宠物医院犬猫源肠球菌的耐药性检测及其耐药基因optrA的流行特征分析

为了解吉林地区宠物源肠球菌的耐药情况和噁唑烷酮类耐药基因optrA在宠物源肠球菌中的流行分布特征,本研究对来自长春市和吉林市4家宠物医院的200份宠物肛门拭子样品,利用肠球菌琼脂培养基进行细菌的分离,利用16S rRNA基因的PCR扩增及测序进行菌种的鉴定,采用琼脂稀释法对11类13种抗菌药物进行药敏试验,利用PCR检测酰胺醇类耐药基因fexA、fexB和噁唑烷酮类耐药基因cfr、optrA,并对携带optrA基因的菌株进行全基因组测序。结果显示,本研究分离到96株肠球菌;药敏试验结果显示,宠物源肠球菌对克林霉素、四环素、沃尼妙林、庆大霉素和红霉素耐药严重,耐药菌株分别占87.5%、76.0%、72.9%、65.6%和55.2%,其次对环丙沙星、青霉素、氨苄西林和利福平耐药的菌株分别占33.3%、24.0%、20.8%和12.5%,对氟苯尼考耐药的菌株相对较少,占5.2%,检测到1株对万古霉素耐药的屎肠球菌,未检测到对利奈唑胺和替加环素耐药的菌株。PCR检测到3株同时携带optrA及fexA耐药基因的粪肠球菌,且其均呈多重耐药性。对携带optrA基因肠球菌的全基因组测序结果显示,3株粪肠球菌分别为ST376型(n=2)和ST16型(n=1),且不同ST型的粪肠球菌携带的耐药基因存在显著差异,optrA基因常与fexA、tet、isaA等耐药基因协同传播。研究表明optrA基因在宠物源肠球菌中已经存在一定程度的流行,且人与宠物接触密切,易造成耐药菌在两者之间的传播,应加强对宠物源肠球菌耐药性的监测。

新疆阿克苏地区猪场optrA/lsa(E)阳性粪肠球菌的耐药情况及传播特点分析

【目的】了解新疆阿克苏地区猪源粪肠球菌中optrA和lsa(E)的流行及传播特点,并探明optrA和lsa(E)阳性粪肠球菌的耐药情况,为评估两个耐药基因对公共卫生的影响和危害提供科学依据。【方法】对新疆农业大学兽医药理学实验室分离保存的322株粪肠球菌采用PCR的方法进行optrA和lsa(E)筛查,根据CLSI推荐药物及方法采用琼脂稀释法测定optrA和lsa(E)阳性菌株对氨苄西林、红霉素、泰乐菌素、四环素、多西环素、利奈唑胺、氟苯尼考、万古霉素、左氧氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素和沃尼妙林的最小抑菌浓度(MIC)并进行耐药判定,利用PCR方法筛查相应的耐药基因,包括ermA、ermB、ermC、fexA、fexB、tet(K)、tet(L)、tet(M)、aac(6’)-le-aph(2")-Ia和cfr。选取31株不同来源的optrA和lsa(E)阳性粪肠球菌进行MLST分子分型和接合转移试验。【结果】共193株粪肠球菌检出optrA和/或lsa(E),其中38株optrA和lsa(E)共存,9株仅携带optrA,146株仅携带lsa(E)。这193株粪肠球菌对红霉素、泰乐菌素、四环素、多西环素、庆大霉素和沃尼妙林的耐药率均达到100%,虽然optrA检出率远低于lsa(E),但optrA阳性菌株总体耐药程度明显高于仅携带lsa(E)的菌株以及optrA、lsa(E)双阴性的菌株,其耐药基因的检出结果也呈现相同趋势。optrA和lsa(E)共存和仅携带optrA菌株的多重耐药谱集中在8耐和10耐,占比分别为84.6%和100.0%,而仅携带lsa(E)的菌株和optrA、lsa(E)双阴性菌株的多重耐药谱主要集中在6—8耐,占比为89.4%和90.7%。进一步分析optrA、lsa(E)与耐药性之间的关系发现,耐药较为严重的猪场optrA和lsa(E)的检出率也相对较高。耐药基因检出结果显示:193株菌均不同程度地携带ermB、ermC、tet(K)、tet(L)、tet(M)、aac(6’)-Ie-aph(2")-Ia、fex(A),并且optrA、lsa(E)共存的菌株及仅携带optrA菌株的耐药基因检出率总体上也高于仅携带lsa(E)的菌株和optrA、lsa(E)双阴性菌株。MLST和接合转移试验结果提示,optrA/lsa(E)菌株遗传环境复杂、可能既存在克隆传播又存在水平转移的现象。【结论】新疆阿克苏地区猪源粪肠球菌中optrA和lsa(E)的高携带率以及高耐药水平表明该地区耐药形势严峻,对当地生猪养殖业甚至于公共卫生安全都造成威胁,应及时采取措施以防控耐药性的进一步发展。

酰胺醇类-噁唑烷酮类交叉耐药基因在某规模化养猪场的流行情况分析

为了调查研究河南省某规模化养猪场粪肠球菌中酰胺醇类-噁唑烷酮类交叉耐药基因optrA、cfr和poxtA的扩散情况,对52份采样菌株进行了分离、纯化和16S rRNA基因序列测序,并进行了药物敏感性测定、接合转移及MLST分型试验。通过16S rRNA基因序列测序比对,鉴定52份采样菌株为粪肠球菌,序列同源性达99.9%。药物敏感性实验结果表明,52株粪肠球菌分离株对氟苯尼考的耐药率达76.9%,对利奈唑胺的耐药率为9.6%(5/52)。PCR扩增结果显示optrA阳性检出率为75.00%(39/52),poxtA阳性检出率为0.19%(1/52),cfr阳性检出率为0%。通过平板接合试验获得了4株optrA阳性接合子,发现其耐药表型发生了转移。多位点序列分型(MLST)试验结果表明:在接合成功的4株供体野生菌株中,3株(水源/病猪源/苍蝇源)分型为ST692,1株仔猪源野生株分型为ST632。

粪肠球菌对利奈唑胺低水平耐药机制的研究及同源性分析

目的研究4株临床分离的利奈唑胺低水平耐药粪肠球菌的耐药机制及同源性。方法收集临床分离的利奈唑胺耐药粪肠球菌4株,采用微量肉汤稀释法确认菌株对利奈唑胺最低抑菌浓度(MIC);PCR扩增和测序检测23S r RNA V区基因、核糖体蛋白L3和L4编码基因(rplC、rplD)及多重耐药基因cfr和新型耐药基因optrA。多位点序列分型(MLST)分析菌株同源性。结果4株粪肠球菌对利奈唑胺MIC值均为8μg/ml,均为低水平耐药,23S r RNA V区基因、核糖体蛋白L3和L4编码基因均未发现任何位点突变,未检测到cfr基因,但均携带optrA基因。MLST分型显示4种ST型,分别为ST476、ST16、ST116、ST75。结论初步推断携带optrA基因与粪肠球菌对利奈唑胺呈现低水平耐药有关,耐药菌株在本院呈散发。

无乳链球菌的耐药性及对利奈唑胺不敏感的机制分析

目的监测我国主要城市三级甲等医院住院患者分离的无乳链球菌的耐药状况,分析不同标本来源的无乳链球菌的药敏结果及1株无乳链球菌对利奈唑胺不敏感的机制.方法定点收集全国各个医院147株无乳链球菌,由中心实验室统一用平皿二倍稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)、分析药敏结果.参照美国临床和实验室协会(CLSI)或欧洲药敏委员会(EUCAST)2021标准判定细菌敏感率、耐药率.通过聚合酶链反应(PCR)和序列比对分析利奈唑胺不敏感无乳链球菌对利奈唑胺的耐药机制.结果无乳链球菌对多数菌药物的敏感率较高,对大环内酯类、克林霉素和喹诺酮类耐药率较高;尿标本来源菌株对大多数药物的耐药率略高于生殖道标本来源菌株.在147株无乳链球菌株中,利奈唑胺MIC_(50)与MIC_(90)均为1 mg·L^(-1),发现1株无乳链球菌利奈唑胺MIC值为8 mg·L^(-1),对利奈唑胺不敏感.该菌株poxtA、cfr、cfr(B)、cfr(C)阴性,未检出核糖体L蛋白突变,但携带optrA基因和23SrRNA V结构区突变.结论从整体来看,无乳链球菌对多数抗菌药物较敏感,但其耐药情况不容忽视.尤其是无乳链球菌对利奈唑胺耐药应引起重视,在临床治疗中,应关注此类菌株的治疗效果,给予合适的药物治疗.