Study on the Interaction and Properties of Cucurbit[8]uril with Oroxin B

The interaction between cucurbit[8]uril(Q[8])and oroxin B(ORB)was investigated by UV-visible(UV-Vis)spectroscopy,isothennal titration calorimetry(ITC),mass spectnim(MS)and nuclear magnetic resonance(NMR)spectroscopy.The results showed that ORB formed a 2:1 inclusion complex with Q[8]with a binding constant of 8.266×10^5L^2·mol^-2.ORB had good scavenging ability for 2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)(ABTS)tree radicals(IC50=5.74μmol/L)and the addition of Q[8]did not significantly affect the antioxidant activity of ORB(IC50=5.76μmol/L).A phase solubility experiment revealed a 1.86-fold increase in the solubility of ORB when c(Q[8])=100μmol/L.bi vitro dmg release experiments showed that the release rate for ORB@Q[8]complex was lower than that of ORB in artificial intestinal juice,and higher than that of ORB in artificial gastric juice.

木蝴蝶苷A对肝细胞癌细胞侵袭增殖的抑制作用及机制

目的 探讨木蝴蝶苷A(OA)抑制肝细胞癌(HCC)细胞恶性行为的作用机制。方法 购入HCC细胞系Hep3B、MHCC97-L,设置OA梯度浓度(0、30、60、90、120μM组),通过CCK-8检测细胞活力确定OA对HCC细胞的半抑制浓度(IC50),随后采取IC50进行后续实验,将细胞分为对照组(Control组)与OA处理组(OA组),采取试剂盒检测铁死亡相关指标二价铁离子(Fe^(2+))含量、脂质活性氧(Lipid-ROS)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)、活性氧脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,使用Tri-Carb^■液体闪烁分析仪检测胱氨酸摄取水平。在添加OA的HCC细胞中同时转染pcDNA3.1-TXNDC5(OA+oe-TXNDC5组),以pcDNA3.1-NC为对照(OA+oe-NC组)检测过表达硫氧还蛋白结构域蛋白5(TXNDC5)对OA诱导HCC细胞铁死亡的影响。结果 OA呈一定浓度依赖抑制HCC细胞MHCC97-L与Hep3B活力,对Hep3B半抑制浓度为30μM。OA处理Hep3B细胞使得Fe^(2+)含量显著上升,抑制胱氨酸摄取,Lipid-ROS含量显著增加,升高MDA水平,降低GSH含量、SOD活性,诱导Hep3B细胞铁死亡。过表达TXNDC5可部分逆转OA对细胞铁死亡的诱导作用。结论 OA通过下调TXNDC5诱导HCC细胞铁死亡由此抑制HCC细胞恶性行为。

基于斑马鱼模型研究木蝴蝶苷A的抗阿尔茨海默病活性和作用机制

基于六水合氯化铝诱导的斑马鱼阿尔茨海默病模型,探究木蝴蝶苷A的抗阿尔茨海默病活性及作用机制。将受精后3 d的野生型AB品系斑马鱼随机分为阴性对照组,80μmol/L六水合氯化铝模型对照组,80μmol/L六水合氯化铝与6μmol/L多奈哌齐阳性对照组,80μmol/L六水合氯化铝与不同浓度(5、10、20μmol/L)木蝴蝶苷A受试物组。斑马鱼受精后6 d,利用明暗交替行为学实验观察不同处理组斑马鱼行为差异并分析其变化;通过硫黄素S染色测定各组斑马鱼头部Aβ斑块沉积数;采用酶活测定试剂盒检测各组斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性;以实时荧光定量PCR检测自噬相关基因(beclin1、ulk1b、ulk2和atg7)的表达变化;借助分子对接技术验证木蝴蝶苷A与自噬相关蛋白(beclin1、ulk1b、ulk2和atg7)结合的可靠性。结果表明,木蝴蝶苷A缓解了六水合氯化铝造成的斑马鱼运动障碍,降低了Aβ斑块沉积数和乙酰胆碱酯酶活性水平,使自噬相关基因的异常表达趋于正常。该研究初步揭示了木蝴蝶苷A能够缓解六水合氯化铝诱导的斑马鱼运动障碍,其机制可能与激活细胞自噬有关,这为木蝴蝶苷A的临床应用及其治疗阿尔茨海默病的相关研究提供了理论依据。

木蝴蝶苷B对大鼠肾间质纤维化的作用及机制研究

目的研究木蝴蝶苷B(OB)的抗肾纤维化能力及机制。方法建立转化生长因子-β1诱导的人肾小管上皮(HK-2)细胞纤维化模型和腺嘌呤诱导的大鼠肾间质纤维化模型,用不同浓度的OB进行干预。用Western Blotting检测HK-2和大鼠肾组织中大麻素受体-1(CB1)、p-Akt、Akt、上皮-间充质转化(EMT)蛋白的表达,采集大鼠血液检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN),肾组织切片行HE、Masson染色。结果在HK-2纤维化模型中,OB(25μmol·L^(−1))降低了CB1、Snail、α-SMA、FN蛋白的表达和P-Akt/Akt,增加了E-cadherin蛋白的表达(P<0.05)。在腺嘌呤诱导模型中,高、低剂量OB均能降低Scr和BUN水平(P<0.05);高剂量OB(20.0 mg·kg^(−1))降低了肾组织中的CB1、Snail、α-SMA蛋白的表达和P-Akt/Akt,并增加了E-cadherin蛋白的表达(P<0.05)。结论OB能通过抑制肾脏CB1/Akt/Snail信号传导抑制EMT,进而抑制大鼠肾间质纤维化,为靶向CB1的OB抗肾纤维化提供了科学依据。

HPLC法测定木蝴蝶中木蝴蝶苷A和木蝴蝶苷B的质量分数

建立了利用高效液相色谱法(HPLC)同时测定木蝴蝶中木蝴蝶苷A和木蝴蝶苷B的定量分析法:采用COSMOSIL-C18-MS-Ⅱ(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以V(甲醇)∶V(ρ(磷酸)=0.2%)=4∶6为流动相进行洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长278nm,柱温25.0℃.结果表明:木蝴蝶苷A的线性范围为0.050～2.0μg(r2=0.999 9),平均回收率为101.14%,相对标准偏差(RSD)为1.07%;木蝴蝶苷B的线性范围为0.050～2.0μg(r2=0.999 9),平均回收率为100.41%,RSD为2.26%.

HPLC法同时测定木蝴蝶中3种黄酮成分

目的建立高效液相色谱测定方法同时测定中药木蝴蝶中木蝴蝶苷B、黄芩苷、黄芩素。方法采用RP-HPLC法,其中色谱柱为Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇(A相)-0.5%冰醋酸水溶液(B相)梯度洗脱;体积流量1 mL/min;检测波长280 nm;柱温30℃。结果 3批木蝴蝶中含木蝴蝶苷B 2.09%～2.73%,黄芩苷1.08%～1.29%,黄芩素1.24%～1.76%。结论该方法快速、准确、重复性好,为更好地控制木蝴蝶药材的质量提供了可行的方法。

HPLC法测定木蝴蝶提取物中木蝴蝶苷A的含量

目的:建立木蝴蝶提取物中木蝴蝶苷A的HPLC测定方法。方法:色谱柱:DIONEX-ACCLAIM.120 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇(A)-0.02%磷酸水溶液(B);流速:0.5 ml·min^(-1);柱温:35℃;检测波长:280 nm。结果:木蝴蝶提取物的线性范围为1.005～6.030μg,r=0.999 9。平均加样回收率为95.30%,RSD为0.59%(n=6)。结论:该方法准确,重复性好,专属性高,适用于木蝴蝶提取物的质量控制。

一测多评法同时测定咽炎片中5种指标性成分的含量

目的:建立一测多评法同时测定咽炎片中芍药苷、芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸等5种指标性成分的含量。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil GOLD-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.35%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为280 nm(芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸)、230 nm(芍药苷),柱温为30℃,流速为1 mL/min,进样量为10μL。以芍药苷为内参物,建立芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸的相对校正因子;考察不同色谱系统、色谱柱、流动相比例、流速、柱温对相对校正因子的影响,并按相对保留时间对待测成分进行色谱峰定位。按外标法测定内参物芍药苷含量,按一测多评法测定其余4种成分含量,并与外标法测定结果进行比较。结果:各待测成分的分离度均大于1.5;芍药苷、芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸的质量浓度分别在3.97~119.22、1.96~58.68、2.39~71.64、1.92~57.51、0.54~16.24μg/m L范围内线性关系良好(r≥0.999 7);精密度、重复性、稳定性试验的RSD均小于2%;平均加样回收率为97.20%~98.07%(RSD<3%,n=6)。以芍药苷为内参物,芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸的平均相对校正因子分别为0.554 6、1.815 6、2.489 3、5.423 2;在不同色谱条件下其相对校正因子和相对保留时间的RSD均小于5%。采用一测多评法与外标法分别测得10批咽炎片待检样品中4种成分(除内参物外)含量的相对误差绝对值均小于1%,两种方法测定结果一致。结论:本方法准确、快捷、高效、价廉,可用于同时测定咽炎片中5种指标性成分的含量。

HPLC法同时测定木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷B和黄芩苷的含量

目的建立木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷B和黄芩苷的质量分数测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Venusil ASB C18（4.6 mm×250 mm,5μm）柱,流动相为甲醇-乙腈-0.3%（体积分数）H3PO4,梯度洗脱,流速为0.8 m L/min,检测波长为280 nm。结果木蝴蝶苷B的线性范围为0.062 7~1.254 0μg,r=0.999 5;黄芩苷的线性范围为0.043 1~0.861 2μg,r=0.999 7。平均回收率分别为99.6%、101.9%。结论所建立的HPLC法准确、重复性好、专属性高,可作为木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷B和黄芩苷的测定方法,可用于木蝴蝶配方颗粒的质量控制。

高效液相色谱法测定咽炎片中木蝴蝶苷B含量

目的建立测定咽炎片中木蝴蝶苷B含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱采用Kromasi1100-5 C18柱(250 mm×4. 6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0. 3%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0. 8 m L/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果木蝴蝶苷B进样量在0. 04~0. 86μg范围内与峰面积线性关系良好,r=1. 000 0(n=7);平均加样回收率为98. 83%,RSD为1. 84%(n=6)。结论该方法简便、快捷,结果准确、可靠,可作为咽炎片的质量控制。

HPLC同时测定咽炎片中4种指标性成分的含量

建立高效液相色谱法同时测定咽炎片中木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸和芦丁的含量。方法色谱柱为Welch Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm,3μm),柱温30℃,采用梯度洗脱,以甲醇为流动相A,0.35%磷酸为流动相B,流速0.6 mL·min-1,检测波长280nm,进样量10μL。结果木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸和芦丁进样浓度分别在2.39~71.64μg·mL-1、1.92~57.51μg·mL-1、0.52~15.66μg·mL-1、2.08~62.34μg·mL-1的范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r分别为0.9999、0.9998、0.9994、0.9999),平均回收率(n=6)分别为99.39%、98.98%、98.99%、99.22%。结论该方法简便,准确,重复性好,可作为评价咽炎片的质控方法。

木蝴蝶提取工艺的研究

目的:通过对木蝴蝶的提取工艺进行分析研究,确定其最佳提取工艺。方法:采用正交试验法进行优选,以木蝴蝶苷B含量作为评价指标。结果:最佳工艺为:微沸提取2次,第1次加7倍水,第2次加5倍水,每次0.5h,醇沉浓度为65%。结论:该提取工艺稳定可靠,得到的木蝴蝶苷B含量高。

UPLC-MS/MS法同时测定木蝴蝶中10个有效成分

目的建立UPLC-MS/MS方法同时测定木蝴蝶中木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、黄芩素、白杨素、高车前素、野黄芩素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素10种主要成分。方法采用负离子多反应监测(MRM)模式,ESI离子源,Kinetex C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)进行分离,流动相为乙腈-甲醇-0.5%甲酸水,梯度洗脱,分析时间为7 min。结果所测10种主要成分在测定浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9966;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为94.0%~104.5%,RSD≤3.21%。结论首次建立可同时测定木蝴蝶中10种主要成分的UPLC-MS/MS方法,该法操作简便,灵敏度高,专属性好,分析速度快,可用于中药材木蝴蝶的质量控制。

HPLC法测定芪贞慢咽宁颗粒中木蝴蝶苷B

目的：建立HPLC法测定芪贞慢咽宁颗粒中木蝴蝶苷B。方法采用Kromasil 100-5 C18色谱柱（250 mmx4.6 mm，5μm），流动相甲醇–0.1%磷酸（38∶62），检测波长276 nm，体积流量1.0 mL/min，柱温30℃，进样量5μL。结果木蝴蝶苷B在0.0646-1.2920μg与峰面积线性关系良好。木蝴蝶苷B平均回收率为100.67%，RSD值为1.12%。结论本法测定快速、结果准确、重复性好、专属性强，可用于测定芪贞慢咽宁颗粒中木蝴蝶苷B。

木蝴蝶药材的质量控制方法研究

目的：建立木蝴蝶药材的质量控制方法。方法：按照2010年版《中国药典》（一部）方法测定不同产地木蝴蝶药材中的灰分、酸不溶性灰分与杂质的含量；采用高效液相色谱法测定药材中木蝴蝶苷B的含量：色谱柱为Promosil C18（200mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水-磷酸（42：58：0．2，V／V／V），流速为1．0ml／min，柱温为25℃，检测波长为254nm。结果：4个不同产地木蝴蝶药材的总灰分百分含量范围为2．16％～3．99％；酸不溶性灰分范围为0．01％～0．86％；杂质范围为0．26％～0．52％；木蝴蝶苷B质量分数范围为4．49％～6．14％。结论：所建立方法可用于木蝴蝶药材的质量控制。