子宫内膜癌组织LncRNA OGFRP1、TDRG1表达变化及其与PI3K/AKT信号通路和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)阿片类生长因子受体假基因1(OGFRP1)、睾丸发育相关基因1(TDRG1)表达变化及其与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和预后的关系。方法选取EC患者90例,采用RT-qPCR法检测EC组织与癌旁组织中LncRNA OGFRP1、TDRG1及PI3K、AKT mRNA。采用Pearson相关性分析EC组织中LncRNA OGFRP1、TDRG1与PI3K、AKT mRNA表达的相关性。根据EC组织中LncRNA OGFRP1、TDRG1的表达均值将患者分为LncRNA OGFRP1、TDRG1高表达者及低表达者,K-M法绘制EC组织中不同LncRNA OGFRP1、TDRG1表达患者的生存曲线,Log-Rank检验分析EC组织LncRNA OGFRP1、TDRG1表达与患者预后的关系;COX回归分析EC患者预后的影响因素。结果EC组织中LncRNA OGFRP1、TDRG1及PI3K、AKT mRNA表达均高于癌旁组织(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,EC组织中LncRNA OGFRP1表达与PI3K、AKT mRNA表达呈正相关(r分别为0.584、0.571,P均<0.01),LncRNA TDRG1表达与PI3K、AKT mRNA表达呈正相关(r分别为0.593、0.584,P均<0.01)。LncRNA OGFRP1、TDRG1高表达的EC患者3年总生存率低于LncRNA OGFRP1、TDRG1低表达患者(P均<0.05)。Cox回归分析显示,FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移、LncRNA OGFRP1≥1.19、LncRNA TDRG1≥1.35为影响EC患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论EC组织中LncRNA OGFRP1、TDRG1表达升高,LncRNA OGFRP1、TDRG1表达与PI3K/AKT信号通路相关分子表达存在相关性,且为EC患者预后不良的独立危险因素。

OGF、紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及机制探讨

目的观察阿片生长因子(OGF)、紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的MCF-7细胞,随机分为A、B、C、D、E、F、G组,分别用OGF、紫杉醇、OGF+紫杉醇、OGF受体抑制剂naloxone、OGF+naloxone、紫杉醇+naloxone、OGF+紫杉醇+naloxone处理,OGF浓度为10-7M,紫杉醇和naloxone浓度为10-6M,每组均设空白对照。采用MTT法测算各组MCF-7细胞增殖抑制率。结果 A、B、C、D、E、F、G组细胞增殖抑制率分别为25.94%±2.96%、46.98%±5.75%、55.45%±6.97%、2.77%±0.45%、6.38%±1.47%、46.42%±5.32%、47.09%±6.53%。MCF-7细胞增殖抑制率C组高于A、B组,E组低于A组,G组低于C组,P均<0.05;B组与F组、D组与E组相比P均>0.05。结论 OGF、紫杉醇均可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,二者联用具有协同作用。OGF对MCF-7细胞增殖的抑制作用是OGFR介导的,紫杉醇对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OG-FR无关。,

生物活性肽——蛋氨酸脑啡肽的免疫调节作用及其应用前景

源自肾上腺前脑啡肽原的具有吗啡样生物活性的内源性神经肽蛋氨酸脑啡肽(methionine enkephalin,MENK),由5个氨基酸残基Tyr-Gly-Gly-Phe-Met组成,与G蛋白偶联的7次跨膜特异性受体结合后发挥不同的生物学功能。目前,对蛋氨酸脑啡肽的作用及其机制研究已经取得了很大进展。本文就MENK对于免疫系统的调节及其对肿瘤、自身免疫病、艾滋病等免疫系统相关疾病的治疗作用予以综述。

蛋氨酸脑啡肽免疫调节作用的研究进展

蛋氨酸脑啡肽(MENK)作为一种内源性神经肽被认为是联系神经内分泌系统、免疫系统两大系统的重要物质,具有独特的生物学活性,近年来日益受到广泛关注。机体免疫细胞表面广泛存在着MENK受体,MENK通过与这些受体的相互作用而起到免疫调节作用。目前,MENK应用于免疫系统相关疾病的治疗已经取得很大进展。该文就MENK的免疫调节作用及其受体等方面的研究进展予以综述,并展望其应用于癌症、艾滋病等免疫相关疾病治疗方面的广阔前景。

阿片类生长因子受体抑制雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞的生长

目的:观察阿片类生长因子受体(opioid growth factor receptor,OGFr)对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞活力的影响。方法:将LNCaP细胞随机分为非转染组、空白质粒组(转染pcDNA3.1空白质粒)和OGFr质粒组(转染表达质粒pcDNA3.1-OGFr),RT-qPCR和Western blot检测转染效率;10 nmol/L二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)分别处理LNCaP细胞24、48、72和96 h后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化,RT-qPCR和Western blot检测细胞周期调控蛋白——细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)、细胞周期蛋白E(cyclin E)和p21的表达。结果:相对于非转染组,pcDNA3.1-OGFr转染显著增加LNCaP细胞OGFr的mRNA和蛋白表达(P<0.05);10 nmol/L DHT呈时间依赖性促进LNCaP细胞的活力(P<0.05),而DHT对OGFr质粒组细胞活力的增强效应显著降低(P<0.05);在DHT的作用下,OGFr质粒组细胞发生G_(0)/G_(1)期阻滞(P<0.05),但细胞凋亡率无显著差异;CDK2表达下调(P<0.05),p21表达上调(P<0.05),而cyclin E表达无显著差异。结论:OGFr诱导的细胞周期阻滞可抑制雄激素DHT对人前列腺癌LNCaP细胞的生长效应。

乳腺浸润性导管癌组织中OGFR的表达变化及意义

目的观察乳腺浸润性导管癌组织中阿片生长因子受体(OGFR)的表达变化,并探讨其意义。方法采用RT-PCR、Western blot及免疫组化SP法检测乳腺腺病、浸润性导管癌组织中OGFR mRNA及蛋白。结果乳腺腺病组织中OGFR mRNA的表达量为1.24±0.49,OGFR蛋白的表达量及阳性表达率分别为2.04±0.49和42.27%±8.56%,均明显高于浸润性导管癌组织中的0.74±0.40(P<0.01)、1.40±0.39(P<0.05)和25.52%±10.62%(P<0.01)。结论乳腺浸润性导管癌组织中OGFR mRNA、蛋白的表达均明显低于乳腺腺病组织;OGFR可能在乳腺浸润性导管癌的发生发展中起一定作用。

中华眼镜蛇(Naja Naja Atra)毒神经生长因子对PC_(12)细胞κ阿片受体mRNA表达的影响

目的研究眼镜蛇毒神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达的影响,探讨nNGF诱导PC12细胞分化的分子机制。方法用RT-PCR方法半定量地考察nNGF及κ阿片受体的一些拮抗剂和激动剂对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达的影响。结果(1)在25,50和100 ng/mL 3个nNGF剂量组中,50和100 ng/mL nNGF显著下调PC12细胞κ阿片受体mRNA的表达。(2)50 ng/mL nNGF分别处理PC12细胞1,3,5,7,10 d后,结果显示κ阿片受体mRNA表达随时间有降低的趋势,7 d时显著下调(P<0.05),10 d时特别显著(P<0.01)。(3)10μmol/L吗啡上调PC12细胞κ阿片受体mRNA表达,并能逆转nNGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。10μmol/L纳络酮对PC12细胞κ阿片受体的表达无显著影响,也能逆转nNGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。但吗啡和纳络酮共存时不能逆转NGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。结论nNGF诱导PC12细胞分化时,能下调其κ阿片受体mRNA表达,这种下调能分别被吗啡或纳络酮逆转,但不能被吗啡和纳络酮共存时逆转。

中华眼镜蛇毒神经生长因子对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响

目的探讨中华眼镜蛇毒(Naja Naja Atra)神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响。方法PC12细胞分为正常对照组和给药组,采用Western blot方法检测各组PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达。结果①nNGF的25、50、100μg.L-13个剂量中,50和100μg.L-1nNGF下调PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达,50μg.L-1剂量组下调最明显(P<0.01),100μg.L-1剂量组下调(P<0.05)。②50μg.L-1nNGF分别处理PC12细胞1、3、5、7、10 d后,其κ阿片受体蛋白质表达呈降低趋势,其中d 5、7下调(P<0.05),d 10下调明显(P<0.01)。③10μmol.L-1吗啡可上调PC12细胞κ阿片受体蛋白表达,而10μmol.L-1纳络酮对其无影响,二者分别都能逆转nNGF的下调效应,但是二者共存时不能逆转nNGF的下调效应。结论nNGF诱导PC12细胞分化中,可引起PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的下调效应,该效应能被吗啡或纳络酮逆转,但二者共存不能被逆转效应。

mu阿片受体活化促进胰岛素样生长因子Ⅰ致乳腺癌细胞增殖

目的观察mu阿片受体(MOR)在胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)致人乳腺癌细胞增殖行为中的作用。方法选取表达MOR的人乳腺癌细胞株MCF-7,采用Western印迹法(n=3)检测IGFⅠ刺激对细胞内MOR蛋白表达的影响。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8,n=6)和流式细胞术(n=3)分析外源性MOR激动剂(DAMGO)和特异性MOR拮抗剂甲基纳曲酮(MNTX)对IGFⅠ致乳腺癌细胞增殖的影响。采用Western印迹法(n=3)检测MOR不同活化状态下,IGFⅠ下游蛋白激酶B(Akt)通路的激活水平。结果Western印迹法结果显示,以20、100、1 000μg/L不同质量浓度IGFⅠ刺激24h,IGFⅠ为20和100μg/L时MOR蛋白的相对表达水平均显著高于对照组(P值均<0.01),在IGFⅠ质量浓度为100μg/L时作用最显著。以100μg/L IGFⅠ刺激MCF-7细胞15和30min,以及1、6、12和24h,刺激15 min时MOR蛋白的表达水平即开始升高,刺激30min和1、6、12、24h时均显著高于对照组(P值分别<0.05、0.01),在刺激6h时作用达到高峰。流式细胞术检测细胞周期的结果显示,采用100μg/L IGFⅠ刺激MCF-7细胞24h后,处于增殖期的细胞数量显著多于对照组(P<0.01);采用10μmol/L DAMGO预处理2h后再与IGFⅠ共同刺激24h,处于增殖期的细胞数量进一步增多,显著高于对照组和IGFⅠ单独刺激组(P值均<0.01);而DAMGO单独刺激组处于增殖期的细胞数量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8检测细胞活力的结果与细胞周期的检测结果一致。此外,MCF-7单独用1μmol/L MNTX预处理2h,细胞活力与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);MNTX预处理2h后再与IGFⅠ共同刺激,细胞活力与IGFⅠ单独刺激组相比差异无统计学意义(P>0.05);但在DAMGO与MNTX同时预处理2h后再给予IGFⅠ,细胞活力显著低于IGFⅠ与DAMGO联合刺激组(P<0.01)。Western印迹法检测结果显示,采用100μg/L IGFⅠ刺激MCF-7细胞24h后,磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平显著高于对照组(P<0.01);10μmol/L DAMGO预处理2h后再给予100μg/L IGFⅠ刺激24h,p-Akt的表达水平显著高于IGFⅠ单独刺激组(P<0.01);MCF-7细胞单独用DAMGO或MNTX预处理2h,p-Akt的表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P值均>0.05);DAMGO和MNTX同时预处理2h后再给予IGFⅠ,其p-Akt的表达水平显著低于IGFⅠ与DAMGO联合刺激组(P<0.05)。结论IGFⅠ能够上调人乳腺癌细胞中MOR的表达,活化高表达的MOR能够提高Akt信号通路在IGFⅠ作用下的激活水平,促进IGFⅠ致MCF-7细胞增殖的作用,该作用可以被MOR特异性拮抗剂所阻断。

沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法取A549细胞株,分为对照组、实验组,分别转染si-NC阴性对照、OGFR特异性的小干扰RNA。采用RT-qPCR和Westernblotting法分别检测细胞中的OGFRmRNA和蛋白,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,实验组OGFRmRNA及蛋白相对表达量低,培养24、48、72 h细胞增殖OD值均低,穿膜细胞数少,细胞迁移率低,克隆形成细胞集落数少(P均<0.05)。结论沉默OGFR基因可降低A549细胞株OGFR基因mRNA和蛋白质的表达,在体外减弱了其增殖、迁移和侵袭能力。

阿片类生长因子受体假基因1靶向miR-665对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨阿片类生长因子受体假基因1(OGFRP1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法选取120例卵巢癌患者癌组织及正常卵巢组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测OGFRP1和miR-665表达水平;将A2780细胞分为空白(PBS)组、si-NC组、si-OGFRP1组、miR-NC组、miR-665组、si-OGFRP1+anti-miR-NC组、si-OGFRP1+anti-miR-665组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测OGFRP1和miR-665的靶向关系。结果与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中OGFRP1表达水平升高(2.75±0.27 vs 1.00±0.09),miR-665表达水平降低(0.51±0.05 vs 1.00±0.08)(均P<0.05)。抑制OGFRP1表达或过表达miR-665后,卵巢癌A2780细胞的活性、细胞迁移与侵袭数均降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,OGFRP1靶向调控miR-665;抑制miR-665和OGFRP1表达后,卵巢癌A2780细胞活性升高,迁移、侵袭细胞数增加(P<0.05)。结论抑制OGFRP1表达可抑制卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调miR-665有关。

阿片生长因子及其受体抗肿瘤机制研究进展

阿片生长因子作为一种内源性阿片肽,不仅可调节细胞更新、伤口愈合、血管形成及发育等活性和功能,而且因其与特异性受体结合可产生的抗肿瘤作用,所以其抗肿瘤作用日益受到重视。它具有持续表达、自分泌、抑制肿瘤细胞增殖的功能。其抑制细胞生长具有立体定向、无细胞毒性、诱导非凋亡、非固着依赖、依赖RNA和蛋白合成等特点,在生理浓度发挥生物学活性。阿片生长因子及其受体抗肿瘤分子机制多种多样,例如它可抑制肿瘤细胞DNA合成,通过多种通路产生抗肿瘤作用,并在动物实验及临床应用方面取得了突破性进展,既可以作为一种主要疗法单独治疗肿瘤,又可以联合其他药物治疗肿瘤,临床上有广阔的应用前景。

μ受体在抗神经生长因子抗体减轻大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价μ受体在抗神经生长因子抗体（anti-NGF）减轻大鼠骨癌痛中的作用.方法 实验一健康雌性SD大鼠60只,体重200～220 g,随机分为4组（n=15）：假手术组（S组）、假手术＋anti-NGF组（SN组）、骨癌痛组（P组）和骨癌痛＋anti-NGF组（PN组）.P组和PN组于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μl Walker256乳腺癌细胞（1×105个）制备骨癌痛模型;S组和SN组于左侧胫骨上段注射PBS 10μl.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,SN组和PN组鞘内注射anti-NGF 10μg（用生理盐水稀释至10μl）,S组和P组鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定自发缩足次数（NSF）、热缩足潜伏期（PWL）和机械性痛阈（PWT）.肿瘤细胞接种后21 d时,处死大鼠,取L4.5段脊髓背角和背根神经节,测定μ受体及其mRNA的表达.实验二健康雌性SD大鼠30只,体重200～220 g,随机分为2组（n=15）：骨癌痛＋anti-NGF组（PN组）和骨癌痛＋纳洛酮＋anti-NGF组（PNN组）.于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μlWalker256乳腺癌细胞（1×105个）制备骨癌痛模型.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,PN组鞘内注射鞘内注入anti-NGF 10μg（生理盐水稀释至25μl）;PNN组鞘内注射纳洛酮10μg（生理盐水稀释至25μl）,0.5 h后,鞘内注射anti-NGF 10μg（生理盐水稀释至25 μl）,2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定大鼠NSF、PWL和PWT.结果 实验一与S组比较,SN组NSF、PWL和PWT差异无统计学意义,SN组和PN组μ受体及其mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）,P组和PN组瘤细胞接种后13～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低,P组μ受体及其mRNA表达下调（P＜0.05或0.01）;与P组比较,PN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF减少,PWL延长,PWT升高,μ受体及其mRNA表达上调（P＜0.05或0.01）.实验二与PN组比较,PNN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低（P＜0.05或0.01）.结论 anti-NGF减轻大鼠骨癌痛与μ受体的激活有关.