血清ORMDL3结合FeNO对哮喘稳定期急性发作的预测分析

目的 分析血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)结合呼出气一氧化氮(FeNO)对哮喘稳定期急性发作的预测价值。方法 选择2018年7月—2023年8月在本院门诊随访的120例哮喘稳定期患者作为疾病组,另同期选取120名健康体检者作为对照组,检测两组ORMDL3 mRNA表达量和FeNO浓度。依据疾病组3个月内是否出现哮喘急性发作将其分为急性发作组和非急性发作组,比较两组患者ORMDL3 mRNA表达量和FeNO浓度,采用多因素Logistic回归分析哮喘稳定期急性发作的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ORMDL3 mRNA、FeNO单项及联合对哮喘稳定期急性发作的预测价值。结果 疾病组ORMDL3 mRNA表达量、FeNO浓度均高于对照组(P<0.05);急性发作组ORMDL3 mRNA表达量、FeNO浓度、体质量指数(BMI)以及吸烟史占比均高于非急性发作组(P<0.05),淋巴细胞计数、用力肺活量占预计值百分比(FVC%)、第一秒用力呼气末容积占预计值百分比(FEV1%)低于非急性发作组(P<0.05);经多因素Logistic回归分析显示,高ORMDL3 mRNA、高FeNO、高BMI均为哮喘稳定期患者急性发作的危险因素(P<0.05),高FVC%、高FEVI%为其保护因素(P<0.05)。ORMDL3 mRNA、FeNO联合预测哮喘稳定期患者急性发作的灵敏度高于单独预测,联合预测的AUC高于单独预测(P<0.05),联合预测的特异度与单独预测相近。结论 ORMDL3、FeNO均在哮喘稳定期急性发作患者中存在异常高表达,均是哮喘稳定期急性发作的影响因素,且两者联合对哮喘稳定期急性发作具有较好的预测价值。

99例哮喘儿童ORMDL3基因多态性及其与血清IgE水平的关联性

目的探讨血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因多态性与儿童哮喘易感性及与血清免疫球蛋白E(IgE)水平的关系。方法选取首诊哮喘的患儿99例为哮喘组,另选取同期健康儿童51例为对照组;采用PCR-Sanger测序对ORMDL3基因rs7216389位点进行基因分型,散射比浊法测定血清IgE水平,比较rs7216389基因型在两组间的分布差异,采用共显性、显性和隐性3种遗传模型分析血清IgE水平。结果rs7216389位点哮喘组TC、TT基因型频率高于对照组(P<0.05),相比CC基因型,TT、TC基因型儿童患哮喘的风险分别增加7.500倍、8.094倍(P<0.05);哮喘组共显性遗传模型TT基因型的IgE水平高于TC基因型(P<0.05);隐性遗传模型TT基因型的IgE水平高于CC+TC基因型(P<0.05);哮喘组显性遗传模型、对照组3种遗传模型IgE比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ORMDL3 rs7216389多态性可能与儿童哮喘患病风险有关,TC、TT基因型可能是儿童哮喘患病的风险因子;哮喘儿童rs7216389位点的基因型与血清IgE水平有关。

<3岁反复喘息患儿外周血血清ORMDL3基因在不同临床表型中的表达及其与IL-17和ECP的关系

目的探讨<3岁反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因在不同临床表型中的表达及其与血清白介素-17(IL-17)和嗜酸性细胞阳离子蛋白(ECP)的关系。方法选取该院儿科就诊<3岁反复哮喘的患儿87例,根据患儿是否存在高危因素分成特应性哮喘组(64例)和非特应性哮喘组(23例),再选取同期在儿科体检的健康儿童30例。分析3组研究对象ORMDL3基因表达水平、血清IL-17和ECP含量和ORMDL3基因频率分布的差异,并对3组研究对象ORMDL3基因表达水平和血清IL-17和ECP含量的相关性进行分析。结果特应性哮喘组ORMDL3基因表达水平(11.57±1.96)%,血清IL-17(1 354.46±873.48)pg/ml和血清ECP(45.65±12.76)μg/L均高于非特应性哮喘组和对照组(P=0.000);3组的ORMDL3基因AA、AG和GG 3种基因型的频率分布差异有统计学意义(χ~2=12.84,P=0.012)。特应性哮喘组的ORMDL3基因表达水平与血清IL-17(r=0.318,P=0.000)、血清ECP(r=0.540,P=0.000)均呈正相关。结论不同临床类型的哮喘患儿血清中的ORMDL3基因表达水平、IL-17和ECP含量不同。特应性哮喘患儿的血清ORMDL3基因表达水平与血清IL-17、ECP含量存在正相关性。

血清类黏蛋白1样蛋白3表达与5岁以下儿童喘息的相关性分析

目的探讨血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因表达量与5岁以下儿童喘息的相关性。方法选取2013年8月—2014年12月在上海交通大学医学院附属仁济医院南院儿科就诊的89例5岁以下喘息患儿,依据哮喘预测指数(API)严格标准分为API^+(过去1年内喘息次数≥4)组(n=42)和API-(过去1年内喘息次数1~3次)组(n=47);另设API0(5岁以下健康儿童)对照组(n=51)。检测3组血清ORMDL3基因表达量,分析血清ORMDL3表达水平与API、喘息、鼻炎、总免疫球蛋白E(TIg E)、家族史、湿疹、年龄、尘螨等吸入性过敏原及牛奶等摄入性过敏原的相关性。结果 API^+组患者血清ORMDL3表达水平显著高于API-和API0组。ORMDL3表达水平与API(r=0.405,P=0.000)、喘息(r=0.492,P=0.000)、湿疹(r=0.454,P=0.000)、户尘螨(r=0.298,P=0.000)、狗毛皮屑(r=0.251,P=0.000)和TIg E(r=0.170,P=0.002)存在正相关;与性别、家族史、鼻炎、年龄、屋尘螨、猫毛皮屑、树木、点青/分枝/烟曲/黑曲/交链霉及饮食因素(牛奶、鸡蛋白、牛肉、腰果、蟹、虾)不存在相关性(P>0.05)。结论 ORMDL3基因表达量与儿童API之间呈正相关,提示ORMDL3表达量与API相结合可作为诊断5岁以下儿童哮喘的诊断依据之一。

外周血类黏蛋白1样蛋白3水平与过敏性哮喘患儿Th1/Th2平衡的关系

目的探讨外周血类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)水平与过敏性哮喘(AA)患儿Th1/Th2平衡的关系。方法选取64例AA患儿为AA组,另选取48例同时期体检健康儿童为对照组;检测两组血清Ig E、嗜酸性粒细胞比率(EOSR),外周血ORMDL3 m RNA、Th1/Th2水平,以及呼出气一氧化氮(Fe NO)、达峰容积比(VPEF/VE)、达峰时间比(TPTEF/TE)。Pearson相关性分析AA组外周血ORMDL3 m RNA与Th1/Th2水平及两者与Ig E、EOSR、Fe NO、VPEF/VE、TPTEF/TE的相关性,多因素Logistics回归分析AA危险因素。结果AA组血清Ig E、EOSR、Fe NO和外周血ORMDL3 m RNA、Th2水平高于对照组,VPEF/VE、TPTEF/TE、Th2水平和Th1/Th2低于对照组(P均<0.05);AA患儿外周血ORMDL3 m RNA与Th1/Th2水平呈负相关(r=-7.103,P<0.05)。外周血ORMDL3 m RNA水平与Ig E、EOSR、Fe NO呈正相关,与VPEF/VE、TPTEF/TE呈负相关(P均<0.05),Th1/Th2水平与Ig E、EOSR、Fe NO呈负相关,与VPEF/VE、TPTEF/TE呈正相关(P均<0.05)。多因素Logistics回归分析显示,Ig E(OR=1.103,95%CI=1.019~1.193)和ORMDL3 m RNA(OR=13.697,95%CI=2.203~15.161)为AA发生独立危险因素,Th1/Th2(OR=0.040,95%CI=0.004~0.396)为保护因素(P均<0.05)。结论AA患儿外周血ORMDL3 m RNA水平明显升高,Th1/Th2处失衡状态,二者可作为评估AA病情的指标。

5岁以下儿童ORMDL3基因表达与哮喘预测指数相关性分析

目的:为了探究ORMDL3(orosomucoid 1-like 3)基因表达量与哮喘预测指数(Asthma predictive index,API)、性别、年龄、遗传和环境等因素之间的相关性。方法:从2013年4月-2014年8月,我们收集了115位数据有效的5岁以下儿童的资料,并依据API严格标准对其进行分类:API+(过去一年内喘息次数≥4)、API-(过去一年内喘息次数1-3次)和API0(无喘息)组,统计三组之间的基本资料,并检测ORMDL3基因表达量与API、性别、年龄、家族史、喘息次数、和鼻炎之间的相关性。结果:API+组内男女性别比例显著高于其他组,ORMDL3基因表达量在API0内的表达量显著高于API+和API-组内表达量(P=0.044),并且ORMDL3基因表达量与API指数之间存在一定的相关性(相关系数:-0.232,P=0.020),但是ORMDL3基因表达量与性别、年龄、家族史、喘息次数、和鼻炎之间无统计学相关性(P>0.05)。结论:ORMDL3基因表达量与API指数之间存在微弱的负相关性,API阳性鉴定标准需要进一步的改进。

反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3基因表达水平的意义

目的探讨3岁以下反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3（ORMDL3）基因在不同临床表型中的表达水平及其临床意义。方法选取2010年9月至2012年9月在南京医科大学第一附属医院就诊的3岁以下反复喘息患儿25例，分为非特应性体质的喘息A组（14例）和特应性体质的喘息B组（11例）；健康对照组无任何变应性疾病病史，包括药物及食物过敏、变应性鼻炎、湿疹，共24例，采用反转录PCR法检测外周血ORMDL3基因mRNA表达水平，并分析各组病例临床特点。结果喘息A组和喘息B组ORMDL3基因表达水平高于健康对照组（t=10．29、5．73，P〈0．01），喘息B组ORMDL3基因水平高于喘息A组，差异有统计学意义（t=14．12，P〈0．01）。喘息组中发病率存在性别差异，男〉女；喘息发作存在季节差异，冬季和春季高发。结论ORMDL3基因的表达水平与〈3岁患儿的反复喘息密切相关，在特应性体质患儿更为明显，提示ORMDL3在反复喘息发病机制中起一定作用。

ORMDL3和MMP-9在慢性支气管哮喘气道重塑中的作用机制及布地奈德的干预作用

目的研究布地奈德(BUD)对慢性哮喘小鼠支气管上皮细胞的血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,及其对气道重塑的干预作用。方法应用BALB/C小鼠随机分为对照组、哮喘组、BUD组,用OVA(卵清蛋白)和氢氧化铝建立哮喘小鼠模型,为进一步了解布地奈德对气道重塑的干预机制,第21天BUD组小鼠在OVA激发前30min吸入布地奈德。12周后,用苏木精-伊红染色(HE staining)分析气道壁厚度改变,Masson染色观察气道胶原沉积,通过免疫组织化学染色法(immunohistochemistry staining),蛋白质印迹法(western blot),实时荧光定量PCR(real-time PCR)测定小鼠支气管上皮细胞ORMDL3,MMP-9的表达含量。结果 12周后,哮喘组和BUD组的气道壁厚度增加,胶原蛋白沉积,ORMDL3,MMP-9表达明显高于对照组,BUD组气道病理改变程度和ORMDL3,MMP-9的升高幅度均不及哮喘组。经相关性分析可发现,MMP-9表达增加与ORMDL3基因的表达上调具有相关性,并且二者的表达增高与气道壁厚度有明显相关性。结论布地奈德可能通过下调ORMDL3,MMP-9基因的表达,抑制慢性哮喘气道重塑进程。

基于核心家系的类黏蛋白1样蛋白质3基因多态性与学龄前儿童喘息易感性关联分析

目的分析类黏蛋白1样蛋白质3(ORMDL3)基因多态性与学龄前儿童喘息之间的遗传关系,为临床治疗提供科学依据。方法以2016年1月-2017年12月在连云港市妇幼保健院就诊的30例喘息预测指数(API)阳性的学龄前喘息儿童及60例生物学父母作为研究对象,利用Sanger测序技术对各组ORMDL3基因rs7216389、rs7216558位点进行基因多态性分析,应用FBAT 2.0.4软件对rs7216389、rs7216558位点进行基于家系的传递不平衡检验分析(TDT)和单体型相对风险分析(HRR)。结果ORMDL3基因两个SNP位点rs7216389、rs7216558显示出完全一致的基因型;TDT分析显示,在可加模型和隐形模型下,遗传标记位点rs7216389、rs7216558与学龄前喘息相关联,等位基因T过多传递,为喘息的危险因素(可加模型:Z=2.268,P<0.05,隐形模型:Z=2.250,P<0.05);显性模型下,等位基因C与喘息相关(Z=-2.250,P<0.05),为喘息的保护因素;HRR分析显示,在可加模型下,rs7216389-rs7216558组成的T/T单倍型与喘息相关(Z=2.000,P<0.05),而C/C单倍型则具有保护效应(Z=-2.000,P<0.05)。结论ORMDL3基因与学龄前儿童喘息的发生相关联,ORMDL3基因遗传多态性在喘息的发病中起重要作用。

ORMDL3基因第一内含子中新启动子区的鉴定

目的构建表达血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因第一内含子中新启动子区的质粒,并研究其功能特征。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增ORMDL3基因第一内含子内新转录起始位点上下游776bp启动子区片段,酶切并连接此片段至pGL3-basic载体,构建含有ORMDL3基因第一内含子中新启动子区的基因重组体,并转染人胚肾293细胞。荧光素酶检测报告基因启动子的活性,计算相对活性单位。生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果成功构建含有新启动子的重组质粒。与pGL3-basic空载体相比,新启动子活性明显增强,并定位于转录起始位点-363bp至-63bp之间,且该区域存在Sp1、GATA-1等转录因子的结合位点。结论 ORMDL3基因第一内含子中新转录起始位点上游具有启动子活性,在-363bp至-63bp区域存在转录调控元件,且Sp1、GATA-1等转录因子可能参与其转录调控。

Ets-1基因真核表达载体的构建及其对人ORMDL3启动子的影响

目的探讨Ets-1基因对人血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)启动子的影响。方法 RT-PCR扩增Ets-1基因,将产物克隆至真核载体pcDNA3.1(+)内,构建含Ets-1基因的重组真核表达质粒pcDNA-Ets-1。重组质粒转染人胚肾HEK-293细胞,Western blot检测Ets-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测Ets-1过表达后人ORMDL3启动子的活性。结果核酸序列分析及Western blot结果证实,构建含Ets-1基因的重组真核表达质粒pcDNA-Ets-1成功;过表达Ets-1基因能增强人ORMDL3启动子的活性。结论成功构建了含Ets-1基因的重组真核表达质粒。Ets-1基因可促进人ORMDL3启动子的转录活性。

小鼠ORMDL3表达质粒的构建

目的构建小鼠血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因的表达质粒,并在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞)中检测其过表达效果。方法根据小鼠ORMDL3蛋白的编码序列设计引物,以NIH3T3细胞cDNA为模板,PCR扩增ORMDL3的编码序列,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ酶切位点之间,并测序鉴定。由脂质体介导将pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1-ORMDL3质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞中,24h后收取细胞,抽取细胞全蛋白,Western blot检测ORMDL3蛋白的相对表达量。结果成功构建小鼠ORMDL3表达质粒pcDNA3.1-ORMDL3,该质粒瞬时转染至NIH3T3细胞内可有效增加ORMDL3蛋白表达2倍左右(P<0.05)。结论成功构建小鼠ORMDL3表达质粒,为后续小鼠动物模型研究ORMDL3基因的功能及致病机制提供依据。

17q21位点基因在儿童哮喘中的研究进展

哮喘是一种由遗传和环境因素共同影响的常见的气道慢性炎性疾病,其分子遗传学基础复杂多样,目前临床上仍无疗效显著的治疗方法.全基因组相关联研究通过寻找哮喘发病机制的基因靶点,从分子遗传学角度为儿童哮喘的精准化医疗提供新思路.现研究证明17q21位点上血清类黏蛋白1样蛋白3基因(ORMDL3)和gasdermin B (GSMDB)基因的表达影响儿童哮喘的易患性、严重性、及种族特异性.该文对17q21染色体位点上与儿童哮喘相关的基因进行综述.