改良Optisol角膜保存液保存兔角膜内皮细胞超微结构的观察

为提高角膜移植供体质量,我院自1996年起对Optisol保存液进行研究,对其成分进行改良称改良Optisol保存液,并对其保存兔角膜内皮细胞的超微结构进行观察.现总结如下.

Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞的保护作用

目的:研究Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞的保护作用。方法:采用4℃湿房保存方法保存离体兔眼球,设立房水对照组、Optisol中期保存液房水置换组,每组10只眼球。于低温保存开始前、保存后24,48及72h检测角膜厚度、角膜内皮细胞密度及形态,保存后72h取下角膜行胎盘蓝-茜素红染色,检测角膜内皮细胞存活率。结果:4℃湿房保存开始前两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异没有统计学意义(P>0.05)。保存后24h两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异没有统计学意义(P>0.05);保存后48h及72h两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异有统计学意义(P<0.05)。保存后72h房水对照组角膜内皮细胞存活率为(55±5.81)%,Optisol中期保存液房水置换组角膜内皮细胞存活率为(87.16±3.64)%,两组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论:Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞活性有保护作用,可以提高湿房保存法的效率,延长有效保存时间至72h。

自制人血清中期角膜保存液对兔角膜的保存效果

目的研制一种适合我国国情的人血清角膜中期保存液。方法配制人血清浓度分别为10%（A组）、20%（B组）、30%（C组）、0%（D组）的角膜保存液保存兔角膜,用Optisol-GS角膜保存液作对照组,分别在保存第3、7、10、14天进行角膜内皮细胞活性率检测、HE染色、扫描电镜超微结构观察,并检测角膜保存液的理化性质及生物安全性。结果兔角膜保存至第14天时,C组角膜内皮细胞活性率与对照组比较差异无明显统计学意义（P〉0.05）,C组被保存的角膜组织病理学和超微结构与对照组Optisol-GS比较无显著差异。各组血清角膜保存液理化性质稳定,无生物危险性。D、A、B组与对照组比较,角膜内皮细胞活性率分别在保存第3、7、10天时差异具有明显的统计学意义（P〈0.05）;角膜组织病理学比较,在保存第7天,各实验组与对照组无明显差异,随着时间延长,D、A、B组先后依次出现组织病理学改变;超微结构比较,在保存第7天时,D组与C组及对照组具有明显差异。结论 30%浓度的人血清角膜保存液具有良好的兔角膜保存效果,其理化性质稳定且安全,可保存兔角膜7~10 d。

角膜中期保存液添加bFGF的质量浓度分析

目的研究角膜中期保存液中bFGF的不同质量浓度对保存角膜细胞活性的影响。方法配制角膜中期保存液，将其按所添加的bFGF的质量浓度分为0．1、1、10、20、50、100．g／ml 6个组；每组中期保存液随机保存6片新西兰大白兔角膜（4℃）；在保存3、5、7d分别取角膜片行30～34℃2h复温，台盼蓝-茜素红联合染色检测角膜内皮细胞活性；原位末端标记TUNEL法免疫荧光检测保存角膜细胞凋亡。结果保存角膜各组角膜内皮细胞活性率随保存时间延长而明显下降，TUNEL阳性细胞数明显增加（P〈0．01）；bFGF质量浓度为10、20、50ng／ml组角膜内皮细胞活性率较高，TUNEL阳性细胞数较少，3个组比较差异无统计学意义（P〉0．05），而与0．1、1、100ng／ml 3个组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论免角膜中期保存液中添加bFGF的质量浓度以20～50ng／ml为宜。

新型角膜中期保存液

本文对继Ｋ液以后发展起来的４种角膜中期保存液（ＣＰＴＥＳ液、ＣＳＭ液、Ｄｅｘｓｏｌ液，Ｏｐｔｉｓｏｌ液）的保存机理、成分、保存效果的研究进行了综述。这些保存液由于硫酸软骨素的加入使保存时间延长，并有效地维持正常角膜厚度及内皮细胞的活性。

角膜中期保存液成分的研究进展

自ＭＫ液问世以来，角膜中期保存法一直为美国眼库最常用的角膜活性保存方法。随着保存液成分的改进，对角膜内皮细胞活性的保存效果逐渐提高。对有关角膜保存液的组成成分的研究进行综述，重点介绍基础液、高分子物质、抗生素、抗氧化剂等在保存液中的意义和研究进展。

院制角膜保存液中添加表皮生长因子和纤维连结蛋白的实验研究

目的:通过动物实验以添加表皮生长因子(EGF)和纤维连结蛋白(FN)改善院制中期角膜保存液的功效。方法:用角膜保存液Optisol和CSM相对照,通过对离体猪角膜内皮细胞计数和角膜厚度测量,研究不同浓度的EGF和FN对该角膜保存液的效果。结果:在各试验组中,15μg/mlEGF+15μg/mlFN组效果最佳,但逊于Optisol和CSM角膜保存液。结论:EGF和FN协同作用改善了角膜保存液的效果,基本能够达到手术需要。

简化K液保存角膜的动物实验

用未除去小分子的纯化硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate,CS)配成简化K 液,(SimplifiedK-Solution,SK 液),保存兔角膜。对保存后的角膜和用此角膜作角膜移植手术后的角膜植片进行电镜和角膜厚度观察。以MK 液作对照。结果表明,术后短期内SK 液组植片的水肿消退较MK 液组者快,内皮细胞密度也较高。说明SK 液保存的角膜在移植手术后其功能恢复较MK 液者快。

软性角膜接触镜保存液中微生物污染调查

为了解软性角膜接触镜（ＳＣＬ）保存液中微生物污染情况，对９６名ＳＣＬ配戴者使用的保存液进行检测。结果，９６瓶保存液中８２瓶有细菌生长，２１瓶同时有真菌生长；分离出的２０２株细菌中１６８株（８３．１７％）为革兰氏阴性菌；有１６瓶（１６．６７％）检出阿米巴，其中４瓶（４．１７％）鉴定为棘阿米巴；阿米巴阳性保存液中微生物污染率和平均菌株检出数均高于阿米巴阴性保存液。提示，阿米巴阳性保存液更有利于微生物生长；有污染的保存液总体上为不洁保存液，应严格配液，加强消毒；氧氟沙星及硫酸庆大霉素和头孢甲肟有较好杀菌效果，可供临床参考。

碱性成纤维细胞生长因子联合透明质酸钠对角膜保存液中内皮细胞的作用

背景:作者前期将透明质酸钠和碱性成纤维细胞生长因子分别加入基础培养基,制成改良角膜保存液并证实其对角膜内皮细胞活性的保存作用。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠在角膜中期保存液中的作用及其有效浓度,评价该两种物质联合对角膜内皮细胞的保护作用。方法:在以基础培养基MEM、M-199为主要成分,添加6%葡聚糖、HEPES缓冲系、抗生素等制成角膜保存液的基础上,加入不同浓度的透明质酸钠和碱性成纤维细胞生长因子,并设立未加透明质酸钠及碱性成纤维细胞生长因子的对照组。各组于4℃下保存新西兰大白兔角膜片,于3,5,7,10,14d,行裂隙灯检查、锥虫蓝-茜素红染色、角膜组织病理切片及扫描电镜观察检测角膜内皮细胞活性,评价保存质量。结果与结论:加入碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠的中期角膜保存液保存的角膜片其透明度、内皮细胞活性、显微结构、超微结构均明显优于未加组,各实验组同期比较,浓度较高组效果优于浓度较低组。碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠同时加入基础保存液中能够对角膜内皮细胞进行有效的保护,其效果与浓度有关。

DX保存液与甘油保存液对人角膜基质透镜保存效果的比较

目的比较DX保存液与甘油保存液对人角膜基质透镜的保存效果。方法收集2019年2—5月于山东第一医科大学附属青岛眼科医院在飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中取出的中高度近视患者30例60眼的完整角膜基质透镜标本,采用随机数表法将标本分为正常对照组、DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组,每组10个标本。采用锥虫蓝染色法检测不同保存方法角膜基质透镜细胞死亡数;光学显微镜下观察角膜基质透镜形态结构的完整性;透射电子显微镜下观察保存的角膜基质透镜超微结构。结果DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组细胞死亡数分别为(53.1±14.2)、(50.8±9.8)、(70.4±13.6)、(172.8±31.7)和(182.8±14.2)个/视野,总体比较差异有统计学意义(F=16.37,P<0.05);DX保存液保存1 d组与DX保存液保存1周组角膜基质透镜死亡细胞数量差异无统计学意义(P>0.05);甘油保存1 d组细胞死亡数明显少于甘油保存1周组和甘油保存2周组,甘油保存1周组死亡细胞数明显多于DX保存液保存1周组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组角膜基质透镜胶原纤维排列规则;DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织胶原纤维排列较整齐,细胞较完整,甘油保存1 d组角膜基质组织水肿,细胞核裸露,随着甘油保存时间的延长,组织内胶原纤维逐渐变疏松。透射电子显微镜下可见DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织紧密,胶原纤维致密,细胞核完整;甘油保存1周组细胞分布稀疏,细胞结构不完整,甘油保存2周组细胞分布明显稀疏,细胞结构破坏。结论人角膜基质透镜用DX保存液保存1周可有效保存角膜基质组织和维持细胞结构。DX保存液对角膜基质透镜的保存效果优于甘油保存液。

器官培养角膜保存法保存兔角膜的观察研究

目的 观察器官培养角膜保存法保存角膜活性的效果 ,探讨该方法临床应用的可行性。方法 兔角膜 2 8只 ,分为两组 ,实验组 16只眼 ,对照组 12只眼。实验组用 31℃器官培养液保存 ,对照组用K 液 4℃保存。两组中每 4只角膜分别保存 3、7、14d。实验组 4只角膜保存 14d后移入运输液中培养 3d。保存前测角膜厚度 ,做内皮细胞形态学检查和台盼蓝染色。保存后不同时间做相同检查和茜素红染色 ,并用透射电镜观察角膜内皮细胞超微结构。在取出角膜前从所有保存瓶抽取保存液样本做细菌和真菌的培养。临床应用器官培养保存 1周的角膜行穿透性角膜移植术 1例。结果 实验组和对照组角膜内皮细胞形态、活性率 1周后差异有显著性。 2组角膜厚度差异有显著性。透射电镜检查 ,实验组 7d和 14d角膜内皮细胞超微结构完整。对照组 7d后线粒体肿胀 ,14d可见细胞结构破坏。穿透性角膜移植术临床病例随访 2年 ,角膜移植片基本透明。结论 器官培养液保存角膜的效果确切 ,活性保存时间明显长于K 液保存。

远程投送对中期保存兔角膜内皮细胞的影响

目的:探讨模拟运输状态下机械振动对中期保存角膜内皮细胞(CEC)活性的影响。方法:DX中期保存液保存兔角膜片7d,实验室用摇床模拟远程运输环境,按作用不同时间、不同振动强度进行分组,分别进行CEC活性染色和CEC酶组织化学染色,对比不同组间模拟运输对角膜内皮的影响。结果:实验条件下观察指标并不随振动强度和时间变化,组间各项指标差异无显著性。结论:实验室模拟远程投送对中期保存兔CEC无明显影响。

角膜保存的进展

角膜保存的进展刘华综述冯春茂陈家祺审校（中山医科大学中山眼科中心广州５１００６０）角膜保存的目的是为了医生按计划施行角膜移植手术，做好充分的术前准备，避免由于种种原因而造成的角膜浪费。从理论上看，理想的角膜保存方法应该是用最简单的技术，保持角膜组织最...

角膜保存进展

在致盲性眼病中,角膜病居首位。据世界卫生组织(WHO)1991年的统计,世界上约有2700～3500万盲人,其中因角膜病和眼外伤所致的角膜盲约有1000万人左右,以目前的医疗手段,帮助角膜盲患者恢复视力的主要手段是依靠角膜移植手术。而建立有效的眼库,随时为临床角膜移植提供优质供体材料是关键所在。

角膜中期保存液的研制和临床应用

目的 研制一种适合我国眼库使用的保持角膜活性的中期保存液。方法 配制新的角膜活性中期保存液 (DX液 ) ,按不同天数保存兔角膜植片 ,分别进行角膜内皮细胞活性率、酶组织化学联合染色及超微结构观察 ,并将在DX液中保存 2～ 11d的 37只人眼角膜植片应用于临床穿透性角膜移植手术中。结果 兔实验结果显示 ,DX液与Optisol液差异无显著性 (P >0 0 5 )。 37只人眼角膜植片术后 1周内全部透明 ,内皮细胞密度均值为 (2 2 0 4 5 6± 6 89 5 6 )个 /mm2 。结论 DX液作为我国眼库角膜活性中期保存液安全可靠。