兔CCR10基因的克隆与序列分析

克隆并分析兔CCR10基因。基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,兔盲肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coli JM109感受态细胞、检测阳性克隆、测序并进行序列分析。克隆的兔CCR10基因长为723bp,编码由241个氨基酸残基组成的CCR10前体蛋白,三级结构预测表明CCR10具有一个多克隆免疫球蛋白区(PIG-X)。克隆的兔CCR10基因与绵羊、人的同源性分别为89.6%、89.9%,推导的氨基酸序列与绵羊、人的同源性分别为94.2%、93.8%,结构特征与绵羊、人的相一致。克隆了兔CCR10基因并注册GenBank(登录号:EU348829)。

CD147基因在家兔肠道的克隆与结构预测

基于电子延伸序列，克隆并分析兔CD147基因。采用兔十二指肠黏膜组织提取总RNA，进行RT-PCR反应，测序并进行结构预测。克隆的兔CD147基因包含一个完整的开放阅读框架，全长为810bp，编码由270个氨基酸残基组成的CD147前体蛋白，推导的氨基酸序列信号肽为1～16个氨基酸。氨基酸序列与牛、人、褐鼠、野猪的同源性分别为62．5％，65．9％，59．5％和66．3％，三级结构预测表明CD147具有2个免疫球蛋白类似区。试验成功克隆了兔CD147基因，注册到GenBank（Accession．EU650668），并预测其三级结构，为进一步研究其生物学功能奠定基础。

兔CCL28基因的克隆与序列分析

克隆并分析兔CCL28基因。基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,兔盲肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞、检测阳性克隆、测序并进行序列分析。克隆的兔CCL28基因片段长为133 bp,编码由44个氨基酸残基组成的CCL28前体蛋白,克隆的兔CCL28基因与绵羊、野猪的同源性分别为76.7%、77.4%,推导的氨基酸序列与绵羊、野猪的同源性分别为56.8%、56.8%,结构特征与绵羊、野猪的相一致。并注册GenBank(Accession.EU727201)。

兔CCR9基因的克隆与序列分析

设计1对克隆引物,从兔十二指肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明:克隆的兔CCR9基因长为624 bp,编码由208个氨基酸残基组成的CCR9前体蛋白,预测CCR9具有多个跨膜区。克隆的兔CCR9基因与绵羊、人的同源性分别为82.9%、82.7%;推导的兔CCR9氨基酸序列与绵羊、人的同源性分别为80.1%、82.2%,其结构特征与绵羊、人的相一致。