冬凌草甲素对脑缺血再灌注模型AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路调控研究

目的探讨冬凌草甲素(ORI)通过调控AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体功能,减轻局灶性脑缺血再灌注(CIR)损伤。方法随机将PC12细胞分为5组:Control组,细胞正常培养不做处理;氧-葡萄糖剥夺和再灌注组(OGD/R组),使用PC12细胞建立氧-葡萄糖剥夺和再灌注模型;氧-葡萄糖剥夺和再灌注组+ORI(OGD/R+Orbicin),PC12细胞建立氧-葡萄糖剥夺和再灌注模型前使用ORI预处理PC12细胞4h;氧-葡萄糖剥夺和再灌注组+ORI+化合物C组(OGD/R+Orbicin+CC),氧-葡萄糖剥夺和再灌注前加入化合物C(3μmol·L^(-1)6h)以抑制AMPK信号传导,同时使用ORI预处理PC12细胞4h;氧-葡萄糖剥夺和再灌注组+ORI+si-SIRT1组(OGD/R+Orbicin+si-SIRT1),在氧-葡萄糖剥夺和再灌注前,使用ORI预处理PC12细胞4h,并将si-SIRT1转染至PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定法评估PC12细胞的细胞活力,酶联免疫法定量乳酸脱氢酶(LDH)释放量,丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)和过氧化氢酶(CAT)活性,实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、沉寂信息调节因子(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助因子1-α(PGC-1α)mRNA水平,蛋白印迹(Western blot)分析胱天蛋白酶3(caspase-3)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(cleave-caspase-3)、AMPK、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、SIRT1、PGC-1α、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)、叉头框蛋白O1(FOXO1)的蛋白表达情况。结果在PC12细胞的OGD/R模型中,ORI降低NO、MDA水平和LDH泄漏释放水平,通过上调SOD、ATP和CAT酶活性提高抗氧化能力,上调了AMPK、SIRT1和PGC-1αmRNA的表达,抑制cleave-caspase-3的蛋白表达,上调p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、NRF1、TFAM和FOXO1蛋白表达。然而,这些作用分别被化合物C(一种特异性AMPK抑制剂)和si-SIRT1消除。结论ORI可以通过AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路改善线粒体能量代谢和减少氧化应激来减轻局灶性CIR损伤。