三种改良提取长雄野生稻根叶总RNA方法的比较研究

为探讨野生稻总RNA的提取,笔者尝试了改良SDS、CTAB和TRIzol三种提取方法分别提取长雄野生稻根和叶总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测,比较这三种方法的提取效果。结果表明,改良SDS、CTAB法提取的根总RNA的电泳条带清晰,几乎没有污染,无明显降解,OD260/OD280在1.75～2.0之间,能满足一般的分子操作要求,但所提取的叶片总RNA则有明显的DNA污染和少量的蛋白质污染。用TRIzol法提取的总RNA,无论是根还是叶片,均有不同程度蛋白质污染。若要进行下一步的分子操作,需先进行RNA的纯化,以去除蛋白质。可见改良SDS、CTAB法提取根的总RNA是首选。

长雄野生稻地下茎cDNA文库的构建及EST分析

长雄野生稻(Oryza longisatminata)是广泛生长在热带非洲的1个野生种,具有明显的地下茎特征。为了探索控制其地下茎发育的相关基因及其他优异基因,初步构建了地下茎cDNA文库。文库指标显示:初始滴度为2.5×105cfu/μg,扩增滴度为2.9×108cfu/μg,库容为5×106cfu,重组率为82%;随机挑选80个单克隆进行测序,插入片段在400～1000bp之间;对测序结果进行比对分析,获得了58个已报道有一定功能的EST序列,22个未见报道的EST序列;并利用PAUP4.0软件对序列进行了筛选分析。