基于网络药理学和分子对接探讨千层纸素A治疗椎间盘退变的分子机制

目的运用网络药理学及分子对接技术探讨千层纸素A治疗椎间盘退变的作用机制。方法通过PharmMapper、SwissTarget Prediction和Similarity ensemble approach数据库获取千层纸素A的药物作用靶点。在GeneCards和在线人类孟德尔遗传数据库搜索椎间盘退变疾病相关靶点。在此基础上,将千层纸素A的作用靶点与椎间盘退变疾病靶点取交集得到千层纸素A对椎间盘退变的潜在治疗靶点。运用在线String数据库和Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白相互作用网络,运用R语言对共同靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,使用AutoDock vina软件对千层纸素A与关键靶点进行虚拟对接。结果通过筛选共得到35个千层纸素A对椎间盘退变的潜在治疗靶点。靶点涉及的通路主要包括PI3K/AKT信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路以及糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路。结合蛋白相互作用网络和KEGG富集分析共得到白细胞介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶9(MMP9)4个核心靶点,与千层纸素A进行分子对接,结果显示亲和力均小于-5 kcal·mol-1,分子对接结果良好。结论本研究采用网络药理学和分子对接的方法,揭示出千层纸素A可能通过抑制髓核细胞凋亡、抑制细胞外基质降解、抗炎和抗血管生成发挥多靶点和多通路的抗椎间盘退变作用,为后续研究其分子机制奠定了基础。

千层纸素A的抗肿瘤药理作用及机制研究进展

千层纸素A是从中药黄芩根部提取的主要黄酮类化合物之一,能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞和抑制肿瘤转移等多方面发挥抗肿瘤作用。本文主要阐明近5年内对于千层纸素A抗肿瘤活性的多种机制、途径和分子靶点的研究进展,证实千层纸素A的抗肿瘤作用,为进一步开发提供理论支撑。

千层纸素A的药理作用及制剂开发的最新进展

千层纸素A主要来源于我国传统中药黄芩，是一种重要的黄酮类有效成分。由于黄芩在我国拥有悠久的药用历史和显著的药用价值，使得千层纸素A一经发现，就很快受到广大研究者的关注。现代研究表明，千层纸素A可以抗炎、抗肿瘤、保护血管与神经细胞、改善记忆障碍、抗病毒等。目前市场上千层纸素A的产品很少。随着千层纸素A提取或合成工艺的不断进步，也将会有更多的千层纸素A制剂产品问世。

黄芩提取物中黄酮类成分血浆蛋白结合率的测定

目的建立同时测定黄芩总黄酮部位中4种黄酮类成分在大鼠血浆中药物浓度的方法,并测定其体外血浆蛋白结合率。方法平衡透析法测定黄芩黄酮类成分血浆蛋白结合率,以高丽槐素为内标,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行预处理,采用HPLC法测定4种黄酮类成分在透析内、外液中的浓度。结果在低、中、高3种浓度下,黄芩苷(BL)和汉黄芩苷(WL)的血浆蛋白质结合率随给药浓度的增大而降低(BL:82.03%→77.25%→67.17%;WL:82.24%→76.08%→69.87%),而汉黄芩素(W)和千层纸素A(OA)则呈现非质量浓度依赖性,其平均血浆蛋白结合率分别为(89.66±1.19)%、(88.56±1.87)%。结论该文所建立的测定方法简便、灵敏、专属性强。4个黄酮类成分在大鼠体外均有较高的血浆蛋白结合率。

千层纸素A内皮依赖性舒张大鼠离体血管的作用

目的:研究千层纸素A对离体大鼠胸主动脉的血管舒张作用及其内皮依赖性作用机制。方法:分离Wistar大鼠的胸主动脉,采用离体大鼠胸主动脉环张力测定法检测千层纸素A对1μmol/L去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)或60mmol/L氯化钾预收缩的大鼠离体胸主动脉环的舒张效应,并观察去内皮或用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)预处理后千层纸素A舒张血管作用的变化。结果:千层纸素A(10、100μmol/L)可以舒张NE(1μmol/L)和氯化钾(60mmol/L)预收缩的内皮完整的离体血管,10、100μmol/L药物浓度组与溶剂对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);对去内皮血管的舒张作用显著低于内皮完整的血管(P<0.05,P<0.01);终浓度为100μmol/L的L-NAME可以显著降低100μmol/L千层纸素A的舒血管作用,加入L-NAME组与不加入抑制剂组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:千层纸素A可通过内皮依赖的一氧化氮途径发挥舒张血管的作用。

千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的研究千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法 MTT实验考察千层纸素A在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究千层纸素A的双向转运机制,以转运量及表观渗透系数(Papp)为指标,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制药维拉帕米对其吸收的影响。结果千层纸素A在Caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关;并受pH值影响,P-gp抑制药维拉帕米对其转运无影响,从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运与基底端到顶端的转运大致相同。结论千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收是被动转运。

天然产物千层纸素A的研究进展

天然产物千层纸素A具有广泛的生物活性,如抗肿瘤、神经保护、抗炎、抗分娩、抗瘙痒等,目前引起了国内外学者的广泛关注。综述了近年来国内外关于千层纸素A的植物提取、人工合成、生物活性及作用机制方面的研究进展。

HPLC法同时测定黄芩射干汤中8种有效成分的含量

目的建立同时测定黄芩射干汤中8种有效成分射干苷、野鸢尾苷、黄芩苷、汉黄芩苷、鸢尾黄素、黄芩素、次野鸢尾黄素、千层纸素A含量的方法。方法采用HPLC-VWD法,色谱柱为Promosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸水(A)-乙腈(B);梯度洗脱;检测波长270 nm;柱温:28℃。结果射干苷、野鸢尾苷、黄芩苷、汉黄芩苷、鸢尾黄素、黄芩素、次野鸢尾黄素及千层纸素A的质量与峰面积分别在0.05625~0.3375μg(r=0.9999)、0.01613~0.09677μg(r=1.000)、0.3146~1.888μg(r=1.000)、0.1199~0.7194μg(r=1.000)、0.008656~0.05194μg(r=0.9999)、0.05632~0.3379μg(r=0.9997)、0.01134~0.06802μg(r=1.000)、0.01035~0.06211μg(r=0.9998)呈良好的线性关系。结论该方法精密度、稳定性、重复性良好,适用于黄芩射干汤中上8种成分的含量测定。

黄芩自生酶催化水解总黄酮苷的工艺研究

目的研究黄芩自生酶催化水解总黄酮苷的工艺条件。方法采用正交试验,考察了加水量、温度和时间等因素,采用HPLC法测定了药材中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素-A的含量。结果确定最优酶催化水解工艺条件为取药材,加4倍量水,于32℃酶催化水解12h,烘干后备用。结论黄芩自生酶催化水解总黄酮苷是一种环保、经济、可行的方法。

黄芩射干汤中千层纸素A和次野鸢尾黄素的含量测定

目的建立黄芩射干汤有效成分千层纸素A和次野鸢尾黄素的定量分析方法。方法采用HPLC-DAD法测定制剂中千层纸素A和次野鸢尾黄素含量,使用Ultimate XB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温:25℃。结果千层纸素A和次野鸢尾黄素含量的线性范围分别为0.058 32~0.641 52μg(r=0.999 4)和0.053 76~0.591 36μg(r=0.999 6);平均回收率(n=6)分别为96.98%和97.37%,RSD分别为1.68%和1.98%。结论所建方法快速、准确,重复性好,可作为此制剂的定量分析方法。

黄芩总黄酮在Caco-2细胞上的吸收特征

目的建立同时测定Caco-2细胞模型中黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的HPLC法,探讨黄芩总黄酮在Caco-2细胞上的吸收机制。方法利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A由肠腔侧(AP侧)到基底侧(BL侧)和BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用HPLC-UV对上述4个黄酮成分进行分析,计算转运参数和表观渗透系数(Papp)。结果黄芩总黄酮给药后,黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A由AP→BL侧的Papp分别为(1.65±0.38)×10-6、(1.58±0.21)×10-6、(1.57±0.15)×10-6和(5.74±0.18)×10-6cm/s,由BL→AP侧的Papp分别为(1.23±0.24)×10-6、(1.22±0.16)×10-6、(1.27±0.07)和(5.13±0.19)×10-6cm/s;表观渗透率(PDR)分别为0.75、0.77、0.80和0.89。结论 4个黄酮类主要以被动吸收方式进入体内。

正交试验法优选黄芩总黄酮苷元酶解后提取工艺

目的研究黄芩经自生酶水解后,总黄酮苷元提取的工艺条件。方法采用正交试验,考察乙醇浓度、用量、渗漉速度等因素,采用HPLC法测定提取物中黄芩素、汉黄芩素、千层纸素-A的含量。结果乙醇浓度为影响黄芩总黄酮苷元提取效果的主要因素。确定提取工艺为以10倍量95%乙醇渗漉,渗漉速度为6mL/kg·min-1。结论在考察的工艺条件下,对酶解后黄芩中总黄酮苷元的提取效率高,纯度可达60%以上。

薄层扫描法测定安宫宁胶囊中千层纸甲素A的含量

目的 :建立安宫宁胶囊中千层纸甲素A的含量测定方法。方法 :测定波长λS=315nm ,参比波长λR=36 0nm ,展开剂为苯 甲醇 冰醋酸 (95∶5∶0 .2 )。结果 :千层纸甲素A的平均回收率为 96 .96 % ,RSD =2 .1%。结论 :该方法简便、快速、准确 。

黄芩中千层纸素-A和汉黄芩素的分离鉴定与谱学研究

目的研究中药黄芩的化学成分。方法利用硅胶柱层析色谱对黄芩的氯仿部位分离,通过波谱方法进行结构鉴定。结果从黄芩的氯仿部位分离得到千层纸素-A(Ⅰ)、汉黄芩素(Ⅱ)。结论千层纸素-A(Ⅰ)和汉黄芩素的谱学特征有明显区别。

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中千层纸素的浓度

目的建立快速且灵敏的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中千层纸素的浓度。方法色谱分离采用C_(18)色谱柱,甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵(77∶23,V/V)为流动相,流速1.05 m L·min^(-1)。大鼠血浆加入β-葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶,37℃孵化过夜,再加入内标染料木素及0.1%磷酸溶液,用乙酸乙酯提取,上清液40℃水浴中氮气流吹干,以流动相200μL溶解残渣,进行分析。检测器采用四极杆串联质谱仪,离子源采用电喷雾电离离子源(ESI),检测方式采用选择反应检测扫描(SRM),检测离子:千层纸素[M+H]^+284.9→269.9,内标[M+H]^+270.9→270.9。结果千层纸素在5~1 000μg·L^(-1)范围内,线性关系良好,回收率大于85%,日内和日间的相对标准偏差(RSD)小于15%。结论建立的LC-MS/MS法符合生物样品分析的要求,可用于研究大鼠灌胃千层纸素后血浆中千层纸素的测定。

千层纸素A改善大鼠慢性心力衰竭的作用及其分子机制

探讨千层纸素A(oroxylin A,OA)对异丙肾上腺素诱导的大鼠心力衰竭的保护作用及其分子机制。与模型组相比,OA给药组[25、50、100 mg/(kg·d),每组8只大鼠,灌胃给药8周]可剂量依赖地改善大鼠心力衰竭的症状,血流动力学参数和心脏射血分数有较大改善,心脏功能指数明显恢复,心脏彩超及苏木精-伊红染色、Masson染色提示心脏损伤程度明显减轻,多种神经内分泌因子如去甲肾上腺素、醛固酮、脑钠肽等在OA给药组均显著下调。进一步利用大鼠原代心肌细胞发现,OA可通过抑制AKT1-RPS6KB1信号通路促进心肌细胞自噬。实验结果表明,OA可通过促进心肌细胞的自噬来改善异丙肾上腺素所诱导的大鼠心力衰竭。

UV和HPLC法测定黄芩黄酮总苷元提取物中总黄酮和3种主要成分的含量

本文建立了黄芩黄酮总苷元提取物中总黄酮和3种主要成分的含量测定方法。采用HPLC法测定黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A的含量。使用Agilent 1200型高效液相色谱仪，Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸水（50：50），流速1 mL / min，柱温35 ℃，检测波长275 nm的方法。黄芩素、汉黄芩素和千层纸素 A线性范围分别为3.501-70.016 μg/mL（r=0.9999），0.832-16.640 μg/mL（r=0.9998），0.418-8.352 μg/mL（r=0.9999）；平均加样回收率（n=6）分别为99.55%、98.86%、9.997%，RSD分别为1.74%、1.74%、1.70%。采用UV法测定总黄酮含量，黄芩素线性范围为1.71-8.54 μg/mL（r=0.9991）；平均加样回收率（n=6）为100.93%，RSD为2.63%。黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A和总黄酮的含量分别为48.22%-60.36%、12.09%-14.46%、5.05%-8.81%、78.11%-90.12%；研究结果表明该方法准确、可靠，适用于黄芩黄酮总苷元提取物的含量测定。

千层纸素诱导人慢性粒细胞白血病K562的凋亡作用

探讨千层纸素对人慢性粒细胞白血病细胞K562的凋亡诱导作用及其可能机制。采用MTT法检测细胞存活率;电镜下观察细胞超微结构的改变;DAPI染色观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase 9、survivin及ERK1/2的表达变化情况。结果表明千层纸素呈浓度依赖地抑制K562细胞的增殖作用,诱导K562细胞发生凋亡,上调K562细胞中cleaved-caspase 9蛋白,下调survivin、pro-caspase 9及p-ERK1/2蛋白的表达水平。千层纸素可诱导K562凋亡,这可能与下调survivin蛋白表达,激活caspase 9蛋白,抑制ERK信号通路有关。

反相高效液相色谱法测定千层纸素的含量和有关物质

目的建立测定千层纸素的含量和有关物质的RP-HPLC方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为ODS-2(4.6 mm×150 mm,5μm),甲醇-乙腈-10 mmol·L^(-1)磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长271 nm。结果在含量测定色谱条件下,千层纸素浓度在2.02~20.23μg·m L^(-1)内与峰面积呈良好线性关系(r=1.000,n=6);在有关物质测定色谱条件下,有关物质黄芩素、汉黄芩素、杂质Ⅰ分别在质量浓度0.0197~0.7872μg·m L^(-1)(r=1.000,n=6)、0.0313~0.6250μg·m L^(-1)(r=0.9997,n=6)、0.0818~2.0440μg·m L^(-1)(r=0.9999,n=5)内与峰面积呈良好的线性关系;黄芩素、杂质Ⅰ和各杂质总含量分别为0.11%、0.39%、0.57%。结论本方法灵敏度高、重现性好、准确可靠,可用于千层纸素有关物质的检测分析及质量控制。

木蝴蝶素抗脓毒症潜在靶标的筛选与鉴定

目的研究木蝴蝶素的分子特性,筛选并鉴定其抗脓毒症的潜在靶标。方法通过TCMSP数据库,分析木蝴蝶素的药理学参数和分子特性及靶向预测;利用DRAR-CPI和Swiss TargetPrediction服务器进行靶标筛选,将筛选得到的共有靶标信息与OMIM、CTD和TTD数据库中已报道的与脓毒症相关疾病靶标进行匹配分析;通过dockingserver分子对接服务器对接分析涉及的相关蛋白。结果木蝴蝶素口服生物利用度(OB)为41.37%,药物相似度(DL)为0.23,具有良好的成药性;DRAR-CPI和Swiss TargetPrediction服务器筛选得到97个潜在靶标,与抗脓毒症相关的有9个,分子软件对接分析鉴定木蝴蝶素与潜在抗脓毒症靶标的自由结合能小于-5 kcal/mol的有8个,分别为PROC、CTSG、MIF、NOS3、NOS2、F9、ADORA2A和ADORA1。结论木蝴蝶素可能通过结合上述8个靶标,缓解脓毒症整体症状和炎症等水平,从而起到抗脓毒症作用。