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产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴OAZ1和OAZ2基因表达的研究 被引量:4
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作者 马容 康波 +1 位作者 姜冬梅 何珲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2015年第2期44-48,共5页
【目的】探讨产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴中OAZ1和OAZ2基因表达的差异。【方法】选取健康的产蛋前期和产蛋期四川白鹅母鹅各3只,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取总RNA并反转录合成cDNA,应用实时荧光定量PCR检测产蛋前期和产蛋期四川... 【目的】探讨产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴中OAZ1和OAZ2基因表达的差异。【方法】选取健康的产蛋前期和产蛋期四川白鹅母鹅各3只,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取总RNA并反转录合成cDNA,应用实时荧光定量PCR检测产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体、卵巢组织中OAZ1和OAZ2基因的相对表达量。【结果】在产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体和卵巢组织中,OAZ1和OAZ2基因均有表达,并且产蛋期OAZ1和OAZ2表达量均极显著高于产蛋前期(P<0.01),产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体和卵巢中OAZ1的表达量分别是产蛋前期的1.79倍(P<0.01)、2.96倍(P<0.01)和3.48倍(P<0.01);产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体和卵巢中OAZ2的表达量分别是产蛋前期的2.66倍(P<0.01)、1.38倍(P<0.01)和2.03倍(P<0.01)。【结论】OAZ1和OAZ2可在HPG轴的各级水平发挥其调控鹅繁殖过程的功能,OAZ1主要参与卵巢功能的调控,而OAZ2主要参与下丘脑功能的调控。 展开更多
关键词 四川白鹅 鸟氨酸脱羧酶抗酶1(oaz1) 鸟氨酸脱羧酶抗酶2(oaz2) 多胺 下丘脑-垂体-性腺轴 实时荧光定量PCR
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高表达OAZI-1的小鼠乳腺癌4T1细胞诱导抗肿瘤免疫应答的实验研究 被引量:3
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作者 杨建林 王艳林 +2 位作者 吕亚丰 魏木兰 曹春雨 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期948-953,共6页
目的在细胞和实验动物水平上分析高表达OAZI-1对小鼠乳腺癌4T1细胞诱导抗肿瘤免疫应答的影响。方法RT-PCR和Western blot用于鉴定高表达OAZI-1的4T1细胞(4T1/OAZI-1);流式细胞仪检测Mφ下同和DC对4T1细胞的吞噬率以及成熟DC标志性表面... 目的在细胞和实验动物水平上分析高表达OAZI-1对小鼠乳腺癌4T1细胞诱导抗肿瘤免疫应答的影响。方法RT-PCR和Western blot用于鉴定高表达OAZI-1的4T1细胞(4T1/OAZI-1);流式细胞仪检测Mφ下同和DC对4T1细胞的吞噬率以及成熟DC标志性表面分子的表达水平;ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中IFN-γ和TNF-α含量。用4T1/OAZI-1和4T1/3.1对照细胞分别接种Balb/c小鼠后,观察接种瘤的生长状况及荷瘤小鼠的生存期。结果1)成功构建OAZI-1高表达的4T1/OAZI-1细胞株;2)M?和DC对4T1/OAZI-1细胞的吞噬率(10.8%,58.4%)显著高于对照细胞(6.3%,19.6%);3)将DC与4T1/OAZI-1共孵育后,CD40、CD80和CD86(成熟DC细胞表面标志分子)表达阳性的DC比率(62.8%、77.9%和75.1%)显著高于和对照细胞共孵育的DC(43.9%、57.5%和49.6%);4)将4T1/OAZI-1活化的DC与Balb/c小鼠脾淋巴细胞共孵育后,细胞培养上清中IFN-γ含量(28.7 pg/ml)显著高于对照细胞(19.4 pg/ml);5)将4T1/OAZI-1和4T1/3.1细胞分别接种Balb/c小鼠右前肢腋窝皮下,小鼠体内4T1/OAZI-1接种瘤的生长速度显著低于对照细胞接种瘤,其生存期和血清TNF-α和IFN-γ水平也明显高于接种对照细胞的小鼠。结论高表达OAZI-1的小鼠乳腺癌4T1细胞能更有效地被抗原提呈细胞识别、吞噬并诱导T淋巴细胞活化与成熟,诱导机体的抗肿瘤免疫应答,抑制接种瘤在动物体内的生长。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1 乳腺癌细胞 抗肿瘤免疫
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OAZI-1增强小鼠Melan-A疫苗免疫原性 被引量:1
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作者 孙鹏 王艳林 吴红艳 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第9期1220-1225,共6页
目的探讨鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(OAZI-1)能否增强Melan-A疫苗的免疫原性,进而诱导实验动物体内更强的细胞免疫效应。方法构建真核表达质粒pc DNA3.1(-)/OAZI-1、pc DNA3.1(-)/Melan-A及pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1。将真核表达质粒... 目的探讨鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(OAZI-1)能否增强Melan-A疫苗的免疫原性,进而诱导实验动物体内更强的细胞免疫效应。方法构建真核表达质粒pc DNA3.1(-)/OAZI-1、pc DNA3.1(-)/Melan-A及pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1。将真核表达质粒作为基因疫苗免疫BALB/c小鼠,收集小鼠脾脏淋巴细胞及血液,用流式细胞计量术检测淋巴细胞亚群的变化;用乳酸脱氢酶(LDH)释放分析法检测脾淋巴细胞的肿瘤杀伤活性;用ELISA分析法检测血清INF-γ水平。结果成功构建了真核表达质粒pc DNA3.1(-)/OAZI-1、pc DNA3.1(-)/Melan-A及pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1;将真核表达质粒作为基因疫苗免疫小鼠后,小鼠脾脏CD4+T细胞比率显著性升高(P<0.05),其中以pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1免疫组和pc DNA3.1(-)/Melan-A免疫组升高更为明显(二者之间无显著性差异);上述3种基因疫苗接种小鼠后,CD8+T细胞比率也显著性升高(p<0.05),但以pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1免疫组升高最为显著,与所有其他组相比均有显著性差异(P<0.05);用pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1免疫小鼠能显著增加脾淋巴细胞的肿瘤杀伤活性(P<0.05);上述3种基因疫苗免疫小鼠后,仅pc DNA3.1(-)/Melan-A-OAZI-1组小鼠血清中INF-γ含量显著性升高(P<0.01)。结论 OAZI-1能通过促进肿瘤抗原提呈,增加机体的抗肿瘤免疫能力。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1 MELAN-A 肿瘤 免疫原性
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OAZ1基因诱导慢粒白血病K562细胞向成熟红系方向分化 被引量:1
4
作者 吴兵平 王星 +3 位作者 马文丽 张思毅 郑文岭 姜立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期361-367,共7页
近年来,鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)作为肿瘤治疗的潜在靶点备受关注.本文研究了OAZ1基因过表达对慢粒白血病K562细胞红系分化的作用.构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒载体pLVX-Neo-OAZ1-IRES-ZsGreen,包装病毒并感染K562细胞,Western印... 近年来,鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)作为肿瘤治疗的潜在靶点备受关注.本文研究了OAZ1基因过表达对慢粒白血病K562细胞红系分化的作用.构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒载体pLVX-Neo-OAZ1-IRES-ZsGreen,包装病毒并感染K562细胞,Western印迹验证其过表达效果.FACS检测细胞分化标志物CD71和GPA,结合联苯胺染色分析细胞红系分化情况.对比氯化高铁血红素(hemin)诱导组,实时RT-PCR检测与K562细胞红系分化、癌变的关键基因(GATA1、BCR/ABL、TGFβ)转录水平,对OAZ1诱导分化的机制进行初步探索.结果表明,慢病毒过表达载体及K562细胞过表达体系构建成功.OAZ1过表达后细胞红系分化标志物CD71+/GPA+为(11.22±2.09)%,与对照组(4.07±1.04)%、空病毒组(1.79±2.36)%相比差异极显著(P<0.01);联苯胺蓝染阳性率为(14.037±0.083)%,与对照组、空病毒组比较,差异也极显著(P<0.01).定量分析结果提示,相对于GATA1、BCR/ABL基因mRNA转录水平的影响,OAZ1对TGFβ基因的作用更为明显.为此推断,OAZ1基因可诱导白血病K562细胞向成熟红系方向分化,其作用机制可能与TGFβ信号转导通路相关. 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(oaz1) 慢粒白血病 红系分化
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OAZI-1蛋白复合物在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤效应的研究
5
作者 吕亚丰 杨建林 +3 位作者 曹春雨 秦宇 王发玲 王艳林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1819-1823,共5页
目的:在实验动物的水平上分析来源于肿瘤细胞的鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)蛋白复合物能否在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤效应。方法:用包被有OAZI-1抗体的免疫磁珠从B16-F1小鼠黑... 目的:在实验动物的水平上分析来源于肿瘤细胞的鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)蛋白复合物能否在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤效应。方法:用包被有OAZI-1抗体的免疫磁珠从B16-F1小鼠黑色素瘤细胞中分离OAZI-1蛋白复合物,用此复合物免疫小鼠后,再在小鼠皮下接种B16-F1活细胞,然后观察接种瘤在小鼠体内的成瘤及生长状况。ELISA法用于检测免疫小鼠血清中IFN-γ含量。乳酸脱氢酶释放实验(LDH)检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞对B16-F1细胞的杀伤效应。上述动物实验用原核表达纯化的OAZI-1蛋白和PBS免疫的小鼠作为对照。结果:与对照小鼠相比,接种OAZI-1蛋白复合物的小鼠脾淋巴细胞(效应细胞)对B16-F1黑素瘤细胞(靶细胞)具有更强的杀伤能力。在三种不同的效∶靶比下(10∶1、50∶1、100∶1),该组小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤活性分别为46.2%、59.5%和92.5%,显著性高于接种纯化OAZI-1蛋白组(36.1%、26.8%和45.9%)和接种PBS组(24.6%、24.0%和27.2%)小鼠脾淋巴细胞。此外,接种OAZI-1蛋白复合物的小鼠血清中抗肿瘤细胞因子IFN-γ含量(538.3 pg/ml)也显著性高于接种纯化OAZI-1蛋白组(256.2 pg/ml)和接种PBS组(131.0 pg/ml)小鼠。上述方法免疫的小鼠在皮下再接种B16-F1活细胞后,免疫OAZI-1蛋白复合物组小鼠成瘤率为40%,而PBS组和纯化OAZI-1蛋白组小鼠成瘤率为100%,且接种瘤在OAZI-1蛋白复合物免疫小鼠体内生长更为缓慢。结论:从B16-F1肿瘤细胞中分离的OAZI-1蛋白复合物中可能含有肿瘤抗原,用此复合物接种小鼠能在实验动物体内诱导抗肿瘤免疫杀伤活性。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子1(oazI-1) 黑素瘤 免疫治疗 小鼠
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OAZ1基因稳定表达SCC15细胞株的构建及其对舌鳞状细胞癌上皮间质化的影响
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作者 王星 姜立 +1 位作者 张沄 陈肖燕 《海南医学》 CAS 2017年第13期2065-2071,共7页
目的探索鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ1)对舌鳞癌细胞株SCC15上皮间质化的影响及相关机制。方法构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒表达载体p LVX-Neo-OAZ1-IRES-Zs Green,包装病毒并感染SCC15细胞,采用有限稀释法挑取荧光强度较高的单克隆细... 目的探索鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ1)对舌鳞癌细胞株SCC15上皮间质化的影响及相关机制。方法构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒表达载体p LVX-Neo-OAZ1-IRES-Zs Green,包装病毒并感染SCC15细胞,采用有限稀释法挑取荧光强度较高的单克隆细胞株;利用RT-PCR和Western blot检测OAZ1以及上皮间质化相关基因(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Zeb1、Snail、Twist1、TGF-β1、Smad1)的m RNA水平和蛋白水平。结果成功构建了OAZ1基因稳定表达的SCC15细胞株,且OAZ1的过表达可以抑制Vimentin、N-cadherin、TGF-β1的m RNA和蛋白水平表达;此外,OAZ1可以促进Smad1的蛋白水平降低。结论 OAZ1可以抑制舌鳞癌细胞的上皮间质化,其机制可能涉及TGF-β1信号通路和Smad1信号通路的抑制。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶 舌磷状细胞癌 慢病毒 上皮间质化
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鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1高表达抑制黑素瘤细胞在小鼠体内的生长 被引量:2
7
作者 杨建林 曹春雨 +2 位作者 秦烨 吴红艳 王艳林 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第4期343-348,共6页
鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antienzyme inhibitor-1,OAZI-1)是细胞内调节多胺代谢的重要蛋白质因子。已有研究发现,OAZI-1高表达的黑素瘤细胞在体外能更有效地被抗原提呈细胞识别和吞噬,提示OAZI-1在肿瘤免... 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antienzyme inhibitor-1,OAZI-1)是细胞内调节多胺代谢的重要蛋白质因子。已有研究发现,OAZI-1高表达的黑素瘤细胞在体外能更有效地被抗原提呈细胞识别和吞噬,提示OAZI-1在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。为进一步分析OAZI-1高表达对黑素瘤细胞在小鼠体内生长的影响,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞(B16/OAZI-1)被接种到实验小鼠体内,结果发现,接种瘤出现先成瘤随后逐渐消退的现象,至第24 d时,接种瘤的平均体积为36±25 mm3~,而对照细胞接种瘤的平均体积为326±309 mm^3。为探索上述现象的机制,随后分析了B16/OAZI-1在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫效应,结果发现:1)B16/OAZI-1接种显著增加了小鼠脾脏细胞对B16-F1瘤细胞的杀伤活性;2)源于B16-F1的细胞抗原能更有效地促进B16/OAZI-1接种小鼠脾脏细胞的增殖;3)B16/OAZI-1接种小鼠的脾脏细胞具有更强的分泌IFN-γ的能力;4)当在预接种B16/OAZI-1 30 d后的小鼠体内再次接种B16-F1活细胞时,新接种瘤细胞的生长受到显著抑制,小鼠的存活率增加。上述研究结果提示,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞在实验动物体内的生长受到显著抑制,其机制可能与OAZI-1能促进肿瘤抗原提呈和诱导抗肿瘤免疫效应相关。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(oazI-1) 黑素瘤 抗肿瘤免疫 小鼠
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鸟氨酸脱羧酶抗酶1基因的结构和功能 被引量:2
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作者 马容 康波 +1 位作者 姜冬梅 何珲 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1453-1458,共6页
鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白。研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究... 鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白。研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究表明,OAZ1还具有抗肿瘤效应和调控动物繁殖的功能。抗酶抑制因子能竞争性结合ODC-OAZ1复合体中的OAZ1,从而阻止ODC降解;天门冬酰胺也能通过抑制OAZ1的翻译来调节ODC的活性。本文就OAZ1基因结构和功能的研究现状作一综述。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶1 多胺 细胞周期 肿瘤 繁殖
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siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖 被引量:1
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作者 何玲 韩钰 +2 位作者 刘梦瑶 蔡富强 王艳林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期414-418,共5页
目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/s... 目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达。MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响;MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性。结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0%和18.9%。干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)%vs(63.5±0.7)%,P<0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)%vs(27.5±0.3)%,P<0.05;(11.5±0.3)%vs(9.1±0.6)%,P<0.01]。干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1 RNA干扰技术 黑素瘤细胞
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人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达 被引量:1
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作者 蔡富强 韩钰 王艳林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期149-153,共5页
克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小... 克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1)。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞。阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1。原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定。结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化。建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶1 突变 原核表达
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鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡 被引量:1
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作者 欧洁 王顺超 +2 位作者 孙丽丹 曹春雨 吴红艳 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第3期332-336,共5页
目的探讨上调鸟氨酸脱羧酶(ODC)抗酶-1(AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响。方法制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3.1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3.1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白... 目的探讨上调鸟氨酸脱羧酶(ODC)抗酶-1(AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响。方法制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3.1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3.1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡。结果在转染pcDNA3.1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达AZ-1引起细胞凋亡增加(P<0.05)。结论过表达AZ-1能抑制ODC表达和促进A549细胞凋亡。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶-1 鸟氨酸脱羧酶 多胺 非小细胞肺癌细胞
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AZIN-1小分子抑制剂抗非小细胞肺癌活性研究 被引量:2
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作者 王顺超 欧洁 +1 位作者 孙丽丹 吴红艳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期556-561,共6页
目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN-1)小分子抑制剂对非小细胞肺癌的抑制作用及机制。方法通过CCK-8法检测A549细胞增殖;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)分析A549细胞凋亡;蛋白质免疫印迹实验检测A549细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC... 目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN-1)小分子抑制剂对非小细胞肺癌的抑制作用及机制。方法通过CCK-8法检测A549细胞增殖;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)分析A549细胞凋亡;蛋白质免疫印迹实验检测A549细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(AZ-1)和AZIN-1的表达;流式细胞术(PI单染)分析A549细胞周期;高效液相色谱法检测A549细胞内总多胺含量。结果AZIN-1小分子抑制剂能够显著抑制A549细胞的增殖,使细胞发生G0/G1周期阻滞,并诱导A549细胞发生凋亡,显著抑制AZIN-1和ODC的表达,干扰细胞内多胺代谢,降低细胞内总多胺含量。结论AZIN-1小分子抑制剂对A549细胞具有显著的生长抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和干扰多胺代谢有关。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1 小分子抑制剂 多胺 非小细胞肺癌 细胞增殖 凋亡
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SH2-ODC/AZ1腺病毒的构建及对BCR-ABL蛋白的降解效应
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作者 徐敏 高淼 +3 位作者 黄峥兰 陶崑 钟梁 冯文莉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第4期301-305,共5页
目的构建重组腺病毒Ad-SH2-ODC和Ad-AZ1,检测共表达SH2-ODC和AZ1蛋白对BCR-ABL癌蛋白的降解效应。方法PCR扩增src同源结构域2(src homology 2,SH2)、鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)及抗酶蛋白1(antizyme 1,AZ1)基因,构建携... 目的构建重组腺病毒Ad-SH2-ODC和Ad-AZ1,检测共表达SH2-ODC和AZ1蛋白对BCR-ABL癌蛋白的降解效应。方法PCR扩增src同源结构域2(src homology 2,SH2)、鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)及抗酶蛋白1(antizyme 1,AZ1)基因,构建携带SH2-ODC(SO)或AZ1基因的p Ad Track-CMV腺病毒穿梭质粒,经双酶切和测序鉴定后与腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1同源重组,获得重组腺病毒质粒。后者经PacⅠ酶切鉴定后,在人胚肾细胞系AD293中包装、扩增,获得重组腺病毒;腺病毒Ad-SO和Ad-AZ1共感染人白血病细胞系K562,western blot检测目的蛋白的表达。结果双酶切和测序证实,腺病毒穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切结果显示,重组腺病毒质粒构建成功;western blot证实目的蛋白在K562细胞中表达正确,共表达SO和AZ1可以降低BCR-ABL蛋白水平。结论成功构建了Ad-SO和Ad-AZ1重组腺病毒,共表达SO和AZ1可以降解K562细胞中的BCR-ABL蛋白。 展开更多
关键词 BCR-ABL 抗酶蛋白1 SH2结构域 鸟氨酸脱羧酶
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大鼠心肌多胺代谢限速酶ODC、SSAT活性分析 被引量:9
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作者 赵雅君 王丽娜 +4 位作者 李鸿珠 张力 徐长庆 孙轶华 Wang Rui 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期555-559,共5页
目的建立大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性分析方法。方法以Langendorff离体灌流心肌为实验材料,制备心肌组织匀浆;分别以dl[114C]Ornithine及[114C]acetylCoenzymeA为底物,以液体闪烁计数仪记... 目的建立大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性分析方法。方法以Langendorff离体灌流心肌为实验材料,制备心肌组织匀浆;分别以dl[114C]Ornithine及[114C]acetylCoenzymeA为底物,以液体闪烁计数仪记录生成的14CO2及[14C]acetylspermidine的放射活度,并以其代表ODC,SSAT的活性;计算大鼠心肌ODC、SSAT的酶促反应动力学参数,筛选出适宜的底物浓度;同时观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对酶活性的影响。结果①大鼠心肌ODC、SSAT基础活性分别为:(9.67±3.09)nmol·mg-1Pro·h-1;(3.59±0.91)nmol·mg-1Pro·min-1。②ODC催化LOrnithine的酶促反应动力学参数Km=(54.95±8.14)μmol·L-1;Vmax=(2.364±0.37)nmol·mg-1·h-1;SSAT催化AcetylCoenzymeA的酶促反应动力学参数Km=(12.87±1.88)μmol·L-1;Vmax=(0.50±0.07)nmol·mg-1·min-1。③大鼠心肌ODC、SSAT活性检测的底物浓度分别为:90μmol·L-1(18.5kBq)DL[114C]Ornithine及36μmol·L-1(2.96kBq)[114C]acetylCoA。④SNP呈浓度依赖性地抑制ODC的活性、诱导SSAT的活性。结论建立了大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性的分析方法,该方法简便易行;根据Km值确定测定大鼠心肌ODC及SSAT? 展开更多
关键词 大鼠 心肌 鸟氨酸脱羧酶 精脒/精胺乙酰转移酶 方法
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多胺代谢与缺血性心血管疾病研究进展 被引量:5
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作者 任婷 成细华 +5 位作者 陈聪 吴若霞 饶春梅 彭霞 孙彦波 黄政德 《湖南中医药大学学报》 CAS 2017年第6期690-692,共3页
多胺广泛分布于生物组织和体液中,参与体内多种生理和病理过程,具有促进细胞生长、分化、增生,对维持细胞膜和线粒体的完整性,DNA和RNA结构的稳定性,以及在信号转导、基因表达、蛋白合成等方面都意义重大。多胺参与心肌缺血损伤的发生,... 多胺广泛分布于生物组织和体液中,参与体内多种生理和病理过程,具有促进细胞生长、分化、增生,对维持细胞膜和线粒体的完整性,DNA和RNA结构的稳定性,以及在信号转导、基因表达、蛋白合成等方面都意义重大。多胺参与心肌缺血损伤的发生,多胺代谢失衡,鸟氨酸脱羧酶及精脒/精胺乙酰转移酶活性改变,腐胺生成增多而精胺、精脒减少,将导致继发性的心肌损伤,本文就多胺及多胺在缺血性心血管疾病研究中的意义及进展加以综述。 展开更多
关键词 多胺 ODC SSAT 心肌缺血
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miRNA-6516-5p通过靶向ODC1调控肾癌细胞的增殖和迁移 被引量:2
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作者 黄耿 桂定文 +4 位作者 徐祖伟 付金伦 罗帅 赵云飞 万京桦 《国际外科学杂志》 2022年第3期194-198,I0006,共6页
目的探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模... 目的探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模拟物和无意义序列(NC)瞬时转染至miR-6516-5p表达最低的肾癌细胞,即miR-6516-5p组和NC组。qRT-PCR检测转染细胞miR-6516-5p的表达。CCK-8法和Transwell迁移实验检测转染细胞的增殖和迁移。生物信息学软件和双荧光素酶基因报告实验分别预测和验证miR-6516-5p对靶基因的调控。qRT-PCR和Western blotting法分别检测转染细胞中靶基因的表达。计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-6516-5p在肾癌细胞系中的表达均明显低于正常近端肾小管上皮细胞(P<0.01),786-O细胞中miR-6516-5p的表达最低(F=27.69,P<0.01)。NC组和miR-6516-5p组786-O细胞中miR-6516-5p的表达分别为1.01±0.08和9.91±1.16,与NC组比较,miR-6516-5p组786-O细胞中miR-6516-5p表达明显增加(t=7.63,P<0.01)。上调miR-6516-5p能显著抑制786-O细胞的增殖(P<0.05)。NC组和miR-6516-5p组细胞迁移数分别为(85.65±8.77)个和(28.05±6.20)个,过表达miR-6516-5p可抑制786-O细胞的迁移(t=5.36,P<0.01)。miR-6516-5p的靶基因可能是鸟氨酸脱羧酶1(ODC1),miR-6516-5p能显著抑制野生型ODC1-3′UTR的荧光素酶活性(t=9.83,P<0.01)。上调miR-6516-5p可降低786-O细胞中ODC1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论miR-6516-5p在肾癌细胞系中表达降低,miR-6516-5p通过靶向ODC1抑制肾癌786-O细胞的增殖和迁移,miR-6516-5p可能成为肾癌潜在的分子靶点。 展开更多
关键词 肾肿瘤 miR-6516-5p 鸟氨酸脱羧酶1 细胞增殖 细胞迁移
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小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1功能基因的克隆及原核表达
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作者 刘梦瑶 韩钰 +2 位作者 蔡富强 何玲 王艳林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期138-141,149,共5页
目的克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)功能基因,原核表达并纯化OAZ1重组蛋白。方法采用RT-PCR法从小鼠黑色素瘤细胞总RNA中扩增OAZ1基因,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因,并构建重组表达质粒pET15b/OAZ1-T,转化... 目的克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)功能基因,原核表达并纯化OAZ1重组蛋白。方法采用RT-PCR法从小鼠黑色素瘤细胞总RNA中扩增OAZ1基因,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因,并构建重组表达质粒pET15b/OAZ1-T,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重叠PCR法扩增出692bp的OAZ1功能基因,重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,重组蛋白可在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。纯化的重组蛋白纯度可达79.96%,且可与抗His标签抗体特异性结合。结论已成功克隆了小鼠OAZ1功能基因,原核表达并纯化了重组OAZ1蛋白。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶1 功能基因 重叠延伸PCR 原核表达
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鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1与细胞增殖 被引量:2
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作者 吕亚丰 王艳林 《生命科学》 CSCD 2016年第3期399-404,共6页
多胺(腐胺、精脒、精胺)参与细胞增殖、分化和凋亡等重要生命过程,细胞内多胺代谢紊乱也与包括肿瘤在内的多种疾病的发生发展密切相关。鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(antizyme inhibitor-1,AZIN1)是重要的多胺代谢调节蛋白,它通过多种途... 多胺(腐胺、精脒、精胺)参与细胞增殖、分化和凋亡等重要生命过程,细胞内多胺代谢紊乱也与包括肿瘤在内的多种疾病的发生发展密切相关。鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(antizyme inhibitor-1,AZIN1)是重要的多胺代谢调节蛋白,它通过多种途径调控细胞的生长。AZIN1能与鸟氨酸脱羧酶抗酶(antizyme,AZ)相互作用,解除后者对多胺合成限速酶鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)的抑制,由此上调细胞内多胺的含量。AZIN1还能通过调节细胞周期蛋白cyclin D1的降解速度和干扰细胞中心体复制而影响细胞增殖。AZIN1基因转录后修饰和某些特定mi RNA也对AZIN1的细胞增殖调节功能有重要影响。现对该研究领域的研究进展做简要综述。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1 多胺 细胞增殖
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Effect of diethylstilbestrol on polyamine metabolism in hamster epididymis 被引量:2
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作者 Masato Ohe Shigeru Matsuzaki 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期301-306,共6页
<abstract>Aim: To investigate the effect of diethylstilbestrol (DES), one of the most potent endocrine disruptors, on the metabolism of polyamines in hamster epididymis. Methods: Male golden hamsters of 7-week-o... <abstract>Aim: To investigate the effect of diethylstilbestrol (DES), one of the most potent endocrine disruptors, on the metabolism of polyamines in hamster epididymis. Methods: Male golden hamsters of 7-week-old were kept under a light and dark cycle of 14 h and 10 h for 1 week to stimulate maximally the gonadal function. DES was injected subcutaneously at doses of 0.01 mg·kg-1·day-1, 0.1 mg·kg-1·day-1 and 1 mg·kg-1·day-1 for one week. Results: DES treatment caused a significant decrease in the weight of epididymis. The activity of epididymal ornithine decar boxylase (ODC) increased 1 day after DES treatment, kept at a high level for 4 days and then decreased to nearly normal level at day 7. The activity of spermidine/spermine N1-acetyltransferase (SSAT) also increased transiently after DES treatment. The contents of putrescine, spermidine, spermine and N1-acetylspermidine were increased 1 day -4 days after DES treatment and restored to normal at day 7. All these changes showed a marked difference between the caput and the cauda. Conclusion: The polyamine biosynthesis in the hamster epididymis can be affected by DES, a xenoestrogen. DES may probably affect polyamine metabolism in the epididymis by regulating the rate-limiting enzymes involved in the polyamine biosynthesis. 展开更多
关键词 diethylstilbestrol polyamines ornithine decarboxylase spermidine/spermine N1-acetyltransferase
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