(35.10μg/L)、中(280.80μg/L)、高(702.00μg/L)浓度麦冬皂苷D’的扩展不确定度分别为:6.22、7.64、76.50μg/L。结论:本方法适用于LC-MS法测定人血浆中麦冬皂苷D’浓度的不确定度评定。

川麦冬中麦冬皂苷D对照品的制备

目的:建立从麦冬中制备麦冬皂苷D对照品的方法。方法:用萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析、重结晶等方法对麦冬乙醇提取物进行分离纯化,通过MS、IR、1H-NMR、13C-NMR进行结构鉴定。结果:薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC-ELSD)检测分析,麦冬皂苷D的纯度为99%以上。结论:本方法简便,产品纯度高,该对照品可作为川麦冬及其制剂质量的指标成分。