NCTD对白血病细胞DR5表达的影响

目的研究去甲斑蝥素(NCTD)对白血病细胞死亡受体(DR)5表达的影响。方法不同浓度NCTD处理K562和HL-60细胞16 h后,流式细胞术分析DR5表达和细胞内活性氧(ROS)相对含量;通过免疫印迹技术分析激酶JNK1的表达。结果 NCTD以浓度依赖方式上调DR5表达,细胞内活性氧含量和JNK1表达也随NCTD浓度增大而增加。结论 NCTD可能通过ROS/JNK途径上调DR5表达。

NCTD和IFN-γ对Jurkat细胞mTRAIL表达的影响

目的研究NCTD和IFN-γ对T细胞Jurkat TRAIL表达的影响。方法培养Jurkat,用不同浓度的IFN-γ和NCTD处理细胞,流式细胞术分析细胞表面TRAIL表达和细胞内活性氧水平。结果 IFN-γ以浓度依赖的方式上调Jurkat细胞TRAIL表达,而NCTD可增强IFN-γ对TRAIL的上调效应;NCTD可增加细胞内活性氧的表达。结论 NCTD可能通过活性氧调节的信号途径协同IFN-γ增强TRAIL的表达。

去甲斑蝥素增强Bel7402中IκBα表达和抑制细胞增殖的研究

目的 从核转录因子 NF- κB和其抑制分子 IκBα的相互作用揭示去甲斑蝥素的抗肿瘤作用机理 ,为其进一步开发利用提供理论依据。 方法 选用人肝癌细胞株 (Bel740 2 ) ,常规培养 ,分为细胞对照组及去甲斑蝥素不同浓度组 ,进行细胞生长曲线测定、细胞集落形成实验及 MTT实验 ;同时对细胞进行 Giem sa染色、免疫细胞化学染色 (一抗分别为 anti- p6 5、anti- IκBα)。Western blot检测 IκBα的表达。 结果 生长曲线测定 ,细胞集落形成实验及 MTT实验结果表明 ,去甲斑蝥素对人肝癌细胞株的生长有明显的抑制作用 ;免疫细胞化学及 Western blot结果显示 :去甲斑蝥素可增强细胞内 IκBα的表达 ,并抑制 NF- κB的表达与活性。 结论 去甲斑蝥素有良好的抗肿瘤效应 ,其作用机理可能与其能增强核转录因子 NF- κB的抑制分子 IκBα的表达有关。

去甲斑蝥素对卵巢癌3AO和AO细胞的体外抑制作用

目的：观察去甲斑蝥素（ＮＣＴＤ）体外对卵巢癌３ＡＯ细胞和ＡＯ细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。方法：利用细胞培养技术，以结晶紫染色法测定ＮＣＴＤ对卵巢癌３ＡＯ和ＡＯ细胞的抑制作用，并利用流式细胞仪测定分析ＮＣＴＤ作用下两种肿瘤细胞的细胞周期变化。结果：ＮＣＴＤ１μｇ／ｍｌ即对３ＡＯ和ＡＯ细胞有轻微抑制作用，其半数抑制剂量（ＩＣ５０）分别为２０μｇ／ｍｌ和１０μｇ／ｍｌ。ＮＣＴＤ作用６ｈ，３ＡＯ和ＡＯ细胞生长即受到抑制，其抑制率随着药物作用时间延长而升高。在ＮＣＴＤ作用下，３ＡＯ和ＡＯ细胞Ｇ２＋Ｍ期细胞百分比明显升高，而Ｓ期细胞百分比相应地明显降低。结论：ＮＣＴＤ体外对卵巢癌３ＡＯ和ＡＯ细胞有明显抑制作用，其抑制作用呈剂量和时间依赖性。

去甲斑蝥素处理肝癌细胞SMMC-7721蛋白质组的双向电泳分析

目的分析去甲斑蝥素(NCTD)作用于肝癌细胞SMMC-7721前后蛋白质组表达的差异。方法采用四氮唑蓝还原法(MTT)测定细胞生长抑制率。20μg/ml的NCTD作用于肝癌细胞SMMC-772124h,分别收集处理组与对照组细胞,裂解并提取细胞内总蛋白;双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质,凝胶银染,ImageMaster2D Platinum软件分析2-DE图谱,寻找差异表达蛋白点。结果NCTD能诱导肝癌细胞SMMC-7721的凋亡,具有时间和剂量依赖性,与对照组比较,处理组2-DE图谱中有5个蛋白点表达上调,6个蛋白点表达下调。结论抗癌药NCTD能诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡并引起细胞内蛋白质组表达的改变。

去甲斑蝥素对食管癌细胞株Eca-109中hTERT的表达和PTPRO基因启动子甲基化影响的实验研究

目的探索去甲斑蝥素(NCTD)诱导食管癌细胞Eca-109对人端粒酶逆转录酶(hT ERT)表达和受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)基因启动子甲基化的影响。方法 MTT比色法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/ml)NCTD及不同作用时间(12、24 h)对食管癌细胞Eca-109增殖的影响;TUNEL法配合激光共聚焦扫描显微镜检测NCTD+Eca-109组(实验组)和Eca-109组(对照组)细胞凋亡情况;甲基化特异性PCR(MSP)检测实验组和对照组中PTPRO基因启动子的甲基化状态,Western blotting检测实验组和对照组hT ERT蛋白的表达。结果 MTT检测显示,NCTD可抑制Eca-109细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,不同作用时间和浓度的细胞增殖抑制率的差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法结合激光共聚焦扫描显微镜观察显示,实验组细胞内部结构发生剧烈的变化,较对照组细胞核染色质致密浓染,核形缩小;MSP检测显示,对照组PTPRO基因启动子发生明显甲基化;Western blotting检测显示,实验组hT ERT蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论NCTD对食管癌细胞Eca-109有细胞毒性,能够抑制细胞生长,其机制可能与下调hT ERT蛋白表达和PTPRO基因启动子去甲基化有关。

去甲斑蝥素PLA-PEG纳米微球的制备研究

采用复乳法和相分离法两种方法制备去甲斑蝥素的聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物(PLA-PEG)纳米微球。对比了两种不同方法对制得的含药微球在粒径、包封率以及缓释性能方面的差异。用激光粒度分析仪表征了微球的粒径及其分布,并用透射电镜观察了微球的形貌,其结果表明:复乳法与相分离法制备的微球粒径均在100nm左右,并且成球性好;相对于复乳法,相分离法制备的微球分布较宽,包封率较高,可达到50%左右;体外释放实验表明两种方法制备的微球都具有缓释作用。

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞生长抑制作用的实验观察

目的探讨去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞系抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测细胞的生长活性,应用流式细胞仪检测、透射电镜下观察去甲斑素处理HepG2细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生情况。结果 5～40μg/ml去甲斑蝥素均能抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),其抑制率与作用时间及NCTD浓度相关。流式细胞仪检测发现,去甲斑蝥素处理HepG2细胞后,实验组G2/M细胞明显多于对照组,P<0.05,提示细胞周期停滞于G2/M期。透射电镜下可见,HepG2细胞出现凋亡形态学改变。结论去甲斑蝥素对HepG2细胞有抑制作用,可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。

去甲斑蝥酸钠脂质微球在大鼠体内的组织分布

目的比较去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液与溶液型注射液在大鼠体内组织中的分布特征。方法大鼠股静脉注射去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液,采用HPLC-MS法测定不同时间点大鼠组织脏器中的药物浓度。结果与去甲斑蝥素注射液相比,脂质微球注射液在肝脏组织中具有较高的浓度,肝脏相对分布率由16.3%增加至32%,AUC值为218.72 mg.L-1.h-1。而在心脏、肾脏、血液中的药物分布均无明显的变化。结论将去甲斑蝥酸钠制备成以脂质微球载药,使其在体内分布具有肝脏靶向性,从而在一定程度上提高了药物对肝癌及肝硬化的治疗效果。

去甲斑蝥素诱导超氧阴离子的产生介导HeLa细胞凋亡

目的观察活性氧(reactive oxygen species, ROS)在去甲斑蝥素(norcantharidin, NCTD)诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡中发挥的调节作用。方法体外培养HeLa细胞,甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测NCTD的细胞毒性,流式细胞分析法检测ROS的产生,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化,免疫蛋白印迹法观察凋亡相关蛋白Procaspase 9、Caspase 3和ICAD的表达水平变化。结果 NCTD能够时间依赖性地诱导细胞ROS产生,NCTD产生的ROS主要以超氧阴离子的形式存在,60μmol/L的NCTD作用于HeLa细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,形成凋亡小体,活化Caspase-9和Caspase-3,并裂解ICAD,诱导细胞凋亡的发生。超氧阴离子的清除剂SOD可显著逆转NCTD诱导细胞生长抑制和细胞凋亡,明显影响NCTD诱导的Caspase-9蛋白的裂解,Caspase-3的剪切和ICAD的降解。结论 NCTD诱导超氧阴离子的产生介导HeLa细胞凋亡。

伊立替康联合去甲斑蝥素对人胃癌细胞作用的考察及协同作用机制研究

研究了伊立替康(CPT-11)联合去甲斑蝥素(NCTD)对人胃癌细胞BGC-823增殖的影响及协同作用机制.分别利用CPT-11 30、60、90、120、150μmol/L,NCTD 30、60、90、120、150μmol/L和两药按上述浓度1∶1联用,以及两药上述浓度完全交叉组合作用BGC-823细胞24、48和72 h,并且以不同序贯方式作用BGC-823细胞24 h.MTT法检测BGC-823细胞的增殖,采用中效原理评价两药联合作用;流式细胞术测定CPT-11 60μmol/L、NCTD 60μmol/L和联合用药(60∶60)μmol/L,以及不同序贯方式作用BGC-823细胞24 h后细胞周期及凋亡的情况;Western blot法检测CPT-11 30、60μmol/L,NCTD 30,60μmol/L和联合用药(30∶30,60∶60)μmol/L作用BGC-823细胞24 h后Pdcd4和p53蛋白表达水平.结果显示:CPT-11及NCTD联合用药比单独用药对细胞增殖的抑制作用增强,IC50明显减小(P<0.05),单独使用CPT-11或NCTD作用24、48和72 h时的IC50分别是联合使用时的2.83、3.15、2.19倍以及2.66、3.11、2.45倍,并且两药联合用药具有协同作用效应;两药合用24 h时先给CPT-11方案抑制作用优于先给NCTD方案,且优于同时给药方案(P<0.05);CPT-11 60μmol/L作用24 h引起BGC-823细胞S和G2-M期阻滞(P<0.01),NCTD 60μmol/L作用24 h引起细胞G2-M期阻滞(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05),联合用药(60∶60)μmol/L作用24 h,主要引起细胞G2-M期阻滞(P<0.01),与先给NCTD 6h方案及同时给药相比,先给CPT-11 6h方案主要引起细胞S期阻滞增加(P<0.05)以及细胞凋亡增加;CPT-11 30、60μmol/L作用12 h后Pdcd4上调表达,p53下调表达(P<0.05),NCTD 30、60μmol/L作用12 h后Pdcd4下调表达,p53上调表达(P<0.05),联合用药(30∶30,60∶60)μmol/L作用24 h后Pdcd4及p53蛋白表达均上调(P<0.05).上述结果表明:CPT-11联合NCTD对人胃癌BGC-823细胞有协同抑制作用,其机制主要是诱导细胞G2-M期阻滞,并与抑癌基因蛋白Pdcd4及p53上调表达有关;两种药物联用时序贯次序对联合作用有影响,先给CPT-11方案要优于先给NCTD方案及同时给药方案,其机制主要是引起S期阻滞增加以及细胞凋亡增加;抑癌基因蛋白Pdcd4与p53之间可能存在负调控关系.

去甲斑蝥素抑制人脑胶质瘤细胞增殖的体内外研究

目的研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体内外对人脑胶质瘤细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和去甲斑蝥素6个剂量组,MTT法检测NCTD对人脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组、顺铂阳性对照组以及NCTD 3个剂量组,腹腔注射给药12 d后,取血检测血常规及肝肾功能;处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 NCTD 6个剂量组显著抑制SHG-44细胞的增殖,且呈时间和剂量依耐性;并提高SHG-44细胞的凋亡率;NCTD 3个剂量组可抑制SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤的生长,对移植瘤裸鼠血常规及肝肾功能无明显影响。结论 NCTD体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。

几种中药单体促进阿霉素内化协同诱导白血病细胞凋亡

为了分析3种中药单体对白血病细胞内化阿霉素和诱导细胞凋亡的影响,采用体外培养白血病细胞,以10μmol/L阿霉素处理,或同时加入中药单体(去甲基斑蝥素,β-榄香烯和姜黄素)处理细胞。流式细胞术分析处理1,2 h和4 h后细胞内化阿霉素的相对含量。继续培养至16 h,流式细胞术分析细胞凋亡,并用免疫印迹技术分析细胞内活化Caspase-3的表达。结果3种中药单体中,去甲基斑蝥素和姜黄素具有显著促进阿霉素内化和促进细胞凋亡的效应;β-榄香烯也可增强阿霉素诱导细胞凋亡的效应,但对阿霉素内化无显著影响;去甲基斑蝥素和姜黄素与阿霉素联合可增加活化Caspase-3水平。表明3种中药单体均可增强阿霉素诱导白血病细胞凋亡的效应,其中去甲基斑蝥素和姜黄素的增敏效应与其促进阿霉素的内化相关。

基于IGF-1R信号通路探讨去甲斑蝥素诱导宫颈癌细胞凋亡的作用机制

目的观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)诱导的超氧阴离子对IGF-1R的表达影响,探讨NCTD调控宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法体外培养HeLa细胞24h后,直接加入60μmol·L^(-1)NCTD作用至指定时间,或者先加入20μmol·L^(-1)AG1024(IGF-1R的特异性酪氨酸激酶磷酸化抑制剂)或10μmol·L^(-1)genistein(总的酪氨酸激酶抑制剂)或超氧阴离子清除剂超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)作用1 h后,再加入60μmol·L^(-1)NCTD继续培养至指定时间点,然后采用甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测AG1024和genistein对NCTD诱导的细胞毒性的影响;采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用流式细胞分析法检测细胞凋亡情况和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生变化;采用ELISA测定IGF-1R酪氨酸激酶的活力;采用免疫蛋白印迹法观察IGF-1R和p-IGF-1R的蛋白表达水平变化。结果AG1024和genistein预处理HeLa细胞后,能够显著促进NCTD对HeLa细胞的生长抑制作用;AG1024预处理再加入NCTD作用,细胞皱缩、变圆,出芽形成明显的凋亡小体。AG1024预处理再加入NCTD显著地升高了NCTD诱导的SubG1峰值;NCTD能时间依赖性的显著下调p-IGF-1R表达水平。SOD预处理后降低了NCTD诱导的ROS的产生。NCTD对IGF-1R信号通路有抑制作用,但SOD预处理后影响了NCTD对IGF-1R的酪氨酸激酶活力的抑制作用。AG1024促进了NCTD诱导的超氧阴离子产生,增加了NCTD对p-IGF-1R蛋白表达的抑制作用。结论NCTD可能是通过超氧阴离子的产生发挥其对IGF-1R通路的抑制作用,介导HeLa细胞凋亡。

乳糖化-去甲斑蝥素抗肿瘤药效学及急性毒性试验研究

目的:观察乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)及其纳米粒(Lac-NCTD-NPs)的体内外抗肿瘤的作用,并进行急性毒性考察。方法:采用MTT法考察Lac-NCTD及Lac-NCTD-NPs对肿瘤细胞株HepG2、SMMC-7721和SGC-7901的细胞毒作用和半乳糖化小牛血清(Gal-FBS)的竞争性抑制作用,并建立H22肝癌细胞小鼠荷瘤模型考察药物在体内抗肿瘤活性;通过急性毒性实验计算Lac-NCTD腹腔给药的最大耐受量(MTD)。结果:HepG2、SMMC-7721细胞培养48h的体外细胞毒结果显示:Lac-NCTD-NPs的最强,其次是Lac-NCTD,且均能显著被Gal-FBS抑制;对SGC-7901,Lac-NCTD-NPs和Lac-NCTD的细胞毒作用并不比去甲斑蝥素(NCTD)强,且不受Gal-FBS的影响;体内抗肿瘤实验表明Lac-NCTD能有效地抑制H22肿瘤的生长。Lac-NCTD单次给药时最大耐受量MTD>20g/kg,多次给药时MTD>30g/kg,毒性远小于NCTD。结论:Lac-NCTD是毒性较小的安全的新型抗肿瘤药物。

去甲斑蝥素和它的抗癌作用与机制(英文)

去甲斑蝥素是传统抗癌中药斑蝥的活性成分斑蝥素的去甲基衍生物,近年在中国已作为一种常规的抗癌药物在临床应用。显然,了解去甲斑蝥素的抗癌作用及其分子机制有益于其临床应用和推广。但有关这方面的讨论文章却很少。本文将重点介绍去甲斑蝥素的抗癌作用,如诱导凋亡、抑制增殖、阻止侵袭转移、抗血管生成和/或抗血管生成拟态以及它们的分子机制。

去甲斑蝥二羧酸壳聚糖络合物的制备及药理活性研究

目的:制备去甲斑蝥二羧酸壳聚糖络合物(NCTD络合物),降低去甲斑蝥素的毒性,增强抗肿瘤活性。方法:应用间歇式碱性水解得到的高脱乙酰度(DD)壳聚糖与去甲斑蝥二羧酸制备络合物,通过小鼠尾静脉、灌胃方式分别观察络合物与去甲斑蝥素的急性毒性,计算半数致死量(median lethal dose,LD_(50));建立小鼠移植性H_(22)肝癌肿瘤模型,观察NCTD络合物对肿瘤生长的抑制作用。结果:NCTD络合物能降低去甲斑蝥素的毒性;络合物的低、中、高剂量组均抑制小鼠的肿瘤生长,抑瘤率分别达26.60%、31.69%、44.38%,呈量效关系。结论:去甲斑蝥二羧酸与壳聚糖所成的络合物增加了水溶性,降低了毒性,提高了疗效。

去甲斑蝥素诱导人直肠癌Colo320细胞凋亡作用研究

目的探讨去甲斑蝥素对人直肠癌Colo 320细胞的诱导凋亡作用.方法采用不同浓度的去甲斑蝥素(noncantharidin,NCTD)作用于人直肠癌Colo 320细胞24 h,应用光镜和透射电镜观察细胞形态学和细胞超微结构的变化,流式细胞的方法检测细胞生长周期,Western blot法检测细胞Bag-1和Bcl-2蛋白表达.结果光镜及透射电镜观察可见人直肠癌Colo 320细胞出现典型的凋亡形态学和超微结构的改变.流式细胞仪分析显示:经5μg/mL、10μg/mL和20μg/mL浓度NCTD处理人直肠癌Colo320细胞24 h后,G0/G1期和S期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,呈剂量依赖关系.Western blot检测显示,Bcl-2、Bag-1蛋白的表达均下降.结论 NCTD对人直肠癌Colo 320细胞具有促进凋亡、干扰细胞的有丝分裂、将细胞阻滞于G2/M分裂期和抑制Bag-1及Bcl-2蛋白表达的作用.

去甲斑蝥素对U937细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

为了观察去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病U937细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,试验将5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素与U937细胞共同培养48 h,采用MTT法测定细胞活性,应用免疫组织化学法检测细胞中细胞型FLICE抑制蛋白(cFLIP)、存活蛋白(survivin)以及胱天蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果表明:与阴性对照组比较,5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素组细胞活性下降(P<0.05或0.01);去甲斑蝥素显著抑制cFLIP和存活蛋白的阳性表达,促进胱天蛋白酶-3的阳性表达(P<0.05或0.01)。推测去甲斑蝥素可能通过下调cFLIP和存活蛋白的表达,上调胱天蛋白酶-3的表达诱导U937细胞凋亡。