水稻OsBP-73基因表达需要其内含子参与

该实验室以前的研究表明,水稻OsBP-73基因含有2个外显子和1个长度为2 471 bp的内含子。该文报告用OsBP-73基因ATG翻译起始密码子(在第1外显子中)上游序列 (-1 818^+215)与GUS基因构成嵌合质粒pRSS1,将该质粒转化水稻后,在抗性愈伤组织和转基因植株中未能检测到GUS基因的表达。只有用含有完整的内含子及其上游序列(-1 818^+2 844)与GUS基因构成嵌合质粒(p13GNF)时,才能在p13GNF的转基因抗性愈伤组织和植株中检测到GUS基因的表达。实验还证明,单是内含子序列并不能驱动GUS基因在转基因水稻中表达。由此推测:OsBP-73基因的启动子序列驱动基因表达时,需要基因内含子的参与。

水稻转录因子OsBP-73靶基因的初步筛选

OsBP-73是用酵母单杂交系统,以水稻蜡质基因(Wx)的顺式作用元件为诱饵,从水稻cDNA表达文库中筛选获得的转录因子。本文以OsBP-73基因为例介绍了用"下拉"(pull-down)方法筛选转录因子靶基因的一般步骤。将含有该基因DNA结合功能域的cDNA片段构建到原核表达载体上,并在大肠杆菌中诱导表达获得其蛋白p73。用纯化后的p73蛋白通过"下拉"实验对OsBP-73靶基因进行初步筛选,获得了22个阳性克隆,为进一步研究转录因子OsBP-73参与的水稻转录调控网络提供依据。