太行菊的性状及显微鉴别研究

目的研究太行菊的性状和显微特征,为其原植物鉴别和药材质量标准提供参考。方法采用性状及显微鉴定方法对太行菊根、茎、叶柄的横切面及粉末的显微特征进行研究。结果太行菊的茎细圆柱状,弧状弯曲;叶二回羽状全裂,末回裂片狭窄;头状花序总苞浅盘状,具舌状花和管状花,冠毛芒片状且全部集中在瘦果背面顶端。根、茎及叶柄横切面可见油管,非腺毛呈T型,可见鞋底状腺鳞;花粉粒近球形,外壁表面具刺状突起,具3孔沟。结论获得了太行菊的性状及显微特征,可为其物种鉴别和药材质量标准制订提供依据。

太行菊不同器官中绿原酸和4种黄酮类物质含量研究

为深入研究我国特有植物太行菊,采用高效液相色谱法(HPLC),以ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×150 mm,5μm)为分析柱,甲醇-0.01%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温25℃;对太行菊和传统药用野菊不同器官的绿原酸、芦丁、槲皮素、木犀草素、芹菜素含量进行测定。此外,以芦丁为对照品,采用硝酸铝络合紫外分光光度法,以没食子酸为对照品,采用福林酚法,分别对太行菊和野菊不同器官中总黄酮和总多酚的含量进行研究。结果表明,基于上述HPLC检测方法,五种化合物的质量浓度在5.94～178.2、4.36～130.8、8.96～268.8、4.08～122.4、2.98～25.33 mg/L范围内与峰面积线性关系良好,相关系数r均大于0.9993,方法的精密度、重复性、稳定性及平均加样回收率试验结果均满足分析要求。太行菊叶中五种化合物的总含量高于其花、茎和野菊对应器官,与太行菊和野菊不同器官中总黄酮和总多酚含量分析结果一致。因此,太行菊整个植株,尤其是叶和花的开发利用潜力显著。

太行菊的生物学特性及保护利用

于2010～2011年调查了河南省焦作市云台山风景区、新乡辉县、山西省陵川县太行菊的生长环境及地理分布,根据其生境特点,分析了太行菊生物学特性和应用价值,并提出了合理化的保护措施和开发利用建议。

太行菊SRAP-PCR反应体系的建立与优化

相关序列扩增多态性(SRAP)是一种新发展起来的分子标记技术,在太行菊中还未见相关的报道。为建立优化适合太行菊SRAP分析的扩增体系,以太行菊DNA为模板,对影响SRAP-PCR反应体系的5个重要参数设置梯度进行单因素实验分析,以确定最佳的反应条件。经过大量的重复性实验确定了适合太行菊SRPA-PCR反应体系:20μL的反应体系中,模板DNA量50ng,1.25mmol/L的Mg2+浓度,0.5μmol/L的上下游引物,0.2mmol/L的dNTPs以及Taq酶1U。该体系在太行菊个体中均能扩增出清晰稳定的条带,为后续的太行菊遗传多样性分析奠定了基础。

太行菊和芙蓉菊花粉母细胞减数分裂过程

对太行菊和芙蓉菊花粉母细胞减数分裂过程进行了研究。结果表明:太行菊和芙蓉菊减数分裂过程基本正常,为同时型胞质分裂。减数分裂中期Ⅰ染色体基本构型为9个二价体,其中太行菊和芙蓉菊每个花粉母细胞(PMC)平均染色体配对构型分别为0.05Ⅰ+8.92Ⅱ+0.03Ⅳ和0.04Ⅰ+8.61Ⅱ+0.02Ⅲ+0.17Ⅳ;部分花粉母细胞后期Ⅰ和后期Ⅱ及末期Ⅰ和末期Ⅱ发现有染色体桥、落后染色体、微核及不同步分裂等减数分裂异常现象。

珍稀濒危植物太行菊遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对太行山特有濒危物种太行菊8个自然居群的遗传多样性进行了研究。用14条引物对8个居群的48个样品进行扩增,共得到149个扩增位点,其中多态性位点123个,多态性百分率(PPL)为82.55%。POPGENE分析显示,太行菊具有较高的遗传多样性[Nei’s基因多样性(H)=0.203 3,Shannon’s多样性指数(I)=0.323 0]。Nei’s遗传多样性分析表明,8个自然居群间出现了较高的遗传分化(基因分化系数Gst=0.275 2,基因流Nm=1.316 6)。生境的的片段化和基因流障碍可能是导致太行菊居群间遗传分化显著的主要原因。

珍稀濒危植物太行菊遗传多样性的SRAP分析

本研究利用SRAP分子标记技术对太行山特有濒危物种太行菊11个自然居群的遗传多样性进行研究。采用10对引物对11个居群的151个样品进行扩增,共得到90个扩增位点,其中多态性位点73个,多态位点百分率(PPL)为81.11%。POPGENE分析显示,太行菊具有较高的遗传多样性(H=0.205 9,I=0.325 6)。Nei's遗传多样性分析表明,11个自然居群间出现了较高的遗传分化(基因分化系数Gst=0.274 9,基因流Nm=1.318 8)。生境的片段化和基因流障碍可能是导致太行菊居群间遗传分化显著的主要原因。通过对太行菊居群遗传多样性的研究,可为有效保护太行菊提供理论依据。

太行菊提取物对乙型肝炎病毒的抑制作用

目的研究太行菊Opisthopappus taihangensis和野菊花Dendranthema indicum不同部位、不同浓度水提取物对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用。方法提取并配置不同浓度的太行菊和野菊花的花和茎部位的水提取液,分别以拉米夫定(3TC)和绿茶提取物(GTE)作对照,采用酶联免疫反应检测太行菊花和茎提取物对HBs Ag、HBe Ag的抑制作用,采用实时定量PCR检测不同浓度提取物对HBV复制过程中HBV RNA的影响,荧光素酶报告基因检测不同提取物对HBV转录的影响。结果酶联免疫反应结果表明,1μg/m L太行菊茎提取物能够在作用48、96 h时抑制HBs Ag和HBe Ag,而1μg/m L野菊花茎提取物只能在作用48 h时抑制HBs Ag和HBe Ag;0.1μg/m L太行菊花提取物与1μg/m L野菊花花提取物对HBs Ag和HBe Ag的抑制作用相当。荧光素酶报告基因检测结果说明,太行菊花和茎提取物相对野菊花和茎提取物对HBV启动子质粒CP有抑制作用。PCR结果显示,太行菊花和茎提取物在低浓度时对HBV RNA合成具有一定的抑制作用。结论太行菊水提取物和野菊花提取物都能够不同程度抗HBV,但太行菊效果优于野菊花。

C_2H_5OH-(NH_4)_2SO_4双水相萃取太行菊总黄酮及其抑菌活性

试验优化了太行菊总黄酮(FFO:Flavonoids from Opisthopappus taihangensis)双水相萃取体系并研究其抑菌活性。超声波辅助C_2H_5OH-(NH_4)_2SO_4双水相萃取FFO,依据Design-Expert8.0(Box-Benhnken)试验设计原理,以总黄酮萃取率为响应值进行方差分析,获取多元二次线性回归方程;采用K-B纸片扩散法测定6种供试菌种的抑菌圈直径,对比MIC和MBC确定其抑菌活性。23 g/mL C_2H_5OH-17 g/mL (NH_4)_2SO_4双水相萃取体系下FFO萃取率最高。响应面试验方差分析表明,pH和NaCl的浓度对萃取率的影响差异显著;最优双水相萃取体系:pH7.76、粗提液质量分数是19.35%、NaCl质量分数为2.38%,萃取率Y极大值为96.68%(P=0.994);FFO对枯草芽孢杆菌抑制作用最强,高剂量作用下抑菌率可达98.57%,MIC为1.56 mg/mL;对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用次之,对青霉和黑曲霉抑制作用最弱。