Orai1通道在高血压大鼠心房纤维化中的作用机制研究

目的:明确Orai1通道对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房纤维化及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法:采用45~46周龄的Wistar大鼠(n=16)及SHR(n=13)分别作为对照组和实验组,快速起搏心房观察两组大鼠AF的可诱发性。HE和Masson染色观察两组大鼠心房组织的纤维化程度。Western blot检测两组大鼠心房组织纤维化相关的Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Col3)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9,以及钙信号通路相关蛋白Orai1、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T cells 3,NFAT3)的表达。在原代培养的乳大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)上,利用腺病毒转染使其过表达Orai1后,采用Western blot检测细胞中纤维化相关因子的表达变化,并观察CaN抑制剂环孢素A(cyclosporine A,CsA)对其表达的影响;用Fluo4 AM荧光探针法观察过表达Orai1的CFs中钙浓度的变化。结果:与Wistar大鼠相比,SHR的AF诱发率显著增加(P<0.05),心房组织中纤维化相关因子MMP2、MMP9、Col1和Col3蛋白表达显著上调(P<0.05),Orai1、CaN和NFAT3亦显著上调(P<0.05)。过表达Orai1可促进CFs中纤维化相关因子MMP2、MMP9、Col1和Col3的表达(P<0.05),同时,Orai1通道介导的钙离子内流明显增加(P<0.05);CsA可明显逆转CFs中Orai1过表达的效应(P<0.05)。结论:Orai1通道上调可激活Ca^(2+)/CaN/NFAT3通路,促进CFs纤维化相关因子分泌;高血压大鼠心房纤维化增加可能与Orai1通道上调有关。

粉防己碱通过调控SOCE通路对L-精氨酸诱发的小鼠重症急性胰腺炎的防治作用

目的观察粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对L-精氨酸(L-arginine)诱发的重症急性胰腺炎(SAP)小鼠胰腺组织钙库操纵的Ca2+通道(SOCE)的关键效应蛋白基质相互作用分子1(STIM1)及钙释放激活钙通道蛋白1(ORAI1)表达的影响,探讨粉防己碱防治重症急性胰腺炎的作用机制。方法将健康昆明小鼠40只随机分为4组:对照组、重症急性胰腺炎模型组、粉防己碱高剂量组及粉防己碱低剂量组,每组10只。除对照组外,其余小鼠均给予腹腔注射20%L-精氨酸复制重症急性胰腺炎模型(3.5 g·kg^(-1),共2次,间隔1 h),在模型复制4 h后粉防己碱治疗组给予腹腔注射粉防己碱高、低剂量治疗(120、60 mg·kg^(-1),每日2次,共3 d)。于模型复制72 h后麻醉动物,收集血清,检测血清淀粉酶水平;完整摘取小鼠胰腺及肺组织,胰腺称质量并计算胰腺脏体比;HE染色观察各组小鼠胰腺及肺组织形态学改变;免疫组化法观察胰腺组织STIM1及ORAI1的阳染表达;Western Blot法检测胰腺组织STIM1及ORAI1蛋白的表达;RT-qPCR法检测胰腺组织STIM1及ORAI1 mRNA的表达。结果与对照组比较,重症急性胰腺炎模型组小鼠血清淀粉酶及胰腺脏体比均明显增加(P<0.01);胰腺组织出现明显水肿,腺泡细胞大面积坏死伴胰腺间质出血及大量炎症细胞浸润,肺组织可见肺泡间隔明显水肿、增宽,并伴大量炎症细胞浸润及充血;胰腺组织STIM1及ORAI1的蛋白和mRNA表达水平均明显增高(P<0.01)。与重症急性胰腺炎模型组比较,粉防己碱高、低剂量组小鼠血清淀粉酶及胰腺脏体比明显降低,胰腺及肺组织损伤程度减轻,胰腺组织水肿、出血及坏死程度明显减轻,炎性细胞浸润减少,胰腺组织STIM1及ORAI1的蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。结论重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织SOCE信号通路活化,参与重症急性胰腺炎的病程进展;粉防己碱可通过抑制SOCE信号通路活化,进而减轻重症急性胰腺炎胰腺损伤程度。