颊粘膜上皮癌前和癌变中细胞凋亡的分析

应用原位末端标记（ＩＳＥＬ）方法检测口腔颊部粘膜在正常、炎症、异常增生及鳞癌状态下的细胞凋亡情况。结果表明：细胞凋亡在正常和炎症上皮中处于一种较稳定和低的程度。异常增生中的凋亡细胞数量最多，其次为鳞癌，二者的细胞凋亡较正常和炎症组明显增多。结果表明细胞凋亡在颊粘膜癌前病变和癌变中发挥着重要作用，与颊癌的发生发展密切相关。

白色念珠菌侵入口腔黏膜上皮体外模型的构建

目的:利用口腔上皮细胞和胶原凝胶构建组织工程口腔黏膜上皮白色念珠菌侵入的体外模型。方法:制备胶原溶液和中和溶液置于Transwell 24孔细胞培养板小室中,混合孵育15 min,使胶原溶液聚合成凝胶状。然后接种口腔上皮KB细胞于凝胶表面,待细胞单层融合后,形成口腔黏膜上皮体外模型,分别培养8、24和48 h后用于白色念珠菌侵入分析。结果:利用口腔上皮细胞和胶原凝胶得到结构良好的口腔黏膜上皮体外模型。PAS染色显示,白色念珠菌感染后,随时间延长,白色念珠菌对上皮结构的破坏逐渐加重,菌丝由少到多逐渐侵入。感染至48 h,上皮松解,可见大量菌丝侵入上皮,且菌丝相白色念珠菌明显多于孢子相。结论:利用口腔上皮细胞和胶原凝胶初步建立了白色念珠菌侵入的口腔黏膜上皮体外模型。

口腔黏膜上皮细胞的培养条件

目的 :研究不同培养条件下口腔黏膜上皮细胞的生长情况 ,了解不同添加成分对上皮细胞生长和分化的影响 ,从而探索一条简便有效的培养口腔黏膜上皮细胞的方法。方法 :选取健康成年人拔除第三磨牙时切除的牙龈黏膜 ,在超净台内用眼科剪、镊尽可能去除上皮下结缔组织 ,滴加Dispase ,4℃冷消化 1 6～ 1 8h ,取上皮皮片用眼科剪剪成约 1mm3 大小 ,随机分成 1 2组 ,分别接种于 2 5mm培养瓶中 ,每瓶加入培养液 1ml(MCDB1 5 3) ,放入 37℃ ,体积分数为 5 %CO2 细胞培养箱中培养。 1 2组培养液中分别加入不同浓度的胎牛血清、表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、霍乱毒素和转铁蛋白 ,观察细胞生长情况。选取能够正常增殖的细胞进行传代培养 ,并于传代后的第 2d、4d、6d、8d、1 0d、1 2d、1 4d纪录细胞总数。结果 :低血清加入各种生长因子的培养液中上皮细胞生长良好 ,光镜下观察为典型的“铺路石”状 ,传代后经免疫组化证实是上皮细胞 ,而高血清培养液中由于成纤维细胞的生长导致无法传代。结论 :MCDB1 5 3培养液中加入胰岛素、氢化可的松、表皮生长因子和霍乱毒素所构成的培养液 。

口腔黏膜上皮的结构蛋白及相关疾病

口腔黏膜上皮是高度特异的复层鳞状上皮,具有保护上皮下组织免受物理、化学及生物刺激的重要作用。然而由于遗传或免疫因素所致的上皮结构改变以及由此而致的功能缺陷,已经成为影响患者生活质量的障碍和临床治疗的难题。近年来,随着分子生物学和基因技术的发展,对上皮的微观结构有了更深入的研究,进一步认识到上皮结构蛋白对维持上皮组织的完整性及其功能的重要性,以及与上皮结构蛋白异常相关的人类遗传和获得性疾病的发病机制,从而为这类疾病的诊断与治疗提供了新的方向。

缺氧诱导因子-1α在人与小鼠口腔癌形成过程中的表达分析

目的对比分析缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人与BALB/c小鼠正常口腔黏膜上皮、异常增生、高分化鳞癌及颌下淋巴结转移灶中的表达情况。方法通过4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)饮水法造模,培养口腔黏膜上皮产生异常增生、鳞癌及其颌下淋巴结转移的BALB/c小鼠20只,另收集人正常口腔黏膜上皮、异常增生、高分化鳞癌及其颌下淋巴结转移灶标本各20份,用免疫组织化学方法检测各标本HIF-1α的表达情况,比较人和BALB/c小鼠中正常口腔黏膜上皮、异常增生、高分化鳞癌及颌下淋巴结转移灶中HIF-1α的表达差异。结果人和小鼠HIF-1α阳性表达率均呈由正常口腔黏膜上皮、异常增生到口腔高分化鳞癌的上升趋势,但颌下淋巴结转移灶表达较原发灶明显降低。HIF-1α阳性表达率在正常口腔黏膜上皮、异常增生和口腔高分化鳞癌中的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 HIF-1α在人与小鼠正常口腔黏膜上皮、异常增生、高分化鳞癌及其颌下转移淋巴结相应阶段的表达相似。

表皮生长因子甘草锌复合膜治疗口腔溃疡的实验研究

目的:探讨表皮生长因子甘草锌复合膜对口腔溃疡动物模型的疗效。方法:将24只家兔随机分为治疗组、对照组和空白组,各8只。以冰醋酸润湿脱脂棉,在家兔右侧靠口角黏膜处烧灼1min,生理盐水冲洗5min,24h形成溃疡。溃疡形成后每日8:00、12:00、16:00对家兔进行麻醉,空白组不做治疗,治疗组和对照组分别使用复合膜和本院制剂溃疡糊剂治疗2h,疗程为5d,每日测量家兔溃疡面最大直径,进行组间对比观察。结果:(1)治疗至第3天时,治疗组疗效优于对照组及空白组(P<0.05),对照组与空白组差异无统计学意义(P>0.05);治疗第5天时,治疗组及对照组疗效差异无统计学意义(P>0.05),但均优于空白组(P<0.05)。(2)在外观治愈的家兔中,对照组家兔组织上皮已修复,但比正常组织薄,固有层纤维比正常组织疏松;治疗组家兔上皮表面不全角化,与正常组织形态基本一致。结论:表皮生长因子甘草锌复合膜治疗口腔溃疡疗效确切。

组织块法结合胰蛋白酶消化法培养分离人口腔黏膜上皮细胞和成纤维细胞

目的介绍组织块法结合胰蛋白酶消化法培养、分离人口腔黏膜上皮细胞和成纤维细胞。方法选择10例患者第三磨牙拔除时切除的龈瓣,大小为(1×0.5)cm^2/块。将带有上皮层和固有层的组织块种植于培养瓶中,待组织块细胞增殖后,通过胰蛋白酶消化法分离获得原代上皮细胞和成纤维细胞。采用免疫荧光和HE染色进行细胞鉴定。结果组织块植入后的第2 d^3 d可看到组织块周边出现新分裂增殖的细胞,14 d细胞增殖达到0.5 cm^1.0 cm后,进行初次传代。胰蛋白酶消化法可初步分离出上皮细胞和成纤维细胞。通过在不同培养基中的传代培养,2种细胞可以获得进一步纯化。结论组织块法结合胰蛋白酶消化法能快速高效的培养分离口腔上皮细胞和成纤维细胞,是一种实用的口腔黏膜细胞培养方法。