一株猪源optrA阳性屎肠球菌的分离鉴定及基因组特征分析

为了调查湖南浏阳地区某生猪养殖场屎肠球菌的耐药情况及耐药基因可能存在的传播机制,从浏阳地区某猪场中采集不同生长阶段猪只肛拭子以及环境样本共345份,从中分离鉴定出76株肠球菌,其中屎肠球菌1株(1.3%),采用琼脂扩散法考察屎肠球菌对10种抗菌药物的耐药情况,并对该菌株进行全基因组测序,检测其耐药基因和毒力基因的分布情况,最后对optrA特定基因组结构进行分析。结果显示,从猪只肛拭子样本分离的编号Ec63菌株,经全基因组测序组装、拼接,得到一条大小为2759403 bp的环状DNA(GC含量为37.9%),携带9大类抗菌药的10种耐药基因,均定位于染色体上,其中氨基糖苷类耐药基因数量最多,且携带有噁唑烷酮类耐药基因optrA;此外,该菌株携带sagA等毒力基因21个,不含有强毒菌株的毒力基因序列。药物敏感性试验结果表明,该菌株对头孢噻呋、四环素呈现高度耐药,对恩诺沙星、万古霉素、红霉素、庆大霉素、头孢西丁、氟苯尼考、利奈唑胺和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感。特定基因组结构分析显示,该菌株存在fexA-optrA核心遗传环境。结果表明,该菌株对机体表现弱毒力的潜力,但存在多耐药性(MDR)基因,是一株多重耐药屎肠球菌。fexA-optrA的基因遗传环境在屎肠球菌耐药传播中起着重要作用,对公共卫生安全具有潜在威胁。本研究结果可为屎肠球菌在养殖业中的应用提供参考依据。

宠物医院犬猫源肠球菌的耐药性检测及其耐药基因optrA的流行特征分析

为了解吉林地区宠物源肠球菌的耐药情况和噁唑烷酮类耐药基因optrA在宠物源肠球菌中的流行分布特征,本研究对来自长春市和吉林市4家宠物医院的200份宠物肛门拭子样品,利用肠球菌琼脂培养基进行细菌的分离,利用16S rRNA基因的PCR扩增及测序进行菌种的鉴定,采用琼脂稀释法对11类13种抗菌药物进行药敏试验,利用PCR检测酰胺醇类耐药基因fexA、fexB和噁唑烷酮类耐药基因cfr、optrA,并对携带optrA基因的菌株进行全基因组测序。结果显示,本研究分离到96株肠球菌;药敏试验结果显示,宠物源肠球菌对克林霉素、四环素、沃尼妙林、庆大霉素和红霉素耐药严重,耐药菌株分别占87.5%、76.0%、72.9%、65.6%和55.2%,其次对环丙沙星、青霉素、氨苄西林和利福平耐药的菌株分别占33.3%、24.0%、20.8%和12.5%,对氟苯尼考耐药的菌株相对较少,占5.2%,检测到1株对万古霉素耐药的屎肠球菌,未检测到对利奈唑胺和替加环素耐药的菌株。PCR检测到3株同时携带optrA及fexA耐药基因的粪肠球菌,且其均呈多重耐药性。对携带optrA基因肠球菌的全基因组测序结果显示,3株粪肠球菌分别为ST376型(n=2)和ST16型(n=1),且不同ST型的粪肠球菌携带的耐药基因存在显著差异,optrA基因常与fexA、tet、isaA等耐药基因协同传播。研究表明optrA基因在宠物源肠球菌中已经存在一定程度的流行,且人与宠物接触密切,易造成耐药菌在两者之间的传播,应加强对宠物源肠球菌耐药性的监测。

恶唑烷酮/酰胺醇类耐药基因optrA研究进展

耐药基因optrA能够介导细菌对酰氨醇类抗生素如氯霉素、氟苯尼考和恶唑烷酮类抗生素如利奈唑胺、特地唑胺的耐药性。酰氨醇类药物是畜牧养殖业中用于预防和治疗细菌感染的主要抗生素;恶唑烷酮类药物则是人医临床上治疗多重耐药阳性菌株的最后一道防线。本研究综述了自2015年恶唑烷酮/酰胺醇类耐药基因optrA发现至今的相关文献资料,以期对optrA的研究进展作出总结。

新疆阿克苏地区猪场optrA/lsa(E)阳性粪肠球菌的耐药情况及传播特点分析

【目的】了解新疆阿克苏地区猪源粪肠球菌中optrA和lsa(E)的流行及传播特点,并探明optrA和lsa(E)阳性粪肠球菌的耐药情况,为评估两个耐药基因对公共卫生的影响和危害提供科学依据。【方法】对新疆农业大学兽医药理学实验室分离保存的322株粪肠球菌采用PCR的方法进行optrA和lsa(E)筛查,根据CLSI推荐药物及方法采用琼脂稀释法测定optrA和lsa(E)阳性菌株对氨苄西林、红霉素、泰乐菌素、四环素、多西环素、利奈唑胺、氟苯尼考、万古霉素、左氧氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素和沃尼妙林的最小抑菌浓度(MIC)并进行耐药判定,利用PCR方法筛查相应的耐药基因,包括ermA、ermB、ermC、fexA、fexB、tet(K)、tet(L)、tet(M)、aac(6’)-le-aph(2")-Ia和cfr。选取31株不同来源的optrA和lsa(E)阳性粪肠球菌进行MLST分子分型和接合转移试验。【结果】共193株粪肠球菌检出optrA和/或lsa(E),其中38株optrA和lsa(E)共存,9株仅携带optrA,146株仅携带lsa(E)。这193株粪肠球菌对红霉素、泰乐菌素、四环素、多西环素、庆大霉素和沃尼妙林的耐药率均达到100%,虽然optrA检出率远低于lsa(E),但optrA阳性菌株总体耐药程度明显高于仅携带lsa(E)的菌株以及optrA、lsa(E)双阴性的菌株,其耐药基因的检出结果也呈现相同趋势。optrA和lsa(E)共存和仅携带optrA菌株的多重耐药谱集中在8耐和10耐,占比分别为84.6%和100.0%,而仅携带lsa(E)的菌株和optrA、lsa(E)双阴性菌株的多重耐药谱主要集中在6—8耐,占比为89.4%和90.7%。进一步分析optrA、lsa(E)与耐药性之间的关系发现,耐药较为严重的猪场optrA和lsa(E)的检出率也相对较高。耐药基因检出结果显示:193株菌均不同程度地携带ermB、ermC、tet(K)、tet(L)、tet(M)、aac(6’)-Ie-aph(2")-Ia、fex(A),并且optrA、lsa(E)共存的菌株及仅携带optrA菌株的耐药基因检出率总体上也高于仅携带lsa(E)的菌株和optrA、lsa(E)双阴性菌株。MLST和接合转移试验结果提示,optrA/lsa(E)菌株遗传环境复杂、可能既存在克隆传播又存在水平转移的现象。【结论】新疆阿克苏地区猪源粪肠球菌中optrA和lsa(E)的高携带率以及高耐药水平表明该地区耐药形势严峻,对当地生猪养殖业甚至于公共卫生安全都造成威胁,应及时采取措施以防控耐药性的进一步发展。

首次在副猪链球菌中发现噁唑烷酮耐药基因cfr(D)和optrA

噁唑烷酮类药物中的代表药如利奈唑胺和泰地唑胺是治疗多重耐药革兰氏阳性菌引起严重感染的"最后一道防线"药物。然而,近几年在动物和人源病原菌中发现的可转移的噁唑烷酮耐药基因,显著将低了该类药物在临床感染中的治疗效果。截止目前,已经发现了7个噁唑烷酮类耐药基因。

彩色网络激光打印机Lexmark optra c710

Lexmark Optra M410是向国内中低端企业应用市场推出的一款新型A4幅面单色网络激光打印机产品,该打印机扩展性能良好,网络接口和内存扩展都很方便。它的高性能为国内中小企业提供了出色的数字办公解决方案。

Lexmark OptraE210

一向以低价位策略进军打印机市场的Lexmark,继前一款OptraE310系列,相隔一年多又推出了这款命名为Optra E210的新一代产品,以更低的价位与更快的打印速度以打入低价激光打印机市场中.

一株同时携带optrA和cfrC基因的猪源多重耐药结肠弯曲菌的全基因组测序

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是一种世界范围内能引起胃肠炎的最常见食源性病原菌,对临床上重要的抗菌药物耐药越来越严重,对食品安全和公共健康造成重大威胁。【目的】研究一株同时携带optr A和cfr C基因的猪源结肠弯曲菌(Campylobactercoli)耐药表型和耐药基因,同时对该菌全基因组特征、毒力基因分布情况以及optr A和cfr C基因环境进行分析。【方法】采用琼脂平板稀释法进行最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)测定,并且对该菌进行全基因组测序。【结果】该菌株对四环素、克林霉素、阿奇霉素、氟苯尼考和利奈唑胺呈现高度耐药,对环丙沙星和庆大霉素敏感。全基因组测序得到一条大小为1436486 bp的环状DNA(GC含量为31.63%),携带四大类抗生素中共计12种耐药基因,均定位于染色体上,其中氨基糖苷类耐药基因数量最多。此外,携带包含黏附、侵袭和移动等相关毒力基因83个,其中与移动相关的毒力基因数量最多。对4个基因岛分析发现,基因岛GIs002和GIs003中含有耐药基因序列,cfr C位于基因岛GIs002上,与aph(3′)-Ⅲa相连,两侧与转座酶相连,optr A位于染色体上,在其上、下游两侧与插入序列integrase/IS607 family相连,转座酶和插入序列可介导耐药基因水平转移。【结论】本研究通过全基因组测序分析了多重耐药结肠弯曲菌的基因组信息以及存在的耐药及毒力基因情况,可移动遗传元件(转座酶和插入序列)在结肠弯曲菌耐药传播中起着重要作用,该研究结果为弯曲菌耐药风险评估提供了参考依据。

耐药基因cfr和optrA在猪源葡萄球菌的流行特征

为了解多重耐药基因cfr、optrA在猪源葡萄球菌中的流行分布,对来自广东省河源市和上海市3个猪场的280份鼻腔拭子样品,使用氟苯尼考(10μg/mL)甘露醇平板进行细菌分离,PCR检测cfr和optrA耐药基因,并通过gap基因进行菌种鉴定,采用琼脂稀释法对16种常用抗菌药物进行药敏试验。结果显示,本研究共分离获得38株葡萄球菌(分离率为13.57%),包括25株cfr阳性菌株(检出率为8.93%)和15株optrA阳性菌株(检出率为5.36%),其中2株葡萄球菌同时检出cfr及optrA基因。gap基因鉴定表明,15株optrA阳性葡萄球菌均为松鼠葡萄球菌,23株cfr阳性葡萄球菌成功分为4个不同葡萄球菌亚种,包括12株松鼠葡萄球菌、8株腐生葡萄球菌、2株马胃葡萄球菌及1株科氏葡萄球菌。药敏结果显示,38株cfr/optrA葡萄球菌均为多重耐药菌株,均对氟苯尼考、克林霉素和泰妙菌素耐药,且对部分药物表现出较高耐药率,如沃尼妙林(94.7%)、氨苄西林(92.0%)及四环素(89.5%),但所有菌株对万古霉素敏感。对比在不同生长阶段分离葡萄球菌中cfr及optrA的检出率,cfr和optrA基因主要流行于育肥猪。结果表明,3个猪场葡萄球菌cfr和optrA的检出率高,耐药情况严重,应加强抗菌药物在养殖过程中规范使用以减缓耐药性的产生和传播。

健康人群肠道中optrA阳性肠球菌的流行率及风险因素

目的 研究深圳市健康人群肠道携带optrA阳性肠球菌流行率及其风险因素。方法 共调取2018―2019年社区健康体检者粪便样本565份,采用肠球菌选择培养基筛选耐氟苯尼考肠球菌,使用MALDI-TOF MS(MALDI Biotyper,Bruker,Germany)进行种属鉴定及PCR鉴定optrA基因。以optrA阳性肠球菌的携带者作为病例,以年龄为匹配条件,按1∶4匹配未携带者作为对照。采用多因素logistic回归分析模型分析optrA阳性肠球菌定植于健康人群肠道的风险因素。结果 2018―2019年深圳市健康人群肠道中optrA基因的流行率为18.10%(102/565,95%CI:14.90%~21.20%),从基因阳性人群粪便中共分离447株optrA阳性肠球菌,粪肠球菌为最主要流行种属(76.06%)。猪肉日摄入量>50.0 g (OR=1.615,95%CI:1.017~2.565,P=0.042)、3个月内住院治疗(OR=11.551,95%CI:2.153~61.963,P=0.004)是optrA阳性肠球菌在健康人群肠道中定植的危险因素。结论 optrA阳性肠球菌在深圳市健康人群肠道中已广泛流行,其可能通过食物链传播至人类,同时住院治疗将增加optrA阳性肠球菌在健康人群肠道中定植的风险。

关于新耐药蛋白OptrA的2个关键活性位点

通过ATP水解酶活性试验分析2个突变位点对OptrA活性的影响,并通过最低抑菌浓度试验分析不同突变位点对金黄色葡萄球菌耐药性的影响。将OptrA蛋白作抗原免疫日本大耳白兔,提取血清抗体,用Western bolt分析突变前后蛋白表达量的变化。结果显示,当把全长氨基酸序列208和488位的谷氨酸(E)突变后,OptrA在金黄色葡萄球菌中的表达量不变,但其ATP水解活性分别降低30%和70%,并且都导致金黄色葡萄球菌失去了对氟苯尼考的耐药性。说明OptrA需要水解ATP才能介导细菌耐药性,为以后研究新耐药蛋白OptrA的抑制剂和肠球菌感染的防制奠定基础。

利奈唑胺耐药新基因optrA研究进展

optrA基因是2015年从我国临床分离的粪肠球菌中发现的利奈唑胺耐药基因.该基因大小为1968 bp,编码655个氨基酸,编码的氨基酸序列与ABC转运蛋白有较高的同源性.optrA不仅介导恶唑烷酮类（包括利奈唑胺、泰地唑胺）耐药,还可以介导苯丙醇类（包括氟苯尼考、氯霉素）耐药,并可以水平传播.利奈唑胺是临床上治疗甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌等难治性感染的一线药物,因此国内外学者高度关注optrA基因的出现与流行.本文将从optrA基因的发现、流行特征、分子传播机制等方面进行综述.

四川地区兔源粪肠球菌对恶唑烷酮类药物耐药性调查

本研究旨在调查四川地区兔场中粪肠球菌对恶唑烷酮类药物的耐药性,检测恶唑烷酮类耐药基因。以四川多个地区兔场分离鉴定的79株粪肠球菌为研究材料,开展分离株对恶唑烷酮类的药物敏感性试验。运用PCR技术检测分离株中恶唑烷酮类耐药基因cfr、poxtA和optrA。结果显示,在分离出的79株粪肠球菌中,有19株对利奈唑胺耐药(MIC≥2mg/L),耐药率为2405%。PCR结果表明,有16株含有optrA基因,其余基因未检出。16株携optrA基因粪肠球菌分为13个ST型,其中分离自峨眉山市某兔场的CSC1菌株可能是一个新的ST型。结论:兔源粪肠球菌对恶唑烷酮类耐药率为2405%,由optrA基因介导,optrA基因在粪肠球菌中检出率为2025%,兔场与兔场之间分离的菌株之间存在密切进化关系,耐药菌株的广泛交流可能造成多重耐药基因optrA传播。

利奈唑胺不敏感肠球菌的耐药机制及分子分型

目的了解利奈唑胺不敏感肠球菌(linezolid-insensitive Enterococcus,LISE)检出率及分布特点,分析LISE的主要耐药机制和分子分型,为LISE医院感染精准预防与控制提供理论依据。方法回顾性分析2018—2019年福建医科大学附属泉州第一医院临床分离肠球菌属细菌药敏试验数据,对经仪器法检测出的LISE采用肉汤微量稀释法和纸片法进行确认,采用多位点序列分型(MLST)分析LISE菌株的同源性。采用PCR法检测23S rRNA、rplC、rplD、rplV、optrA、poxtA、cfr、cfr(B)利奈唑胺耐药相关基因。结果2018—2019年共分离鉴定肠球菌522株,检测出LISE共44株(均为粪肠球菌),检出率为8.4%(44/522),其中利奈唑胺中介粪肠球菌(linezolid-intermediate Enterococcus faecalis,LIEf)占3.1%(16/522);利奈唑胺耐药粪肠球菌(linezolid-resistant Enterococcus faecalis,LREf)占5.4%(28/522)。利奈唑胺对28株LRE的MIC值为8~16 mg/L。44株LISE分布的科室主要为泌尿外科(43.2%,19/44)、肿瘤科(9.1%,4/44)、老年病科和肝胆外科(均为6.8%,3/44);标本来源主要为尿液52.3%(23/44)、抽出液18.2%(8/44)、分泌物13.6%(6/44)、引流液4.5%(2/44)。44株LISE分为32个不同的ST型,其中ST16是主要型别,占20.5%(9/44)。发现耐药基因阳性的LISE有33株,可分单耐药基因和双耐药基因两类。单耐药基因:optrA阳性为7株,rplD发生突变(C348T、A144G)的有10株。双耐药基因:同时携带optrA、cfr和同时携带optrA、poxtA的LRE各有1株;optrA阳性合并23S rRNA点突变(G2601C)的1株;optrA阳性合并rplC突变(C291T、C369T、T107A)的4株;optrA阳性合并rplD突变的9株。未发现任何耐药基因的LISE有11株。结论LRE菌株的主要耐药机制是携带optrA,该基因可用作耐药性筛选的标志。cfr、poxtA和23S rRNA突变参与耐药,但并不是主要耐药机制。

利奈唑胺耐药肠球菌感染危险因素及耐药机制分析

目的分析医院获得性和社区获得性利奈唑胺耐药肠球菌(LRE)感染的危险因素及其主要耐药机制。方法收集2018年9月—2020年12月分离的LRE菌株,根据LRE感染来源分为医院获得性和社区获得性,采用回顾性病例对照研究分别分析两种感染的危险因素。通过PCR和测序技术等方式检测菌株已知利奈唑胺耐药机制。结果共检出38株LRE。排除资料不完整病例,共纳入16例医院获得性LRE感染组和64例医院获得性利奈唑胺敏感肠球菌(LSE)感染对照组,17例社区获得性LRE感染组和68例社区获得性LSE感染对照组。医院获得性LRE感染单因素分析表明,气管插管、入住ICU、膀胱冲洗是主要危险因素;多因素分析表明气管插管是独立的危险因素。社区获得性LRE感染单因素分析表明,复数菌感染、低蛋白血症是主要危险因素;多因素分析表明低蛋白血症、复数菌感染是独立危险因素。医院获得性和社区获得性LRE耐药机制均主要为携带optrA基因(分别为61.5%和78.9%)。结论携带optrA基因为LRE主要耐药机制。医院获得性和社区获得性LRE感染危险因素分别为气管插管和低蛋白血症、复数菌感染。

利奈唑胺耐药粪肠球菌的耐药机制与感染危险因素调查

目的研究利奈唑胺耐药粪肠球菌(linezolid-resistant Enterococcus faecalis,LRE)的耐药机制并分析其感染的临床特征及危险因素。方法收集2014-2018年从住院患者无菌体液标本中分离的LRE(MIC≥8 mg/L),利用PCR及测序技术检测菌株中的optrA、cfr、poxtA基因,23S rRNA V区突变以及由rplC和rplD编码的核糖体蛋白L3、L4的突变。回顾性收集LRE感染患者的临床和实验室资料,通过病例对照研究对LRE感染的危险因素进行分析。结果5年内共检出85株LRE,耐药机制主要包括获得optrA基因(98.8%),核糖体蛋白L4突变(36.5%)、L3突变(4.7%)。共纳入85例LRE感染病例组和85例利奈唑胺敏感粪肠球菌(linezolid-susceptible Enterococcus faecalis,LSE)感染对照组。多因素分析表明,从外院转入(OR:2.8,95%CI:1.3~6.1,P=0.007)、高龄(≥60岁)(OR:2.3,95%CI:1.1~5.0,P=0.034)、恶性肿瘤(OR:5.5,95%CI:2.5~12.5,P<0.001)、气管插管(OR:3.8,95%CI:1.7~8.3,P=0.001)、先前碳青霉烯类(OR:0.1,95%CI:0~0.5,P=0.003)和氟喹诺酮类(OR:4.3,95%CI:1.4~13.7,P=0.013)的使用为LRE感染的危险因素。结论携带optrA基因是LRE的主要耐药机制,外院转入、高龄、恶性肿瘤、气管插管、先前碳青霉烯类和氟喹诺酮类抗菌药物的使用是LRE感染的独立危险因素。

酰胺醇类-噁唑烷酮类交叉耐药基因在某规模化养猪场的流行情况分析

为了调查研究河南省某规模化养猪场粪肠球菌中酰胺醇类-噁唑烷酮类交叉耐药基因optrA、cfr和poxtA的扩散情况,对52份采样菌株进行了分离、纯化和16S rRNA基因序列测序,并进行了药物敏感性测定、接合转移及MLST分型试验。通过16S rRNA基因序列测序比对,鉴定52份采样菌株为粪肠球菌,序列同源性达99.9%。药物敏感性实验结果表明,52株粪肠球菌分离株对氟苯尼考的耐药率达76.9%,对利奈唑胺的耐药率为9.6%(5/52)。PCR扩增结果显示optrA阳性检出率为75.00%(39/52),poxtA阳性检出率为0.19%(1/52),cfr阳性检出率为0%。通过平板接合试验获得了4株optrA阳性接合子,发现其耐药表型发生了转移。多位点序列分型(MLST)试验结果表明:在接合成功的4株供体野生菌株中,3株(水源/病猪源/苍蝇源)分型为ST692,1株仔猪源野生株分型为ST632。

粪肠球菌对利奈唑胺低水平耐药机制的研究及同源性分析

目的研究4株临床分离的利奈唑胺低水平耐药粪肠球菌的耐药机制及同源性。方法收集临床分离的利奈唑胺耐药粪肠球菌4株,采用微量肉汤稀释法确认菌株对利奈唑胺最低抑菌浓度(MIC);PCR扩增和测序检测23S r RNA V区基因、核糖体蛋白L3和L4编码基因(rplC、rplD)及多重耐药基因cfr和新型耐药基因optrA。多位点序列分型(MLST)分析菌株同源性。结果4株粪肠球菌对利奈唑胺MIC值均为8μg/ml,均为低水平耐药,23S r RNA V区基因、核糖体蛋白L3和L4编码基因均未发现任何位点突变,未检测到cfr基因,但均携带optrA基因。MLST分型显示4种ST型,分别为ST476、ST16、ST116、ST75。结论初步推断携带optrA基因与粪肠球菌对利奈唑胺呈现低水平耐药有关,耐药菌株在本院呈散发。

山东省潍坊市农村人群海氏肠球菌恶唑烷酮类耐药基因流行情况研究

目的了解农村地区无症状人群中氟苯尼考耐药海氏肠球菌的耐药性和恶唑烷酮类耐药基因cfr、optrA、poxtA的携带情况。方法对来自山东省潍坊市的12个村620份粪便样品,用氟苯尼考(10 mg/L)肠球菌培养基进行细菌分离,利用飞行时间质谱仪鉴定菌种,采用琼脂稀释法对15种抗生素进行药敏试验,PCR鉴定耐药基因,对poxtA阳性的海氏肠球菌进行脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分析。结果共分离获得29株海氏肠球菌。所有海氏肠球菌均对四环素、克林霉素耐药,对氯霉素表现为高耐药率,但未检出氨苄青霉素、万古霉素、阿莫西林/克拉维酸耐药菌株,利奈唑胺耐药率为10.3%(3/29)。未检测到携带cfr的海氏肠球菌,optrA和poxtA检出率分别是86.2%(25/29)和17.2%(5/29)。聚类分析显示,5株poxtA阳性海氏肠球菌属于5种PFGE带型。结论山东潍坊市农村地区健康人群中,海氏肠球菌耐药情况严重,optrA和poxtA的携带率很高,呈现高度多态性,提示可能存在公共卫生隐患,应加强相关监测。