-
题名人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达
被引量:1
- 1
-
-
作者
蔡富强
韩钰
王艳林
-
机构
三峡大学分子生物学研究所
三峡大学医学院
-
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期149-153,共5页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(30772590)
湖北省教育厅重点研究资助项目(D200713003)
-
文摘
克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1)。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞。阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1。原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定。结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化。建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础。
-
关键词
鸟氨酸脱羧酶抗酶1
突变
原核表达
-
Keywords
ornithine decarboxylase antizyme 1 mutation prokaryotic expression
-
分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
-
-
题名人OAZ突变基因的克隆构建及重组蛋白表达
被引量:2
- 2
-
-
作者
姜立
马文丽
柯杰兵
彭翼飞
李晋
徐兵
郑文岭
-
机构
南方医科大学基因工程研究所
中国人民解放军军事体育进修学院
南方医科大学人体解剖学教研室
南方医科大学附属南方医院
-
出处
《徐州医学院学报》
CAS
2007年第3期145-148,共4页
-
基金
广东省自然科学基金(5004737)
-
文摘
目的 构建人鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)突变基因,重组至原核表达载体中并表达出重组蛋白.方法 采用基因定点突变技术在OAZ基因TCCTGATG(199~206)位置造成第202位碱基T碱基缺失,使核糖体的阅读框+1移位,连续表达OAZ基因的ORF2部分.测序鉴定后,重组质粒转化BL21菌,进行突变基因的蛋白表达.结果 重组质粒经测序后确认202位碱基T缺失,其余碱基序列无变化.重组的突变基因转入BL21后在IPTG诱导下表达OAZ全长蛋白,SDS-PAGE分析在相对分子质量45 900左右出现新的蛋白条带.结论 成功构建人OAZ突变基因重组质粒,转化BL21后表达出融合的OAZ全长蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础.
-
关键词
鸟氨酸脱羧酶抗
突变
蛋白表达
-
Keywords
ornithine decarboxylase antizyme
mutation
protein expression
-
分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
-
-
题名小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1功能基因的克隆及原核表达
- 3
-
-
作者
刘梦瑶
韩钰
蔡富强
何玲
王艳林
-
机构
三峡大学分子生物学研究所
-
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第2期138-141,149,共5页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(30772590)
-
文摘
目的克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)功能基因,原核表达并纯化OAZ1重组蛋白。方法采用RT-PCR法从小鼠黑色素瘤细胞总RNA中扩增OAZ1基因,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因,并构建重组表达质粒pET15b/OAZ1-T,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重叠PCR法扩增出692bp的OAZ1功能基因,重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,重组蛋白可在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。纯化的重组蛋白纯度可达79.96%,且可与抗His标签抗体特异性结合。结论已成功克隆了小鼠OAZ1功能基因,原核表达并纯化了重组OAZ1蛋白。
-
关键词
鸟氨酸脱羧酶抗酶1
功能基因
重叠延伸PCR
原核表达
-
Keywords
ornithine decarboxylase antizyme-1 (OAZ1)
Functional gene
SOE PCR
prokaryotic expression
-
分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
-