麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。

近红外漫反射光谱法快速测定麦冬多指标成分含量

目的利用近红外光谱(NIR)技术建立麦冬5种代表性成分的偏最小二乘(PLS)定量分析模型,为快速控制麦冬药材质量提供参考。方法收集3个麦冬主产区的120批样品,采集NIR原始光谱,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、甲基麦冬二氢高异黄酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B含量的化学参考值,以决定系数(R^(2))、校正均方差(RMSEC)、预测均方差(RMSEP)和留一法交叉验证均方差(RMSECV)为指标,选择最佳光谱预处理方法、最佳波段及最佳因子数,建立PLS模型。结果麦冬皂苷B的PLS模型R^(2)=0.9702,RMSEC=0.5207,RMSEP=0.5541,交叉验证R^(2)=0.9430,RMSECV=0.6465,外部验证平均回收率为101.63%;麦冬皂苷D的PLS模型R^(2)=0.9498,RMSEC=0.6627,RMSEP=0.3157,交叉验证R^(2)=0.9206,RMSECV=0.3583,外部验证平均回收率为102.07%;麦冬皂苷D’的PLS模型R^(2)=0.9804,RMSEC=0.0853,RMSEP=0.4155,交叉验证R^(2)=0.9516,RMSECV=0.6933,外部验证平均回收率为99.44%;甲基麦冬二氢高异黄酮A的PLS模型R^(2)=0.9593,RMSEC=0.8122,RMSEP=0.5674,交叉验证R^(2)=0.9395,RMSECV=0.7444,外部验证平均回收率为103.11%;甲基麦冬二氢高异黄酮B的PLS模型R^(2)=0.9408,RMSEC=0.6451,RMSEP=0.7476,交叉验证R^(2)=0.9283,RMSECV=0.8849,外部验证平均回收率为101.59%。校正集与验证集样品均匀分布在回归线两侧,表明模型预测值与实测值之间具有较好的相关性,模型预测性能较为理想。结论本研究建立的定量模型操作简单,预测结果准确,可用于麦冬5种成分含量的快速测定。

麦冬皂苷B对A549细胞株体外黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制研究

目的探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)抑制非小细胞肺癌细胞株A549黏附、侵袭、迁移的作用及其机制。方法细胞黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。通过荧光实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测OP-B对A549细胞中MMP-2/9 mRNA表达水平的调控,Western blot法检测细胞中MMP-2/9蛋白及其上游调控蛋白Akt及其磷酸化水平的变化。结果 10μmol·L-1浓度的OP-B能明显抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,同时能抑制其MMP-2/9 mRNA及蛋白水平的表达,并抑制其上游p-Akt的表达。结论 OP-B有效抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2/9 mRNA和蛋白水平的表达及抑制其上游Akt的磷酸化有关。

麦冬皂苷B抑制非小细胞肺癌体内迁移机制的研究

目的:探究麦冬皂苷B(Ophiopogonin-B,OP-B)抑制非小细胞肺癌细胞株A549体内迁移的作用及其机制。方法:通过对裸鼠进行尾静脉注射A549细胞制成肺转移瘤模型,以37.5mg·kg-1和75 mg·kg-1的剂量进行小鼠的口服灌胃给药21天;ELISA法检测外周血中炎症因子TNF-α、IL^(-1)、IL-6的水平,同时取肺癌组织通过HE染色进行转移灶的观察,结合Western blot法进行Claudin-2、ephrin A1、Eph A2、p-ERK、p-p38MAPK、p-SAPK/JNK的检测,探讨OP-B体内抑制肺癌A549细胞转移的分子机制。结果:高、低剂量OP-B对TNF-α水平均有抑制作用,以高剂量抑制作用更显著;形态学结果表明,高剂量OP-B更能显著抑制A549细胞的体内迁移,同时抑制p38MAPK的磷酸化激活;另外,高、低剂量OP-B均能促进Claudin-2的表达。结论:OPB通过抑制TNF-α的水平进一步抑制p38MAPK的活化,同时上调Claudin-2的表达,抑制A549细胞的裸鼠体内迁移。

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 kU·L^-1青霉素、100 mg·L^-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L^-1)、OPB中剂量组(10μmol·L^-1)和OPB高剂量组(20μmol·L^-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例下降,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P<0.05);OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。

麦冬皂苷B抑制人食管鳞状细胞癌细胞系EC9706增殖和迁移

目的探讨麦冬皂苷B(OP-B)对食管鳞状细胞癌细胞系(EC9706)增殖、迁移和凋亡的影响,分析其机制是否与调控唐氏综合征细胞黏附分子反义1(DSCAM-AS1)和miR-199a-3p表达有关。方法将EC9706细胞分为对照组、低、中、高OP-B组、si-NC组、si-DSCAM-AS1组、(pcDNA-DSCAM-AS1+OP-B)组。集落形成实验和CCK-8法检测EC9706增殖。流式细胞测量术、划痕愈合实验分析EC9706细胞凋亡率和迁移能力。RT-qPCR检测DSCAM-AS1和miR-199a-3p表达量。双荧光素酶报告基因实验确定DSCAM-AS1和miR-199a-3p靶向关系。结果OP-B处理将降低EC9706活力、集落形成数、迁移距离和DSCAM-AS1表达量(P<0.05),增加细胞凋亡率和miR-199a-3p表达量(P<0.05)。DSCAM-AS1与miR-199a-3p存在直接相互作用。干扰DSCAM-AS1表达后,EC9706活力、克隆形成数、迁移距离显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。过表达DSCAM-AS1可逆转OP-B直接处理对EC9706细胞增殖、凋亡和迁移的影响(P<0.05)。结论OP-B可抑制食管鳞状细胞癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过下调DSCAM-AS1/miR-199a-3p途径实现的。

麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制研究

目的:研究麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制。为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。方法:MTT比色法检测人肝癌HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡及细胞周期变化;吖啶橙、Lyso-Tracker Red(溶酶体红色荧光探针)染色、HepG2-GFP-LC3转染细胞等检测细胞自噬;Western blotting(蛋白质印迹法)检测人肝癌HepG2细胞自噬信号通路中关键蛋白的变化。结果:人肝癌HepG2细胞的增殖被麦冬皂苷B抑制,而且麦冬皂苷B可诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬,但不诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可导致LC3I转变为LC3II和Beclin-1(自噬标志性蛋白)表达增加,自噬抑制剂3-MA几乎完全逆转其抗增殖作用。Western blotting检测结果表明,AKT、mTOR和p70S6K的磷酸化及PTEN上调是被麦冬皂苷B抑制的结果。结论:麦冬皂苷B通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬。

麦冬皂苷B通过调控miR-432-5p抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)约占所有肺癌病例的80%-85%,而腺癌是NSCLC最常见的类型。尽管近年肿瘤治疗手段已经取得较大进展,但由于肿瘤耐药、复发和转移等问题,肺癌患者死亡率仍高居不下[1]。

麦冬皂苷B通过MiR-34a对非小细胞肺癌A549细胞影响的研究

目的:研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞中miR-34a的表达情况,miR-34a和Met信号通路的相关性,进一步明确麦冬皂苷B(Ophiopogonin-B,OPB)治疗肺癌的分子机制。方法:采用非小细胞肺癌A549细胞,胚胎肺成纤维细胞MRC-5,以及A549+OPB细胞作为研究对象。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)方法检测miR-34a在A549,MRC-5,A549+OPB中的表达情况。MTT增殖实验检测miR-34a对A549细胞增殖能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-34a的下游功能靶基因,通过荧光素酶报告验证。Western Blot技术验证miR-34a和OPB对Met蛋白表达的影响。结果:与MRC-5细胞相比,A549及A549+OPB细胞中miR-34a的表达量明显下降。转染miR-34a后可抑制A549细胞的增殖能力。生物信息学预测显示Met是miR-34a可能的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果的证实。与未转染A549细胞株相,转染后的细胞株及A549+OPB细胞株,miR-34a表达升高,Met的表达降低。结论:在非小细胞肺癌中OPB可能通过miR-34a调控靶基因Met而发挥抗癌作用。

麦冬皂苷B通过调控Notch1信号通路增加前列腺癌细胞的放疗敏感性

目的探讨麦冬皂苷(OP)-B增强前列腺癌(PC)-3细胞放疗敏感性及其可能机制。方法体外培养PC-3细胞,PC-3细胞分为5组:空白对照组(未处理)、阳性对照组(Notch1信号通路特异性阻断剂DAPT处理)、低剂量组(加入2.5μmol/L OP-B)、中剂量组(加入5μmol/L OP-B)、高剂量组(加入10μmol/L OP-B),每组细胞平均分成5份,每份只经0、2、4、6、8 Gy其中一种辐射处理48 h后进行后续实验。四甲基偶唑氮盐(MTT)实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。Western印迹法检测Notch1、Hes1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3、裂解的多聚ADP核糖聚合酶(cleaved PARP)蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,阳性对照组及OP-B不同剂量组PC-3细胞增殖率、LDH漏出率、Notch1、Hes1及Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),且高剂量组显著低于低剂量组、中剂量组(P<0.05);与空白对照组相比,阳性对照组及OP-B不同剂量组PC-3细胞凋亡率、Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达水平均显著升高,呈剂量依赖关系(P<0.05),且高剂量组显著高于低剂量组、中剂量组(P<0.05),高剂量组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论OP-B可促进PC细胞凋亡并增加其放疗敏感性,其作用机制可能与抑制Notch1信号通路有关。

麦冬皂苷B体外调控非小细胞肺癌A549细胞miRNA-34b表达的研究

目的:本研究主要观察不同方式处理后的非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中mi RNA?34b表达水平,探讨mi RNA?34b对MET信号通路的调控机制,以及麦冬皂苷B(OPB)抑癌效应的分子机理,探寻治疗NSCLC的新靶点。方法:采用非小细胞肺癌A549细胞、胚肺成纤维细胞MRC?5、A549+OPB细胞、感染过表达慢病毒LV?hsa?mir?34b的A549细胞、以及感染阴性对照CON181B病毒的A549细胞作为研究对象,分别设为CON组、MRC?5组、CON+OPB组、Micro?up组、NC组。采用q RT?PCR方法检测mi R?34b在CON组、MRC?5组、A549+OPB组A549细胞中的表达情况。使用生物信息学软件预测mi RNA?34b可能的下游功能靶基因。使用q RT?PCR的方法定量分析OPB对MET基因表达的影响,用Western blot检测mi RNA?34b和OPB对靶MET蛋白表达的影响。结果:与MRC?5组相比,A549细胞中mi RNA?34b的表达明显减少,加入OPB后mi R?34b的表达增加。生物信息学预测显示MET基因是mi R?34b可能的关键下游靶基因。加入OPB后,MET基因水平和蛋白水平的表达均降低。结论:OPB可能通过上调A549细胞mi RNA?34b表达,抑制下游靶基因MET进而发挥抗癌作用。

麦冬皂苷B通过p38信号通路诱导人骨肉瘤143B细胞凋亡

目的:探究麦冬皂苷B对人骨肉瘤143B细胞的增殖抑制作用及相关分子机制。方法:采用CCK-8实验检测麦冬皂苷B对143B细胞活力的影响,确定IC50与给药剂量。采用集落形成实验考察药物对细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst 33258染色探索药物对肿瘤细胞凋亡的影响;Transwell细胞迁移实验研究药物对细胞迁移能力的影响;Western blot法观察凋亡相关蛋白的变化,以及药物与p38信号通路的相关性。通过p38抑制剂SB203580进一步验证凋亡与上述通路的关系。裸鼠皮下成瘤实验评价肿瘤生长能力变化。结果:麦冬皂苷B能抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖与迁移能力,并诱导凋亡,且效应与药物剂量和作用时间正相关。Western blot结果显示,麦冬皂苷B激活了凋亡相关蛋白与p38信号通路,同时抑制了Bcl-2表达。使用p38抑制剂SB203580能缓解药物介导的凋亡与增殖抑制。此外,麦冬皂苷B能抑制裸鼠皮下成瘤。结论:麦冬皂苷B可通过p38信号通路抑制人骨肉瘤143B细胞增殖,并能诱导细胞凋亡的发生。

麦冬皂苷B抗肿瘤作用机制研究进展

目的:对麦冬皂苷B抗肿瘤作用机制的相关研究进行综述。方法:查阅国内外相关文献。结果:麦冬有效化学成分麦冬皂苷B(OP-B)作为传统中药具有明显的抗肿瘤作用,包括肺癌、胃癌、肝癌、宫颈癌等。近年来学者们已通过多角度研究阐述其部分抗肿瘤作用机制,涉及不同的蛋白及信号通路。结论:麦冬皂苷B具有显著的抗肿瘤细胞黏附、侵袭、迁移,抗增殖及促凋亡,自噬等方面的作用,有继续深入研究的必要及价值。

麦冬皂苷B通过Myt/Cdc2信号通路抑制H460细胞有丝分裂

目的探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)对非小细胞肺癌细胞株H460有丝分裂及细胞周期调控的相关分子机制。方法 TUNEL免疫组化法观察细胞核物质的变化;DAPI染色法观察细胞核形态的改变及有丝分裂的状态;Western blot法检测细胞周期调控相关的蛋白信号通路。结果形态学结果表明,10μmol·L^(-1)浓度的OP-B能明显抑制H460细胞的有丝分裂,蛋白水平的检测结果表明,OP-B能抑制cyclin D1、cyclin B1的表达,促进Myt的表达及Cdc2的磷酸化,抑制histone H3(Ser10)的磷酸化,同时能上调周期抑制性蛋白p21的表达。结论 OP-B通过Myt/Cdc2信号通路导致细胞周期停滞在G0/G_1期,从而抑制细胞的有丝分裂。

麦冬皂苷B对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨麦冬皂苷B对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法选取本院2017年1月~2019年1月收治的25例结肠癌患者的癌组织及相应癌旁组织;将结肠癌细胞HT29分为对照(NC)组、不同浓度麦冬皂苷B组、miR-NC组、miR-142-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-142-3p组、麦冬皂苷B+anti-miR-NC组、麦冬皂苷B+anti-miR-142-3p组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-142-3p表达水平。结果麦冬皂苷B处理的结肠癌细胞HT29中cyclin D1表达水平显著降低,cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,miR-142-3p表达水平显著升高(P<0.05)。与癌旁组织相比,结肠癌组织中miR-142-3p表达水平显著降低(P<0.05);mi R-142-3p高表达可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡;mi R-142-3p低表达可促进结肠癌细胞增殖、抑制细胞凋亡;mi R-142-3p低表达可抑制麦冬皂苷B对结肠癌细胞HT29增殖和凋亡的影响。结论麦冬皂苷B通过上调miR-142-3p的表达抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

麦冬皂苷B通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡

目的探讨麦冬皂苷B对人黑色素瘤(Melanoma)A375细胞增殖,凋亡和细胞周期的影响以及相关机制。方法麦冬皂苷B处理A375细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;免疫印迹法检测麦冬皂苷B对A375细胞PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Cleaved-caspase3表达的影响。结果麦冬皂苷B能抑制A375细胞增殖活力及PI3K/Akt/mTOR通路的活化;麦冬皂苷B促进了A375细胞内Bax和Cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑色素瘤细胞发生凋亡;麦冬皂苷B阻滞了A375细胞细胞周期,G0/G1期细胞比例明显升高;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了麦冬皂苷B的上述作用。结论麦冬皂苷B能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。

麦冬皂苷B对胶质瘤细胞增长与迁移抑制作用研究

目的探讨麦冬皂苷B对胶质瘤细胞增长与迁移的抑制作用。方法培养人胶质瘤U87和U251细胞株,取对数生长期细胞进行实验。采用0.9%氯化钠溶液、10μmol/L麦冬皂苷B、20μmol/L麦冬皂苷B分别处理U87和U251细胞。通过MTT实验检测胶质瘤细胞增殖情况,通过流式细胞技术检测胶质瘤细胞周期,利用transwell实验分析胶质瘤细胞迁移情况。蛋白质印迹法检测U87细胞中细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶2表达情况。结果10、20μmol/L的麦冬皂苷B均能在不同程度上抑制U87、U251细胞增殖,且20μmol/L的麦冬皂苷B抑制作用更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,10、20μmol/L的麦冬皂苷B作用U87细胞24 h时的抑制率分别为(30.71%±9.02%)、(48.93%±7.53%),作用U251细胞24 h时的抑制率分别为(41.33%±3.30%)、(52.80%±6.40%)。麦冬皂苷B对U87和U251细胞的细胞周期G1期到S期的转化有一定抑制作用,细胞阻滞于G1期。10、20μmol/L的麦冬皂苷B对U87和U251细胞的迁移有一定程度抑制作用,其抑制作用随着药物浓度的升高而增强。10、20μmol/L的麦冬皂苷B对U87细胞中细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶2表达均有一定程度的抑制作用,随着药物浓度的升高抑制作用增强。结论麦冬皂苷B能够通过抑制细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶2的表达发挥抑制胶质瘤细胞增殖和迁移的作用。

基于HPLC-Q-TOF-MS技术检测川贝清肺糖浆中掺伪山麦冬的研究

目的采用高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)技术建立川贝清肺糖浆中掺伪山麦冬的检测方法。方法采用色谱柱Agilent Po roshell 120 EC-C_(18)(50 mm×4.6 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%冰醋酸(50∶50),流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为35℃;电喷雾电离(ESI-),以麦冬皂苷D、山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C为指标性成分进行分析。结果50批样品中有6批检出山麦冬皂苷B和麦冬皂苷D,应为掺山麦冬(湖北麦冬)投料;有4批均未检出3种指标性成分,疑似未使用麦冬投料。结论该方法专属性强,灵敏度高,可用于对川贝清肺糖浆中掺伪山麦冬的检查。

麦冬皂苷B调节Shh/Gli1通路对肝细胞癌上皮间质转化及耐药性的影响

目的探讨麦冬皂苷B对肝细胞癌上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)和化疗耐药性及音猬因子(sonic hedgehog,Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物(glioma associated oncogene homolog,Gli)1通路的影响。方法筛选麦冬皂苷B合适浓度。将HepG2细胞分为对照组、麦冬皂苷B低(A组)、中(B组)、高浓度组(C组)、麦冬皂苷B高浓度+Shh激动剂组(D组),将HepG2/ADM细胞分为HepG2/ADM组、ADM组、麦冬皂苷B组及ADM+麦冬皂苷B组。检测细胞增殖、凋亡、EMT、Shh/Gli1通路及相关蛋白表达;检测HepG2/ADM细胞增殖、凋亡及Shh、Gli1蛋白。结果与对照组相比,A、B及C组5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)阳性率、Ki67、B细胞淋巴瘤(B cell lymphoma,Bcl)-2、神经性钙黏蛋白、波形蛋白、Shh及Gli1表达依次下降,细胞凋亡率、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)及上皮细胞钙黏蛋白表达依次上升(P<0.05);与C组相比,D组Edu阳性率、Ki67、Bcl-2、神经性钙黏附蛋白、波形蛋白、Shh以及Gli1表达上升,细胞凋亡率、Bax、上皮细胞钙黏蛋白表达下降(P<0.05);与HepG2/ADM组相比,ADM、麦冬皂苷B组EdU阳性率、Shh及Gli1表达下降,细胞凋亡率上升(P<0.05);与ADM及麦冬皂苷B组相比,ADM+麦冬皂苷B组Edu阳性率、Shh及Gli1表达下降,细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论麦冬皂苷B通过抑制Shh/Gli1通路抑制HepG2细胞EMT,降低其化疗耐药性。

麦冬皂苷D对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞保护作用的研究

目的研究麦冬皂苷D对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用及其作用机制。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,按随机数字表法分为正常对照组、模型组和麦冬皂苷D预处理组。采用CCK-8法检测麦冬皂苷D对RAW264.7细胞活性的影响;采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧自由基(ROS)、MDA、SOD水平;Western Blot检测细胞NF-κB、TLR4、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与模型组比较,麦冬皂苷D组细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),NF-κB[(0.76±0.10)比(2.26±0.17)]、TLR4[(0.98±0.09)比(1.74±0.19)]蛋白表达降低(P<0.05),Nrf2[(0.85±0.03)比(0.54±0.03)]、HO-1[(0.97±0.11)比(0.37±0.04)]蛋白表达升高(P<0.05)。结论麦冬皂苷D可能通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻炎症反应,并激活Nrf2/HO-1通路减轻氧化损伤,发挥保护作用。