在口腔表皮样癌细胞中c-myc对GS和GLS表达的调控以及对癌瘤生长的裸鼠体内实验研究

目的:用动物实验模型探讨人口腔表皮样癌细胞中c-myc与谷氨酰胺酶(GLS)、谷氨酰胺合成酶(GS)间的相关性。方法:免疫组化检测口腔癌临床样本中c-myc、GLS、GS表达。建立c-myc稳定高表达的KB细胞模型,并移植入裸鼠体内以建立裸鼠成瘤模型,细胞和裸鼠各分为3组(n=6),分别为正常对照组、空载体转染细胞组和c-myc过表达细胞组,观察肿瘤生长;免疫组化检测肿瘤中c-myc、 GLS、 GS的表达情况。结果:c-myc、 GLS、 GS在口腔癌临床样本中高表达;在c-myc高表达细胞模型中c-myc mRNA表达水平显著高于空载体对照组;在动物实验中,随着时间的延长,各组裸鼠成瘤模型均形成肿瘤,c-myc过表达组肿瘤体积及重量增加更为显著(P<0.01);c-myc过表达组瘤组织样本中GLS及GS表达显著高于空载体组和对照组(P<0.01)。结论:在口腔表皮样癌细胞中,c-myc高表达,并使GLS、GS表达升高。

黄腐酸对口腔表皮样癌KB细胞的抗肿瘤效应及光热作用

目的探究黄腐酸(fulvic acid,FA)的体外光热升温性能,及对口腔表皮样癌KB细胞的增殖作用,并研究FA联合808 nm激光对KB细胞的光热治疗效果。方法使用808 nm激光照射FA,红外热像仪记录温度变化。将FA与口腔表皮样癌KB细胞共培养,按0.25,0.50,1.00,2.00,3.00 mg/ml的FA浓度加入含KB细胞的培养基,以未加FA处理为对照,通过CCK-8实验检测其对细胞的毒性。将FA联合808 nm激光照射KB细胞,分为:0.50 W/cm^(2)激光+1.00 mg/ml FA组,1.00 W/cm^(2)激光+0.50 mg/ml FA组和2.00 W/cm^(2)激光+0.25 mg/ml FA组。三组分别以不同功率密度激光照射不同FA浓度的含KB细胞的培养基10 min;分别以未加FA处理单纯使用各自功率密度的激光照射10 min为相应对照组。通过CCK-8实验及活死细胞染色实验检测其对细胞的光热治疗作用。结果不同浓度FA在808 nm激光照射下温度升高,并逐渐达到峰值。将0.25,0.50,1.00,2.00,3.00 mg/ml的FA与KB细胞共培养24 h后,细胞毒性检测结果显示,细胞活力有明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05)。光热治疗结果显示,将0.25,0.50,1.00 mg/ml的FA与KB细胞共培养24 h后,分别使用不同功率密度激光照射10 min,与各自对照组比较,FA联合激光照射组细胞存活率显著降低(P<0.0001)。FA联合激光照射KB细胞后,经活死细胞染色示视野内可见大量发出红色荧光的死细胞,仅见少量绿色标记的活细胞。结论FA具有优异的光热转换性能;FA可以抑制口腔表皮样癌KB细胞的增殖;FA结合低能量激光能产热,有效杀灭口腔表皮样癌KB细胞。

苦参碱对KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用

目的观察中药苦参的提取物苦参碱对口腔上皮癌KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用。方法MTT法观察苦参碱对体外培养的KB及KBv200细胞存活率的影响。吖啶橙溴乙啶(AO EB)双荧光染色检测二者细胞凋亡率。流式细胞术分析苦参碱对细胞周期的影响;扫描电镜观察苦参碱作用后的细胞形态学变化。结果苦参碱质量浓度在0.50、1.00、1.50、2.00mg ml时,均有抑制KB及KBv200增殖的作用,双荧光染色及流式细胞术提示苦参碱可诱导KB及KBv200细胞凋亡,使细胞生长停滞在S期;扫描电镜观察发现不同质量浓度的苦参碱作用24h后,细胞出现体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂等凋亡现象。结论苦参碱对KB及KBv200细胞有增殖抑制作用,可诱导KB及KBv200细胞凋亡,其机制可能与其导致细胞S期阻滞有关。

苦参碱对KB及其多药耐药细胞KBv200增殖与凋亡影响的对比研究

目的:研究中药苦参提取物苦参碱对体外培养的口腔上皮癌KB细胞和具有多药耐药特征的KBv200细胞增殖和凋亡的影响。方法:以MTT法对比观察苦参碱对细胞存活率的影响;以吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞术分析苦参碱对细胞周期的影响;扫描电镜观察苦参碱作用后的细胞形态学变化。结果:苦参碱浓度在0.50、1.00、1.50、2.00mg/ml时,均有抑制KB及KBv200增殖的作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为1.35mg/ml和1.43mg/ml;双荧光染色及流式细胞术提示苦参碱可诱导KB及KBv200细胞凋亡,使细胞生长停滞在S期;扫描电镜观察发现不同浓度的苦参碱作用24h后,细胞出现体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂等凋亡现象。苦参碱对两种细胞增殖和凋亡的影响均未见明显差异(P>0.05)。结论:苦参碱对KB及多药耐药的KBv200细胞均具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。提示苦参碱可克服肿瘤的多药耐药现象,故有可能成为一种理想的中药抗肿瘤制剂。

正常和病变的口腔黏膜上皮细胞对α干扰素的敏感性差异研究

目的观察正常和不同病变程度的口腔黏膜上皮细胞对α干扰素(IFN-α)敏感性的差异,为IFN-α的抗肿瘤应用和机制的研究提供基础。方法分别培养正常口腔黏膜上皮细胞株(NOK)、口腔黏膜异常增生上皮细胞株(DOK)、口腔表皮样癌细胞株(KB),取传至第3代对数生长期细胞接种于细胞培养板,对照组每孔加入2 m L含10%胎牛血清的完全培养液,实验组设IFN-α浓度100、500、1 000 U/m L 3个浓度组,实验组每孔分别加入含相应浓度IFN-α的完全培养液,常规培养24 h后检测细胞增殖能力、细胞凋亡和细胞周期变化情况。结果不同浓度的IFN-α分别作用于3种细胞,对NOK细胞株的增殖能力无影响,而DOK、KB细胞株各实验组与对照组相比增殖能力明显减慢,差异均有显著统计学意义(均P<0.01)。浓度500 U/m L IFN-α对NOK细胞株的凋亡无影响,但有促进DOK、KB细胞株凋亡的作用。浓度500 U/m L IFN-α对NOK细胞株周期无影响,DOK细胞株G0/G1期细胞比例显著减少,而G2/M期细胞比例显著增加,KB细胞株G2/M期细胞比例显著增加。结论正常上皮细胞对IFN-α不敏感,而DOK、KB细胞株对IFN-α敏感;IFN-α有抑制DOK、KB细胞株的增殖能力、促其凋亡的作用,且细胞周期阻滞于G2/M期。

乌司他丁对人口腔表皮样癌KB细胞转移和侵袭的影响

目的:探讨乌司他丁对人口腔表皮样癌细胞系KB的转移和侵袭能力的影响。方法:分别通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验探讨乌司他丁对人口腔表皮样癌细胞系KB的转移和侵袭的影响;明胶酶谱实验研究乌司他丁对人口腔表皮样癌细胞系KB分泌活性MMP-9的影响。结果:划痕实验结果显示:与对照组转移细胞数(130.22±14.99)相比,乌司他丁处理后的KB细胞(69.78±11.79)转移能力明显受到抑制(P<0.05);Transwell小室侵袭结果显示,乌司他丁治疗组KB细胞侵袭的细胞数目(223.44±28.54)明显低于阴性对照组(501.11±30.75),(P<0.05);明胶酶谱结果显示,乌司他丁处理后的KB细胞活性MMP-9的表达明显降低(P<0.05)。结论:乌司他丁可能通过抑制MMP-9的活性从而抑制口腔癌细胞的转移和侵袭。