Or83b-like基因内含子2个体内及个体间长度杂合现象揭示了Philotrypesis sp.的进化不稳定性

佩妃延腹小蜂Philotrypesis pilosa和Philotrypesis sp.是寄生在对叶榕Ficus hispidaL.上的同属非传粉榕小蜂,二者可能拥有最近共同祖先。榕小蜂利用嗅觉对寄主榕树的专一性识别可能是其产生交配前隔离的重要机制,Or83b-like基因是一类在不同昆虫间高度保守的非典型嗅觉受体基因,研究其内含子序列对解决近缘种的物种形成和进化方向问题有重要意义。本文采用PCR法对这两种小蜂的Or83b-like基因进行分析。结果表明:该两种小蜂的Or83b-like基因编码区核苷酸序列及推导的氨基酸序列一致度非常高,分别为98.2%和99.03%,内含子序列平均一致度也很高,为84.5%左右,进一步证明二者亲缘关系很近。我们在P. sp.的Or83b-like基因部分内含子序列中发现个体内及个体间具长度杂合现象(LVHs),但P.pilosa却不存在。据此推测,P.pilosa为进化上已经趋于稳定的物种,而P. sp.则没有完全稳定。

大白菜BrCYP83B1基因的克隆及表达分析

【目的】细胞色素P450家族是十字花科植物硫苷合成重要的酶系,其中CYP83亚家族主要参与核心结构的合成,旨在探究大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)CYP83B1基因的功能。【方法】利用RT-PCR技术克隆BrCYP83B1基因,通过生物信息学软件分析其编码蛋白理化性质、同源性及启动子顺式作用元件,利用RT-qPCR技术分析BrCYP83B1的表达模式,并构建其植物超表达载体。【结果】BrCYP83B1 cDNA序列全长为1500 bp,编码499个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450超家族,主要定位于细胞质,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,与甘蓝型油菜、青花菜的CYP83B1蛋白具有较高的同源性。启动子分析表明,该基因启动子区域包含水杨酸、脱落酸及茉莉酸甲酯等激素响应的顺式作用元件,说明BrCYP83B1基因表达可能受激素调控。RT-qPCR分析结果表明,BrCYP83B1基因在大白菜的根、茎、叶、花和果中均有表达,且以叶中的表达量最高;茉莉酸甲酯够显著促进该基因的表达,而水杨酸处理对其表达具有一定的抑制作用,脱落酸处理下基因先上调后又下调。【结论】BrCYP83B1可能参与大白菜对激素的响应调控。

牛分枝杆菌esat-6和mpb70-mpb83基因DNA疫苗的免疫效果

用PCR技术和重叠延伸剪接技术获得牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了重组质粒pCE6和pC70-83-E6。分4组免疫小鼠:pCE6组、pC70-83-E6组、pcDNA3.1(+)和PBS对照组,采用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN-γ分泌情况。结果表明,2重组质粒免疫组小鼠的血清抗体水平持续上升,而2对照组始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组小鼠的抗体水平高于pCE6组。经PPD刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组小鼠的SI值与2对照组均差异显著(P<0.05),2重组质粒免疫组间差异不显著(P>0.05);2重组质粒免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ均显著高于2对照组(P<0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他3组(P<0.05)。证实本试验构建的2种牛分枝杆菌DNA疫苗可有效诱导实验动物产生体液免疫和细胞免疫应答。

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。

MCMV M83基因mRNA在小鼠感染睾丸中的表达及与睾丸病变的相关性研究

目的:探讨鼠巨细胞病毒(MCMV)感染的不同时期MCMV M83基因mRNA在小鼠睾丸中的表达及与睾丸病变程度的相关性。方法:采用地高辛标记的MCMV M83mRNA寡核苷酸探针对接种MCMV后不同时期的小鼠睾丸组织进行原位杂交(ISH)检测。将ISH阳性杂交信号的平均光吸度(A)值表示睾丸的MCMV负荷量,分析MCMV M83mRNA在感染睾丸中的表达及其负荷量与睾丸病变程度的关系。结果:接种病毒后各时期的睾丸组织中均有MCMV M83mRNA表达,ISH阳性杂交信号主要定位在间质细胞胞浆内。感染d9的平均A值最高(实验组组间比较,P<0．001)。感染不同时期的生精上皮及间质细胞呈现不同程度的病理性炎性改变,d6-9最为严重。结论:睾丸MCMV感染时,MCMV M83基因的mRNA水平与睾丸感染病变程度相关;提示:对MCMV M83mRNA动态检测可估计感染组织的预后。

HCMV截短UL83基因真核表达重组体的构建、转染及其免疫效力研究

为了构建人巨细胞病毒（HCMV）截短UL83基因真核表达重组体，实现其在Hep-2细胞中的稳定表达，研究该截短UL83基因真核表达重组体免疫效力，采用基因重组的方法，将HCMVAD169株截短UL83基因定向克隆到带有绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因的真核表达载体pEGFP-C1上，构建真核重组表达质粒pEGFP-C1-UL83；脂质体转染至Hep-2细胞中，G418筛选获得稳定表达pp65细胞表达系。经基因测序屁示，重组体中截短UL83基因完全正确。RT-PCR和Westem blot检测证实其可在Hep-2细胞中稳定表达。用该重组体和其表达产物在HCMV先天性感染小鼠模型上进行免疫保护试验显示，母鼠血清可检测到特异性抗HCMVpp65抗体，效价为：1：2．51～1：50．79；子鼠脑组织内未分离出病毒，亦未检测出病毒pp65蛋白抗原表达。初步结果表明，pEGFP-C1-UL83具有较好的免疫原性，可作为DNA疫苗刺激机体产生有效抗体。并具有阻止病毒垂直传播的保护性作用。

牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析

利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pETMPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDSPAGE检测表达情况,重组质粒pETMPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Westernblot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Westernblot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性,结果表明特异性较好。

结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定

[目的]从分支杆菌培养物中提取DNA,扩增结核分支杆菌MPT83蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达、克隆和鉴定。[方法]从分支杆菌培养物中提取总DNA,扩增MPT83因并克隆入T载体,将目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切进行鉴定。[结果]经SDS-PAGE分析,在约42ku处出现新的蛋白条带,5h后表达量即达到高峰;Western blotting分析表明,融合蛋白能够被分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。[结论]结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础。

PDE4D基因SNP83多态性与缺血性卒中预后的相关性研究

目的探索磷酸二酯酶4D（phosphodiesterase 4D,PDE4D）基因的基因多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）83（rs966221）与缺血性卒中预后的相关性。方法连续入组2009年10月~2011年7月北京天坛医院神经内科住院的缺血性卒中患者736例,采用Sequenom Massyarray技术检测SNP83位点基因分布情况。采用Logistic回归模型分析不同遗传模型下该位点基因多态性与卒中后3个月联合终点事件（包括卒中复发、死亡和其他血管事件等）和预后不良[改良Rankin量表（modified Rankin Scale,m RS）评分〉1]的相关性,并对卒中亚型进行分层分析。结果本研究共纳入736例患者,其中677例患者完成3个月的随访,失访率为8.02%。与未发生联合终点事件组的患者相比,发生联合终点事件组的患者年龄较大[（67.02±0.70）vs（59.98±3.35）,P〈0.001],既往心房颤动病史比例较高（9.3%vs 3.7%,P=0.048）,入院时美国国立卫生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS）评分较高[11（5~16）vs 5（2~9）,P〈0.001],且差异具有显著性,而两组的其他基线信息（如性别、民族、婚姻状况、居住方式、既往吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、高脂血症和冠状动脉粥样硬化性心脏病等）差异无显著性（P〉0.05）。进行基因多态性分析发现,与未发生联合终点事件患者相比,发生联合终点事件患者中SNP83AG＋GG基因型的比例较高（50.0%vs 36.7%,P=0.007）,调整年龄、入院时NIHSS评分和既往心房颤动病史,Logistic回归分析显示该位点在显性模型（AG＋GG vs AA）下与缺血性卒中后联合终点事件发生相关[调整后的比值比（odds ratio,OR）1.84,95%可信区间（confidence interval,CI）1.04~3.26],但并未发现该位点与卒中预后不良相关。结论 PDE4D基因SNP83 AG/GG基因型与缺血性卒中后联合终点事件发生相关。

莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白基因特异性区段真核及原核表达型载体的构建

从莱姆病螺旋体染色体编码８３ｋｄ抗原蛋白（Ｐ８３）基因序列中选择编码近Ｃ端１５９个氨基酸的基因序列作为扩增的靶序列，自行设计并合成一对寡核苷酸引物，以莱姆病螺旋体Ｂ３１株基因组ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约４７７ｂｐ的扩增片段，再把该片段与质粒载体ｐＢＫ－ＣＭＶ进行重组，经鉴定得到重组质粒ｐＢＸ１。重组质粒ｐＢＸ１可同时在真核和原核细胞中表达，其表达产物可用来制备莱姆病血清学诊断用的标准抗原；该重组质粒也可用来制备用于对莱姆病螺旋体进行分类鉴定的核酸探针。

抑制人巨细胞病毒UL83基因对人脑动脉平滑肌22α及血管紧张素受体表达的影响

目的探讨人巨细胞病毒UL83基因对人脑动脉平滑肌22α及血管紧张素受体表达的影响。方法利用转染技术把RNA干扰转染到人巨细胞病毒感染的体外培养的人脑动脉血管平滑肌细胞中,建立RNA干扰人巨细胞病毒UL83基因的细胞模型。采用免疫荧光技术、逆转录聚合酶链反应和蛋白电泳等技术观察平滑肌22α及血管紧张素1型受体和2型受体基因的表达变化。结果利用RNA干扰技术成功干扰了人巨细胞病毒UL83基因mRNA的复制和蛋白表达,沉默人巨细胞病毒UL83基因后血管紧张素1型受体基因表达下调,而血管紧张素2型受体基因和平滑肌22α基因表达上调。结论成功建立了人巨细胞病毒感染体外培养的人脑动脉血管平滑肌细胞UL83基因沉默的细胞模型。人巨细胞病毒UL83基因可能通过激活血管紧张素1型受体,抑制血管紧张素2型受体和平滑肌22αmRNA的转录表达来发挥作用。

人类疱疹病毒6B U83转基因小鼠系的建立

目的 :建立HHV - 6BU83转基因小鼠系 ,为进一步探讨HHV 6BU83基因与多发性硬化的关系提供动物实验模型。方法 :转基因动物技术。结果 :通过构建含有导引神经系统星型细胞特异表达启动子及小鼠鱼精蛋白 1的HHV - 6BU83DNA片段 ,将其显微注入小鼠受精卵后 ,建立了 3个HHV - 6BU83转基因小鼠系。结论 :建立人类疱疹病毒 6BU83转基因小鼠系 ,对于研究观察HHV - 6B感染与神经系统疾病的关系具有重要意义。

表达牛分枝杆菌MPB83基因重组腺病毒的构建

以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得MPB83基因,克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,构建的重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MPB83经PmeⅠ酶切,转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAd-CMV-MPB83。PacⅠ酶切线性化该质粒,转染AD-293细胞进行病毒包装,转染细胞10d后出现细胞病变(CPE)。PCR、RT-PCR、western blot检测到重组病毒含MPB83基因并成功表达。

一种快速检测乳腺癌患者外周血高表达基因FAM83A的巢式PCR法

目的建立一种快速简便检测乳腺癌患者外周血中FAM83A基因的巢式PCR法。方法设计退火温度分别为72℃和60℃的内、外侧两对引物,在一个PCR反应中,同时加入0.2μmol/L外侧引物和20μmol/L内侧引物,使两轮PCR扩增反应一步完成。分别用建立的巢式PCR法与传统巢式PCR法检测35例乳腺癌患者和8例健康人外周血样本,比较其特异性;将乳腺癌细胞株MCF-7系列稀释后分析两法的灵敏度。结果建立的巢式PCR法与传统巢式PCR法在43例标本中均检出16例阳性,并都能检测出10-6稀释的MCF-7细胞,两法特异性和灵敏度相同。本法步骤简便,所需时间缩短了24 min。结论建立的巢式PCR法敏感、特异,且快速、简便,适用于临床快速检测。

单链抗体hs83基因植物表达载体的构建

成功构建了单链抗体hs83基因植物表达载体pCAMB IA1301-hs83。首先根据基因的序列重新设计了两条含有合适酶切位点的引物,酶切位点保证了基因能够插入取代pCAMB IA1301上GUS基因的第二外显子;第二步是PCR反应克隆目的基因,然后连接到pMD-18 T载体,进行测序鉴定;第三步是对pCAMB IA1301质粒和T-hs83质粒进行双酶切,释放出两个目的片段,分别回收后连接,酶切鉴定后将重组子通过冻融法转化根癌农杆菌EHA105,并用PCR法进行鉴定。

莱姆病螺旋体83kD原浆柱蛋白特异性区段的基因克隆与表达研究

目的 为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法 根据莱姆病螺旋体 83kD原浆柱蛋白 (p83)特异性区段的基因序列 ,设计一对引物 ,采用PCR技术从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增p83特异性区段的基因片段 ,纯化扩增产物 ,用BamHI和EcoRI双酶切后定向克隆入质粒载体pBK -CMV ;转化大肠杆菌筛选重组克隆。用BamHI和EcoRI双酶切、PCR扩增和DNA序列测定对重组质粒进行鉴定 ,将重组质粒转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达后进行SPS -PAGE和Western -blotting分析。结果 1)从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增出p83特异性区段的基因片段 ;2 )将扩增所得的目的基因片段正向插入pBK -CMV的BamHI和EcoRI位点 ,获得重组质粒pBX1。 3)pBX1在大肠杆菌中诱导表达后获得 2 9kD含 β -半乳糖苷酶氨基末端片段的重组抗原。 结论 成功构建了莱姆病螺旋体 83kD原浆柱蛋白特异性区段的基因重组表达载体 ,并在大肠杆菌中获得了稳定的表达 。

干扰长单一序列区83基因对人巨细胞病毒感染后人脑血管平滑肌促血管生成素及血管内皮生长因子表达的影响

目的长单一序列区(unique long region 83,UL83)基因是人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染再激活标志。本研究拟探索UL83对HCMV感染后人脑血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中不稳定斑块破裂相关因子,如促血管生成素(angiopoietin,Ang)以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法 (1)采用流式细胞仪确定amidite荧光素(fluorescein amidite,FAM)标记的小干扰核糖核酸(small interfering ribonucleic acid,si RNA)通过脂质体转入人脑VSMC的转染效率;(2)将3条化学合成si RNA通过脂质体转染入已感染HCMV AD_(169)株(MOI=10)的人脑VSMC当中,结合空白组、接毒组及接毒无效干扰组筛选抑制UL83基因最强si RNA;(3)分别检测HCMV AD_(169)株(MOI=10)感染人脑VSMC后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h以及72 h Ang-1、Ang-2及VEGF-A信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,m RNA)及蛋白表达变化;(4)分别检测空白组、接毒高效干扰组、接毒无效干扰组及接毒组在感染48 h后Ang-1、Ang-2及VEGF-A的mRNA及感染72 h后上述蛋白表达情况。结果转染6 h后,95.59%人脑VSMC转染了FAM标记si RNA。感染HCMV AD_(169)株(MOI=10)的人脑VSMC在转染siRNA 48 h后,si RNA转染组与接毒组相比,UL83 m RNA相对表达量最多下降78.7%;转染si RNA72 h后,UL83编码的pp65蛋白相对表达量最多下降81.3%。人脑VSMC感染HCMV AD_(169)株(MOI=10)0 h、6 h、12 h、24 h、48 h以及72 h时后,Ang-1 m RNA及蛋白相对表达量逐渐下降(P<0.01),Ang-2及VEGF-A mRNA及蛋白相对表达量则逐渐增加(P<0.01)。而通过转染高效si RNA抑制HCMV AD_(169)株UL83基因,使得Ang-1表达下降,Ang-2和VEGF-A表达增加均被抑制。结论 HCMV AD_(169)株具有同时促进人脑VSMC中Ang-1表达降低,Ang-2及VEGF-A表达增加功能。而通过si RNA抑制HCMV AD_(169)株UL83基因表达能够阻止上述变化。提示HCMV可能通过UL83基因造成靶细胞产生促血管新生微环境。

牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。

西兰花CYP83A1基因的克隆及序列分析

为深入研究西兰花4-甲基亚磺酰丁基芥子油苷的合成代谢途径,对关键合成酶基因CYP83A1进行了克隆与生物信息学分析。根据前期西兰花转录组测序工作中获得的序列数据,同时参照Gen Bank数据库中拟南芥、小白菜和油菜等7种植物的CYP83A1基因CDS序列与西兰花进行比对,确定西兰花CYP83A1基因(Bo CYP83A1)的CDS序列。采用RT-PCR技术对其进行了克隆,获得Bo CYP83A1基因的CDS区序列,其全长为1 509 bp,编码502个氨基酸。预测该蛋白质的分子量为57.47 k D,理论等电点为7.1,包含2个跨膜结构域,且整个序列中不含信号肽,具有一个典型的P450结构域。氨基酸同源性分析表明,西兰花与油菜、大白菜的CYP83A1的相似性较高,均为98%。首次获得Bo CYP83A1的CDS序列,其登录号为KM111290。

马铃薯StCYP83基因家族鉴定及其抗晚疫病的功能分析

【目的】通过鉴定马铃薯StCYP83基因家族成员,分析其响应致病疫霉(Phytophthora infestans)侵染的表达模式,挖掘具有抗晚疫病功能的StCYP83并解析其免疫机制,为马铃薯抗晚疫病分子育种提供新型抗性基因资源。【方法】利用双向BLAST法鉴定StCYP83基因家族成员,通过ExPASy Prot Param、Cell-Ploc 2.0、ESPript等软件分析StCYP83蛋白序列基本信息、亚细胞定位情况、保守基序;利用qRT-PCR技术分析StCYP83响应致病疫霉侵染的表达模式;利用农杆菌介导的本氏烟瞬时表达体系和马铃薯过表达(OE)稳定转化植株分析候选基因影响寄主植物抗致病疫霉的免疫功能及作用机理。【结果】在马铃薯基因组中共鉴定到10个StCYP83家族基因,分别命名为StCYP83B1—StCYP83B10,编码蛋白长度介于387—503aa,分子量介于44—57 kDa,亚细胞定位预测结果显示StCYP83蛋白均定位于内质网膜。qRT-PCR结果表明,StCYP83家族成员在不同程度上均可响应致病疫霉侵染而诱导表达,暗示StCYP83家族基因可能在马铃薯与致病疫霉互作中发挥作用。基于此,从中选取明显响应致病疫霉侵染而诱导上调表达、且与拟南芥AtCYP83B1同源性最高的StCYP83B1用于后续的免疫功能解析。本氏烟瞬时过表达的接菌测试结果表明,StCYP83B1具有抗致病疫霉的生物学功能;同时,过表达StCYP83B1可显著促进PTI标记基因(NbWRKY7、NbWRKY8)、SA信号通路标记基因(NbPR1和NbPR2)和JA信号通路标记基因(NbPR3和NbLOX)的上调表达,并提高flg22诱发的活性氧迸发。此外,StCYP83B1编码蛋白保守基序中的半胱氨酸位点为其抗性功能所必需。StCYP83B1过表达(StCYP83B1-OE)株系对致病疫霉的抗性有所增强,且呈现出增强的PTI免疫反应,包括flg22诱发的活性氧水平升高以及PTI标记基因(StWRKY7、StWRKY8和StACRE31)的显著诱导上调表达。此外,马铃薯SA信号通路相关基因(StPR1、StPR2、StPR5和StPAL2)和JA信号通路相关基因(StLOX、StAOS和StOPR3)也被诱导上调表达。【结论】共鉴定到10个StCYP83家族成员,StCYP83家族成员在不同程度上均可响应致病疫霉的侵染而诱导表达。StCYP83B1通过激活PTI、SA和JA信号通路调控植物对致病疫霉的抗性;而StCYP83B1血红素结合域中的半胱氨酸位点为其抗性功能所必需。