Lessons from Vibrio Pathogen and the Comparative Study of Vaccines Developed

Cholera continues to be one of the most common causes of morbidity and mortality among children and adults in developing countries. Vaccine against cholera is an approach in the control of this epidemic and pandemic disease. From the development of very early oral cholera vaccine, advances in vaccine development documented due to a good illustration of the epidemiology, outbreak strategy, and pathophysiology of the disease causing pathogen. The newer-generation oral cholera vaccines are safe and guarantee a high level of protection during outbreak settings for several years. Yet infants and young children in developing countries are hyporesponsive to vaccines and show poor protection against cholera. In this review, we survey and analyse our current knowledge on the etiology of cholera, its clinical manifestation, global epidemiology and elaborate the vaccine candidates, which are effective against the pathogen and the corresponding immune responses to the available vaccines. These reviews comprehensively cover the salient features of recent discoveries related to Vibrio cholerae virulence, past and present vaccine candidates and their advantages and disadvantages with their development strategies. We believe that the advances that have been included in this review will give a comprehensive insight to the prevention and control of cholera outbreaks and development of effective cholera vaccines.

口服轮状病毒减毒活疫苗发生肠套叠1例分析

轮状病毒感染是引起严重胃肠炎、儿童腹泻的主要原因,接种轮状病毒疫苗是预防婴幼儿轮状病毒腹泻的有效手段,但需考虑肠套叠发生风险。该文作者收治1名口服轮状病毒减毒活疫苗发生肠套叠患儿,分析患儿的临床资料,根据患儿临床表现进行针对性治疗,并分析发生肠套叠的可能机制。

口服轮状病毒活疫苗LLR-85-37株反应及血清学效果初步观察

应用轮状病毒活疫苗LLR-85株第37代毒种，即LLR－85－37株，接种成人10人，3～6岁小儿21人，6月龄～2岁婴幼儿15人，口服一次，剂量为3×106.0TCIDEA50／ml。所有服苗者均反应轻微，未见发热、腹泻和呕吐等症状。轮状病毒1，2，3，4各型血清中和抗体4倍增长阳性率：3～6岁小儿组（20人）分别为55.0％，50.0％，63．6％和40．0％，对照组13人为0％；6月龄～2岁婴幼儿组（13人）分别为38．5％，69．2％，3％和53.8％，对照组15人为0％。初步观察结果表明LLR－85－37株口服轮状病毒活疫苗是安全、有效的。

口服轮状病毒减毒活疫苗与麻疹-风疹联合减毒活疫苗联合接种的免疫原性和安全性研究

目的:探讨口服轮状病毒减毒活疫苗(oral live attenuated rotavirus vaccine,ORV)与麻疹-风疹联合减毒活疫苗(measles and rubella combined attenuated live vaccine,MR)联合接种的可行性,为制定免疫规划程序提供可靠的科学依据。方法:设两种疫苗同时接种组和单苗接种组,观察疑似预防接种异常反应(AEFI)发生情况,接种前后、联合接种与单独接种组之间抗体几何平均滴度/浓度(GMT/GMC)、抗体阳性率和阳转率的差异。结果:各接种组临床反应都轻微,实验组与各对照组免前免后同种抗体GMT/GMC、阳性率,以及免后抗体阳转率,其差异均无显著意义(P>0.05)。结论:ORV与MR同时接种未发现严重异常反应和相互干扰免疫应答,可以同时接种。

口服轮状病毒活疫苗LLR-85株的选育及鉴定

一株羊轮状病毒经初生小牛肾原代细胞传代，定名为LLR－85株。按Jennerian种痘法的原理，取第37代和第19代毒种，作为人用口服轮状病毒活疫苗的候选疫苗株。疫苗株电镜检查形态典型，抗原鉴定为A群、亚群Ⅰ、血清型G10和P12。电泳型为长型，11条带。病毒滴度可达105.0～7.0TCIDEA50。经无菌试验、支原体检查、外源因子检查及动物安全试验等项目检定，均符合我国规程要求。疫苗株遗传性状稳定，有望用于婴幼儿轮状病毒急性腹泻的预防。

人源轮状病毒转基因马铃薯口服免疫小鼠的免疫应答研究

目的分析人源轮状病毒转基因植物抗原的口服免疫应答反应。方法在根癌脓杆菌介导获得系列转基因马铃薯植株的基础上,用ELISA分析转基因马铃薯中目的蛋白表达水平。马铃薯块茎直接口服免疫Balb/c小鼠,ELISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平。结果获得一株最高表达量的转化株;口服免疫可诱导较强的血清IgG反应和强烈的黏膜sIgA反应,粪便的sIgA最高,唾液次之,尿液中无sIgA;加霍乱毒素B亚单位(CTB)佐剂免疫组小鼠和霍乱毒素(CT)佐剂免疫组小鼠抗体水平无显著差异,无佐剂免疫组小鼠抗体水平略低。结论人源轮状病毒转基因植物疫苗联合黏膜佐剂免疫动物可诱导特异的系统与黏膜免疫应答,且黏膜免疫强度略高于系统免疫。

OPV疫苗糖丸在-20℃以下保存的稳定性

目的：考察口服脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸（OPV）在-20℃温度下保存的稳定性.方法：将存放在-20℃以下1999～2003年生产的疫苗糖丸样品各随机抽取10个批号,分别进行3价总病毒含量及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分型病毒含量检测,根据检测结果,分析糖丸存放于-20℃以下1～5年其病毒含量及其变化.结果：糖丸存放于-20℃以下2年,其3价总病毒含量及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分型病毒含量4个指标均达到2000年版《中国生物制品规程》的要求;-20℃以下保存5年,3价总病毒含量及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分型病毒含量（log CCID50/粒）平均值分别为5.59±0.12、5.57±0.08、5.02±0.24及4.85±0.29;在3个型中,Ⅲ型病毒含量下降值最多,Ⅰ型次之,Ⅱ型最少（P＜0.01）.结论：口服脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸存放于-20℃以下1～5年的稳定性良好.

甲型肝炎减毒活疫苗(L-A-1株)口服免疫小白鼠抗体反应

为研究甲型肝炎减毒活疫苗（L－A－1株）口服免疫的免疫原性，114只小白鼠1次口服免疫后1～8周内，每周收集肠洗液和血清样品，用ELISA方法检测特异抗体反应。111只小白鼠检测到阳性抗体反应，阳转率为93．37％。肠洗液S－IgA阳转率高峰在第1和第6周（65％和64％）。血清IgA于第一周未测到，其高峰在第6周（100％）。IgM于第1周即达高峰（88％），IgG于第3周达高峰（88％）。至第8周末，S－IgA维持在40％，IgA、IgM和IgG分别维持在90％，80％和80％。实验结果表明，该疫苗口服免疫后具有良好的免疫原性，可激活小白鼠的局部与全身免疫反应。

口服轮状病毒活疫苗的安全性临床观察

为了观察口服轮状病毒活疫苗的安全性，2004年4～10月在济南市中心医院预防接种门诊对总服用该疫苗的410例7月龄～3岁的幼儿密切观察其反应，测量腋下体温并询问有无不适症状等。结果显示，95．61％幼儿（392／410）无不良反应；约4．39％（18／410）出现发热、腹泻等不良副反应，其中强反应3例（0．73％），中度反应11例（2．68％），轻度反应4例（0．98％），均于对症治疗后3日内缓解并消失。临床资料证明，使用该疫苗是安全的。

可生物降解微球甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴的免疫应答

目的 探索用一种新型的甲型肝炎减毒活疫苗及其免疫途径。方法 用可生物降解的材料聚乳 酸／乙醇酸（ＰＬＡ／ＰＬＧ）包裹甲型肝炎减毒活疫苗，制成微球型疫苗，检测微球的大小及在体外病毒释放的状况，和口 服免疫恒河猴后病毒在体内繁殖及免疫应答状况。结果 微球大小在６～１０μｍ范围，体外病毒抗原释放长达２７ｄ 左右，体外抗原释放高峰在３～７ｄ，口服免疫恒河猴后，约１ｗ左右开始排毒，以后一直呈间断排毒。抗体应答于第 ３ｗ出现，高峰期在５～６ｗ，达１２６１ＭｍＩＵ／ｍｌ，随后逐渐下降，口服加强免疫后，抗体回升，野毒株攻击后，抗体再度回升 达１２４４ｍＩＵ／ｍｌ。结论 微球型甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴后，能引起一定水平的免疫应答。

轮状病毒疫苗对婴儿轮状病毒肠炎的影响

目的 观察轮状病毒疫苗对预防婴儿轮状病毒性肠炎的有效性和安全性.方法 将300名年龄为2个月～1岁的健康婴儿分为两组,疫苗组（n=150）给予口服轮状病毒疫苗,非疫苗组不予口服轮状病毒疫苗,跟踪随访两组婴儿,比较两组婴儿轮状病毒肠炎的发生率、严重病例比率及住院治疗比例.结果 疫苗组轮状病毒性肠炎发生率为11.27%,严重病例比率为4.93%,住院治疗比例为7.04%;非疫苗组轮状病毒性肠炎发生率为27.74%,严重病例比率为13.87%,住院治疗比例为16.06%,两组比较有显著性差异（χ^2分别为11.11、6.59、5.58,均P〈0.05）.疫苗组未发现严重不良反应.结论 轮状病毒疫苗可减少小儿轮状病毒性肠炎的发病率,减轻病情的严重性,减少住院比例,且使用该疫苗较为安全.口服轮状病毒疫苗可减轻轮状病毒性肠炎对家庭和社会造成的经济负担.

减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493电转至上述菌株,构建ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的血清型与亲本株ΔcrpΔcya C78-1和疫苗株C500相同,并能够稳定遗传缺失型asd基因片段;其生长速度略慢于ΔcrpΔcya C78-1,且二者均明显慢于疫苗株C500;其生化特性结果也与ΔcrpΔcya C78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的毒力与ΔcrpΔcya C78-1基本相当,但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论:上述结果表明,减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。

狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗的制备及理化性质的检测

【目的】分析研发的狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗的脂质体形态、粒径分布状态、疫苗抗原包封率,确定狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗的制备工艺。【方法】(1)以大豆卵磷脂、胆固醇、十八胺、VE等物质为原料,采用薄膜分散法制备空白脂质体,采用电子显微镜和激光粒径分布仪测定空白脂质体的形态与粒径分布;(2)采用冷冻干燥方法将狂犬病rSRV9减毒株与空白脂质体等体积混合后冻干,制备狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗;(3)采用BCA蛋白定量法检测狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗的抗原包封率。【结果】制备空白脂质体形态为大单室脂质体;平均粒径为378 nm;疫苗包封率为71.19%。【结论】薄膜分散-冻干方法制备狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗,抗原包封率高、性状稳定。

口服轮状病毒活疫苗安全性和免疫原性观察

为了观察口服轮状病毒活疫苗在儿童服用后的安全性和免疫原性效果.于惠州市选择63名6月龄～3岁的儿童为观察对象.所用疫苗由兰州生物制品研究所生产,服苗前和服苗后4～5周采末梢血,以中和试验检测抗轮状病毒(G1、G2、G3、G4)型抗体及疫苗株(LLR型)的抗体水平.63名儿童服苗前、后采集的血清样本双份配对均有效者为37人.37人服苗后各型抗体阳转率为47.06%～72.72%;≥4倍增长率为43.40%～66.04%;各型中和抗体免疫前后平均增长2.67～3.01倍.63名服苗儿童中的不良反应为低热3例(24.67%)、中热1例(1.59%)、无高热反应.观察结果表明,轮状病毒具有良好的免疫原性和安全性.

恶性疟原虫74肽抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌的表达和家兔免疫应答

利用减毒鼠伤寒沙门氏菌来表达外源抗原并制备口服活菌苗,是疫苗研究的一个新的突破。作者已在减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261以β—半乳糖苷酶(GZ)融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫74肽基因HGFC。现报道用活菌SL3261(pWRC)(C组)、SL3261(pWR450-1)(R组)分别免疫新西兰家兔,研究其在家兔体内免疫应答的结果。

甲肝减毒活疫苗口服免疫动物后的抗体反应

用PLAG微粒包裹甲肝减毒活疫苗制成微球口眼免疫恒河猴及昆明种小鼠，用EIA法对HAV-IgM、HAV-IgG、HAV-IgA等抗体进行检测，以筛选一种方便易行的免疫途径。结果表明；恒河猴抗体应答于第3周出现，高峰期在5～6周，达1261mIU／mL，随后逐渐下降，口服加强免疫后，抗体回升，野毒株攻击后，抗体再度回升达1244mIU／mL。初次免疫HAV-IgM滴度为1：4000，加强免疫后滴度为1：1000，野毒株攻击后下降为1：100。对照组仪在野毒株攻击后测到HAV-IgM。小鼠免疫2周后有HAV-IgG抗体产生，4周达高峰，S-IgA抗体1周开始测到，4周达高峰并持续两周后开始下降。微粒包裹疫苗免疫灵长类动物后所诱导产生的抗体应答，对野毒株攻击的保护效果明显。小鼠免疫结果与报道相似，但抗体反应出现的时间较免疫恒河猴的时间有所提前。

鼠伤寒沙门菌SL1344株侵袭性蛋白B缺失株asd平衡致死系统的构建及特性的研究

目的:为研究用于能够稳定携带外源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究以减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsipB为研究对象,利用自杀性质粒pREΔasd介导的细菌同源重组技术,构建SL1344ΔsipBΔasd宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果表明SL1344ΔsipBΔasd构建成功。生物学特性结果表明SL1344ΔsipBΔasd的血清型与SL1344ΔsipB相同,并能够稳定遗传缺失后的asd基因;其生长速度和生化特性与亲本株SL1344基本相同,并且该缺失株仍然具有运动性的能力,小鼠攻毒试验表明SL1344ΔsipBΔasd电转了携带asd基因的互补质粒pYA3493后,其毒力较亲本菌株SL1344约降低至1.4%。结论:以上结果证明,减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsipBΔasd菌株构建成功,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经口接种小鼠产生抗hCGβ体液免疫应答

目的：用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经口接种不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答。方法：用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb．hCGβ灌服6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液抗hCGβIsG和IgA抗体滴度。流式细胞仪分析B和T细胞的增殖情况，ELISpot计数抗hCGβIsG和IsA抗体分泌细胞克隆数。结果：不同品系小鼠经口腔接种10^9、10^10Lb．hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10。诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10Lb．hCGβ诱导的抗血清结合hCGβ抗原的能力〉100ng／n11。Lb．hCGβ口腔接种后，BALB／c小鼠子宫和阴道的B细胞增殖；C57BL／6小鼠子宫及阴道的抗体分泌细胞克隆数较脾脏明显增多（P〈0．05）。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb．hCGβ可经口接种诱导有效的抗hCGβ免疫应答，产生的应答强度与免疫剂量呈正相关。

HCV多表位抗原基因重组减毒口服活菌苗的研究

把丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)复合多表位抗原基因PCX与 β 半乳糖苷酶基因 (GZ)融合后 ,构建重组减毒鼠伤寒沙门氏菌口服活菌苗SL32 61 ( pWR/PCX) ,免疫小鼠及家兔后 ,于第 6周始可检测到低水平的抗 GZ PCXIgG( 1∶2 0 0 ) ,至 3月时最高滴度分别达1∶80 0及 1∶2 560 0 ,均显著高于宿主菌SL32 61组及空白对照组。在免疫小鼠的肠道灌洗液中可检测到抗 GZ PCXsIgA。GZ PCX抗原可促进免疫小鼠及家兔淋巴细胞增殖 ,诱发明显的迟发性超敏反应 (DTH)。口服免疫后小鼠体重出现一过性下降 ,但未见其它明显的毒性作用 ,安全性较好。本研究从新的角度探讨了HCV复合多表位重组口服活菌苗的可行性 ,为HCV疫苗的研究提供新的实验依据。

口服轮状病毒活疫苗的社区应用效果评价

目的探讨口服轮状病毒活疫苗在社区卫生服务中的应用效果,以提高预防接种率,促进社区卫生服务疾病预防工作。方法将在社区健康服务中心建立健康档案的2000名6月龄～3周岁的儿童随机分成服苗组和对照组,进行轮状病毒腹泻的发病情况比较。结果服苗组发病率为2.1%,同期对照组的发病率为8.4%,两者差异有统计学意义(P<0.01),且服苗组的发病程度明显低于对照组。结论口服轮状病毒活疫苗预防儿童轮状病毒腹泻效果显著。