金边土鳖虫(Opisthoplatia orientalis Burmister)提取物抗癌作用的实验研究

金边土鳖虫为民间方药,主治筋骨折伤、腹部肿块、经闭、瘀血腹痛等,并具有抗癌活性.两年来,我们在对金边土鳖虫的抗癌作用研究中,进行了体外（艾氏腹水癌）培养和小鼠艾氏腹水癌、S180、肝癌实体等动物移植性肿瘤的试验,现将初步结果报导如下.一。

金边地鳖血淋巴的活性成分及其对SGC-7901胃癌细胞抑制作用

为药用昆虫金边地鳖的深入开发利用提供参考,采用荧光染色法与气相色谱-质谱(GC-MS)法相结合,探究金边地鳖血淋巴的活性成分及其对SGC-7901胃癌细胞活力的抑制作用。结果表明:金边地鳖血淋巴对SGC-7901胃癌细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈时间与浓度的依赖关系;金边地鳖血淋巴脂溶性成分主要为脂肪酸类物质,从中分离出21种化合物,占其总量的64.814%。

土鳖虫的本草考证

在系统查阅古今文献的基础上,对土鳖虫的名称、基原、功效主治、炮制方法及用药禁忌进行全面考证,以期为土鳖虫的正本清源及进一步资源开发利用提供参考。土鳖虫的基原为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga sinensis Walker及冀地鳖Steleophaga plancyi (Boleny)雌虫的干燥体,金边土鳖Opisthoplatia orientalis Burm在广东省作为土鳖虫习用品入药。土鳖虫功专破血逐瘀,炮制以“火制法”为主,入药部位有使用全体、去足、去头足的不同,无瘀血停留或体虚有瘀之人慎用,孕妇禁用。

金边土鳖中3种核苷类成分质量控制方法研究

目的：建立不同产地金边土鳖中3种核苷类成分定性鉴别与含量测定方法,为金边土鳖质量标准的制订提供实验参考。方法：采用薄层色谱法（TLC）对金边土鳖中尿嘧啶和次黄嘌呤进行定性鉴别;采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定金边土鳖中尿嘧啶、尿囊素和次黄嘌呤3种核苷类成分,以Waters Spherisorb？STAR NH2（5μm,4.6 mm×250 mm）为色谱柱,以乙腈-水（95∶5）为流动相,等度洗脱,在柱温为30℃、波长为205 nm条件下,以0.8 m L·min-1的流速进行测定。结果：14批金边土鳖TLC色谱中尿嘧啶和次黄嘌呤斑点清晰、分离度好,可用于金边土鳖的定性鉴别;尿嘧啶、尿囊素和次黄嘌呤分别在0.1014-0.5410μg（r=0.9995）、0.0365-0.2920μg（r=0.9997）、0.0429-0.2385μg（r=0.9996）线性范围内线性关系良好;平均回收率分别为101.20%（RSD=1.60%）、101.47%（RSD=2.10%）、101.92%（RSD=3.40%）（n=9）。结论：所建立的3种核苷类成分定性定量分析方法操作简便、重复性好。

金边土鳖4种工艺样品对大鼠血液流变性及凝血功能的影响

目的对比研究金边土鳖4种工艺样品对正常大鼠、急性寒凝血瘀模型大鼠、热毒血瘀模型大鼠血液流变性及凝血功能的影响。方法以全血比黏度和APTT、PT、TT、FIB为指标,观察采用水煮、匀浆、冷浸、粉碎4种不同工艺制备的金边土鳖样品对正常大鼠、急性寒凝血瘀模型大鼠、热毒血瘀模型大鼠血液流变性和凝血功能的作用。结果与正常对照组比较,金边土鳖匀浆样品、冷浸样品、粉碎样品明显降低正常大鼠全血比黏度,延长APTT、TT时间,降低FIB含量。对急性寒凝血瘀模型,金边土鳖4种工艺样品均显著降低模型大鼠全血比黏度,延长APTT、TT时间,降低FIB含量。对热毒血瘀模型造模,金边土鳖4种工艺样品亦可明显降低模型大鼠全血比黏度,延长APTT、TT时间,降低FIB含量。结论金边土鳖4种工艺样品均有较好的活血化瘀作用,可明显改善大鼠血液流变性及凝血功能。

基于ICP-MS法的不同产地金边土鳖中无机元素的分析

目的:测定金边土鳖药材中无机元素的含量。方法:以浓硝酸为溶剂,结合微波消解处理金边土鳖样品,经过电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)仪器条件的优化,进行方法学考察,并测定了14批不同产地金边土鳖中无机元素的含量;采用统计学软件SPSS 22.0对数据进行相似度评价与聚类分析。结果:23种待测元素的线性关系良好(r≥0.995),重复性试验均RSD≤9.74%,稳定性试验均RSD≤7.81%,精密度试验均RSD≤8.24%,加样回收率在94.87%~111.18%,均RSD≤5.85%;测定了不同产地金边土鳖中23种无机元素的含量,其中Na、Mg、Ca、Zn、Al等元素含量较高,重金属元素Pb、Cd、As、Cu均检出,Hg部分样品未检出,建立了金边土鳖无机元素特征图谱,相似度评价与聚类分析结果一致。结论:该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点,可为金边土鳖中无机元素的快速分析、有效性、安全性评价及其质量标准的制定提供技术支持和科学依据。

膜分离技术在金边土鳖活性成分分离中的应用

目的探索振动膜分离技术在金边土鳖活性成分分离的工艺条件。方法以金边土鳖匀浆液为研究对象,对匀浆液特性进行研究,以活性成分转移率、固形物清除率及膜通量为考察指标,评价振动膜应用的可行性。结果确定最佳膜分离条件:30℃的匀浆液原液、0.35 MPa操作压力、振幅5 mm、截留相对分子量4万,活性成分转移率达到88%,除杂率达到50%。结论膜分离技术适合用于金边土鳖活性成分分离纯化的生产中。

地鳖和金边土鳖的色谱及分子生物学鉴别研究

目的通过色谱及分子生物学建立地鳖和金边土鳖的鉴别方法。方法运用薄层色谱及基于线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)的DNA条形码对地鳖和金边土鳖进行鉴别。结果金边土鳖样品薄层色谱均有3个红色斑点,而有一批地鳖样品色谱在相应位置也有2个红色斑点,薄层色谱方法难以区分两者;地鳖与金边土鳖的DNA条形码通过基因数据库进行结果判定,比对结果与各批样品对应物种相同,成功区分两者。结论本研究建立的DNA条形码方法准确、稳定、重现性良好,为鉴别地鳖和金边土鳖提供科学可靠的方法。

金边土鳖HPLC指纹图谱及氨基酸含量测定

目的：建立金边土鳖氨基酸HPLC指纹图谱分析方法,并同时定量分析了6种氨基酸成分,为制订金边土鳖的质量标准提供参考。方法：采用异硫氰酸苯酯（PITC）-高效液相色谱（HPLC）柱前衍生化法,以Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm,5μm）为色谱柱;流动相A为0.1 mol·L^-1乙酸钠（p H 6.5）-乙腈（95∶5）,B为乙腈-水（4∶1）;检测波长254 nm;流速0.8 m L·min^-1梯度洗脱;柱温40℃。采用＂中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）＂和SPSS 22.0软件分别对其进行相似度评价和聚类分析。结果：初步建立了金边土鳖游离氨基酸HPLC指纹图谱共有模式,确定了21个共有峰,并指认了13种氨基酸成分;综合14批金边土鳖相似度分析、聚类分析和定量分析,结果显示相似度分析和聚类分析基本一致,且发现精氨酸含量的高低可能与产地有一定的关系。结论：建立了金边土鳖HPLC指纹图谱分析方法,可较全面反映该药材中氨基酸成分的信息,为金边土鳖药材鉴定和质量标准的制订提供参考。

金边土鳖蛋白多肽类成分匀浆提取工艺优选

目的:优选金边土鳖蛋白多肽类成分的匀浆提取工艺条件。方法:以金边土鳖中蛋白多肽类成分的含量为评价指标,采用单因素试验结合正交试验设计法,考察匀浆转速、溶剂用量、提取时间、提取次数对匀浆提取工艺的影响,筛选出最佳的提取工艺条件。结果:最佳匀浆提取工艺为:匀浆提取3次,每次加入6倍量0.9%NaCl溶液,10000r/min高速匀浆后,匀浆液置恒温振荡器中震荡提取3次,每次分别加入6倍量0.9%NaCl溶液,提取1.0h。结论:优选的提取工艺简单、稳定、可行。