转OsEBP-89基因水稻芽期与幼苗期的抗盐性鉴定

以100 mmol浓度NaCl盐胁迫,对转OsEBP-89基因水稻T6代3个株系芽期与幼苗期抗盐性进行了鉴定。结果表明,转OsEBP-89基因株系之间抗盐性存在差异,其中两个转基因株系(3448和3463)发芽势比对照日本晴高,芽期综合相对盐害率显著低于对照日本晴,说明转基因材料在100 mmol NaCl胁迫下其芽受到盐的伤害少于对照材料;但其发芽率、根长、苗高和幼苗期综合相对盐害率与对照日本晴没有显著差异。

水稻OsEBP-89基因部分转录本中第1内含子的滞留

OsEBP-89基因是水稻中一个转录因子编码基因.该基因含有两个内含子.采用RT-PCR和Southern杂交等方法的检测结果表明,在OsEBP-89基因的部分转录本中,115bp长的第1内含子未被剪接.从水稻cDNA文库也筛选到了仍然保留有第1内含子的OsEBP-89基因的cDNA克隆.OsEBP-89基因第1内含子不完全剪接的转录本与正常成熟转录本的比例在水稻不同组织中是不同的.这是真核基因中内含子滞留的一个新的例子.

转反义基因小麦品系00T89农艺性状分析

为了探明转反义TrxS基因小麦株系农艺性状的变异程度,对转基因株系00T89与非转基因对照进行了比较分析,结果表明,00T89转基因株系与对照同步发育,生育期相近。单株籽粒数和单株产量平均比对照提高了35.3%和39.5%;在单株成穗数和千粒重方面与对照无明显差异,平均株高增加了3.8 cm。在穗部性状上表现为穗长增加13.37%,但总小穗数变化不大,单穗结实小穗数平均增加1.7个;单穗粒数和粒重分别比对照增加24.2%和26.77%。

抗黄瓜花叶病转基因烟草NC89抗病性鉴定

利用基因工程技术将外源CMV－CP和Sat－RNA基因，同时导入NC89获得的抗黄瓜花叶病NC89－B品系，经田间鉴定，其病株率和病情指数明显低于对照NC89，既保持了原NC89品种特征特性，又具有高抗黄瓜花叶病性状。

转反义trxs基因小麦株系00T89分子鉴定及抗穗发芽特性研究

以皖麦48为受体导入反义trxs基因已获得00T89第4代(T4)转基因株系,对其进行反义基因的PCR鉴定、相对定量RT-PCR基因表达检测以及抗穗发芽特性研究。结果表明,18个T4代转基因株系中,13个株系目的基因检测呈阳性;成熟期籽粒萌发过程中,8个株系转录水平上mRNA丰度极显著降低(P<0·01),mRNA丰度与穗发芽指标呈显著和极显著的相关性(r=0·7181)。其中6个株系在开花后30d至成熟后10d表现出明显的抗穗发芽特性。与非转基因对照相比,平均穗开始发芽时间推迟2·7d(P<0·01),穗粒发芽率和穗发芽度分别降低35·5%(P<0·01)和47·5%(P<0·01),成熟后25d这些株系又逐渐恢复发芽特性,无显著差异(P>0·05)。

石河子地区中老年人群LRP5基因Q89R位点多态性与骨质疏松的关联性分析

目的本研究旨在探讨石河子地区中老年人群LRP5基因Q89R位点多态性与骨质疏松之间的关系。方法通过采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)对115例健康汉族中老年人、74例骨量低下者和33例骨质疏松患者的LRP5基因Q89R位点进行分型,并计算其基因频率分布;全自动生化仪对生化指标进行检测;双能X线骨密度仪测定腰椎L1-L4和股骨颈、Ward’s三角区、大转子、股骨干的骨密度。结果中老年男性人群LRP5基因Q89R位点各基因型之间的骨密度、生化指标均无统计学差异。中老年女性LRP5基因Q89R位点QQ、QR、RR基因型总基因频率分别为82.14%、16.97%、0.89%;正常对照组分别为88.10%、11.90%、0%;骨量低下组分别为90.24%、9.76%、0%,骨质疏松组分别为62.07%、34.48%、3.45%,QQ、QR型在骨质疏松组与骨量低下组、正常对照组之间的基因频率存在显著性统计学差异;腰椎L1-L3、大转子的骨密度与Q89R基因型相关;未发现腰椎第四节、Ward’s三角区、股骨颈、股骨干的骨密度值与Q89R基因型具有相关性;生化指标中,血清磷含量与基因型显著相关。结论 LRP5基因Q89R位点多态性具有种族、地区差异性。LRP5基因Q89R位点基因多态性是石河子地区中老年女性骨质疏松的预测因素,提示LRP5基因是影响骨密度的候选基因之一。

OsBP-5与OsEBP-89两蛋白之间相互作用区域的确定

OsBP 5 (MYC类转录因子 )与OsEBP 89(AP2 /EREBP类转录因子 )两个蛋白之间可以相互作用 ,并能协同调控水稻waxy基因的表达。将OsBP 5与OsEBP 89cDNA的不同限制性片段分别克隆到酵母双杂交系统的载体上 ,利用酵母双杂交的方法确定了OsEBP 89中与OsBP 5相互作用的区域位于AP2 /EREBP保守域的RAYD元件内 ;OsBP 5中与OsEBP 89相互作用的区域则有两个区段 ,它们分别位于Pro68与Val171之间和Leu2 84与Gly3 3 5之间 ,而不是位于HLH保守域内。酵母系统中的实验还表明 ,OsEBP 89的 3′端部分氨基酸在一定程度上防碍了它与OsBP

H89抑制降钙素基因相关肽促兔成骨细胞OPG表达的实验研究

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对兔成骨细胞骨保护素(OPG)表达的影响以及用特异性PKA抑制剂H89抑制cAMP/PKA信号通路后OPG表达的变化。方法:将体外培养的兔颅骨成骨细胞在使用或不使用H89预处理后,加入外源性CGRP孵育48 h,提取各组细胞mRNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察成骨细胞OPG mRNA表达强度的变化。结果:CGRP显著刺激兔成骨细胞OPG mRNA的表达,这种刺激作用在24h时达到峰值。使用H89抑制cAMP/PKA信号通路后,CGRP诱导的OPG mRNA的表达下降了约50%。结论:CGRP对骨代谢的调节作用部分是通过促进成骨细胞OPG的合成与分泌,并且这种调节作用可能是通过激活cAMP/PKA级联信号而实现的。

5α-还原酶2-V89L基因与尿道下裂相关性的研究进展

尿道下裂疾病是小儿泌尿生殖的常见畸形。5α-还原酶是泌尿生殖系统发育的重要酶,在泌尿生殖系统的生殖发育中起着至关重要的作用,尤其是Ⅱ型5α-还原酶。众多文献报道,Ⅱ型5α-还原酶的基因突变是很多疾病的发病因素,而且是主要因素,在泌尿生殖系统疾病上凸显得尤其明显。5α-还原酶2-V89L基因多态性是泌尿系统、甚至其他系统很多疾病的易感基因。此基因目前被研究涉及的范围比较广,关注它与疾病易感性的学者也比较多,慢慢地逐渐被许多学者重视。但5α-还原酶2-V89L基因与尿道下裂疾病的易感性相关研究报道仍然比较少,况且有的研究报道还需要得到进一步的研究证实。本文主要综述Ⅱ型5α-还原酶基因与一些疾病的易感性,尤其是对5α-还原酶2-V89L基因的多态性及疾病易感性进行综述。

大豆GmPP2C89基因在盐胁迫中的功能分析

为探究大豆GmPP2C89基因在植物非生物胁迫响应和适应过程中的功能,利用转录组数据和荧光定量PCR方法检测GmPP2C89基因在NaCl、PEG和甘露醇处理下的表达模式;接着分析GmPP2C89基因启动子上响应非生物胁迫的顺式作用元件,并根据元件的分布克隆不同长度的启动子构建融合GUS载体,获得对应的转基因拟南芥,通过GUS染色分析启动子对NaCl、PEG和甘露醇处理的响应。构建GmPP2C89基因过表达的转基因拟南芥,在正常条件和NaCl处理条件下测定根长、叶片MDA含量和电解质渗透率以及盐胁迫相关基因(SOD、POD、CAT、RD26、RD29A和RD29B)的表达水平。结果显示,NaCl、PEG和甘露醇处理均导致大豆GmPP2C89基因表达水平显著上调;在其启动子区含有较多ABRE、DRE、G-box、MBS、MYB、MYC和TC-rich repeats等参与非生物胁迫响应的顺式作用元件,并且该启动子对NaCl处理具有更强的响应。此外,在盐处理条件下,转基因拟南芥GmPP2C89-OX根长显著大于WT,而MDA含量和电解质渗透率显著低于WT,耐盐性明显增强;抗氧化酶基因(SOD和POD)和ABA途径关键基因RD29B在GmPP2C89-OX中的表达水平显著高于WT。结果表明,大豆GmPP2C89基因受NaCl、PEG和甘露醇诱导表达上调,GmPP2C89过表达可通过激活抗氧化途径和ABA途径增强转基因拟南芥的耐盐性。

转基因NC89品种对花叶病的抗病性研究及主要性状分析

1991年～1992年对利用基因工程技术培育的转基因NC89品种进行了抗病性研究.在人工接种条件下转基因NC89品种的发病率、病情指数显著低于对照,相对防效1991年和1992年分别为73.4%和76.3%.表现出较强的抗病性.在自然发病条件下(花叶病流行年),其发病率和病情指数大大低于普通NC89,表现明显的抗病性.烟叶化学成分和评吸结果与普通NC89基本一致.

烟草抗病新品系“转基因NC89”的大田试验

对转“黄瓜花叶病毒外壳蛋白（ＣＭＶＣＰ）＋卫星ＲＮＡ”嵌合基因的工程ＮＣ８９的Ａ、Ｂ、Ｃ三个纯系以及转“ＣＭＶＣＰ＋烟草花叶病毒外壳蛋白（ＴＭＶＣＰ）”嵌合基因的工程ＮＣ８９Ｔ纯系进行了田间抗病性鉴定及农艺性状测试，结果表明：不论在人工接毒或自然发病条件下，转基因ＮＣ８９的花叶病病情指数都明显低于未转基因ＮＣ８９对照，其中Ｂ纯系的抗病性最高，在上述条件下，相对防效分别达到８０．２％、９２．９５％。在农艺性状方面，转基因ＮＣ８９较对照有所改善，但种性未变。

Taqman-MGB双重探针PCR技术检测含89K毒力岛猪链球菌2型

目的建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法。方法利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针。优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,并对21株猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果该技术的种特异性16S rRNA及其89K毒力岛两基因检测灵敏度分别为6个拷贝/反应(或12cfu/mL)及27拷贝/反应(或58cfu/mL);重复性实验,变异系数为0.30%～2.11%;从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。用该方法对有关菌株进行考核,21株SS2菌检测结果均为SS种特异性16S rRNA基因阳性,其中15株含有89K毒力岛的SS2菌株的89K毒力岛基因检测均阳性;而非SS菌株的16S rRNA和89K毒力岛基因检测结果均为阴性。对49份呼吸道咽拭子、血液应急样本等进行实际考核,有2份血液样本16S rRNA基因阳性,其中1份血液样本89K毒力岛基因阳性。结论本次建立的Taq Man-MGB双重探针荧光定量PCR方法特异、快速、敏感,可特异性鉴定SS2中国毒力株(含有89K毒力岛),区分SS与非SS菌以及是否含有89K毒力岛基因,该方法的建立将有益于目前针对猪链球菌2型中国毒力株快速定量检测,以及疑似猪链球菌病患者病原的早期甄别、猪链暴发疫情调查及猪群暴发或带菌调查与评估等。

应用LAMP技术鉴定含89K毒力岛2型猪链球菌菌株

目的应用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)技术鉴别含89K毒力岛2型猪链球菌(Streptococ-cus suisserotype2,S.suis2)菌株。方法根据S.suis2中国分离株(05ZYH33)89K毒力岛中基因序列设计4条引物(2条内引物、2条外引物);应用LAMP,对21株S.suis2、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株及49份未知样本进行检测,并对LAMP的最低检测限进行测试,结果通过肉眼目测或电泳检测,并将结果与PCR/定量PCR结果比较。结果该方法仅对含89K毒力岛的中国S.suis2特有株检测为阳性,而其它菌株经LAMP检测均为阴性,试验表明本方法特异性好,其最低检测限为24CFU/反应,无需特殊设备,结果通过肉眼即可判断,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。应用本方法对49份不同来源样本进行实际考核,其中32份不明发热病人呼吸道咽拭子应急样本及15份正常猪扁桃体咽拭子样本经检测89K毒力岛基因均为阴性,2份疑似SS2病人血液应急样本中一份检测到该毒力岛基因,该结果与普通PCR/定量PCR检测结果一致。结论成功建立了检测S.suis289K毒力岛的LAMP方法 ,该方法特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,操作简单方便,极适合在我国广大基层实验室(包括基层医院/动物检疫等部门)开展应用。

不同基因型烤烟叶片致香物质含量的对比分析

对中国推广种植的5个不同基因型烤烟品种烤后烟叶的致香物质含量进行了比较分析。结果表明,上部叶总的致香物质含量由高到低依次为NC89、K326、RG17、云烟85、中烟98,中部叶依次为云烟85、中烟98、NC89、RG17、K326。不同基因型烤烟叶片间致香物质的含量差异比较大。因此,培育优良的烤烟品种是生产优质烟叶的关键措施之一。

^(89)SrCl_2治疗多发性骨转移癌骨痛与ET、CGRP、TXB_2、6-K-PGF_(1a)的关系

目的:探讨89SrCl2治疗多发性骨转移癌骨痛与内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)、血栓素B2(TXB2)及6-酮-前列腺素F1a(6-K-PGF1a)的关系。方法:39例多发性骨转移癌患者行89SrCl2内照射治疗,采用放射免疫分析法检测治疗前和治疗后1、3及6个月时患者血浆ET、CGRP、TXB2、6-K-PGF1a含量,并计算ET/CGRP。结果:ET含量,治疗后1个月较治疗前无明显变化,治疗后3及6个月与治疗前及治疗后1个月相比均明显升高(P<0.01);CGRP含量,治疗后1个月与治疗前比较明显升高(P<0.05);ET/CGRP比值,治疗前较治疗后1个月无明显变化,治疗后3及6个月与治疗前及治疗后1个月比较均明显升高(P<0.01);TXB2含量治疗前后无明显变化;6-K-PGF1a含量,治疗前较治疗后1个月无明显变化,治疗后3及6个月与治疗前及治疗后1个月比较均显著升高(P<0.01)。结论:89SrCl2治疗多发性骨转移癌骨痛的止痛作用与ET、CGRP、6-K-PGF1a、以及ET与CGRP的平衡有关。

抗黄瓜花叶病转基因烟草新品系的对比及示范试验

对同时表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)和卫星RNA的转基因烟草NC89新品系(NC89-B)及单一表达CMV CP的转基因NC89新品系(NC89-T),在大田生产条件下进行了品比及示范试验.结果表明,在抗病性方面,转基因NC89明显高于未转基因NC89,其中B品系对CMV的相对防效达80%左右,T品系对CMV的相对防效达20%左右;在农艺性状方面,转基因NC89较对照有较显著改善,产值、产量、上等烟比例均有提高,但种性未变;在原烟品质方面,转基因NC89与对照基本一致.

马铃薯StSnRK2基因家族的鉴定与表达分析

研究利用最新报道(2020年)的杂合二倍体马铃薯‘RH89-039-16’基因组信息鉴定出23个马铃薯StSnRK2家族成员,分别被命名为StSnRK2.1~StSnRK2.23。通过生物信息学方法,分析了其基因结构、保守基序、理化性质、共线性关系,研究了其与水稻、玉米和拟南芥的SnRK2的系统进化关系,并利用转录组测序技术探究了家族成员在不同逆境胁迫下的基因表达规律。结果表明,马铃薯StSnRK2家族成员不均匀地分布在12条染色体上,家族成员蛋白长度为298~491 aa,分子量为32.6~55.4 kD,等电点4.51~9.47。系统进化树分析发现该基因家族可分为3个亚族,分别含有13、8和2个StSnRK2基因,在这些成员中共找到10个保守基序,其中保守基序1~9均包含于3个亚组中,而保守基序10则特异性分布于亚组Ⅰ。23个StSnRK2成员的表达模式表明,有15个基因在ABA胁迫24 h时表达量发生显著上调,证明这部分基因对马铃薯响应ABA胁迫具有重要的作用。这些结果为阐明StSnRK2基因家族的进化关系和进一步研究StSnRK2基因的功能特性提供了有价值的信息。

2型猪链球菌gene0969基因敲除突变体的构建及毒力分析

目的:构建2型猪链球菌强毒株05ZYH33毒力岛89K上的Ⅳ型分泌系统组分gene0969敲除突变体,初步分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病中的作用提供实验基础。方法:以05ZYH33基因组为模板,PCR扩增gene0969基因的上下游片段;以穿梭质粒pSET1为模板,PCR扩增氯霉素抗性基因Cm;采用重叠PCR方法搭建3个片段,并克隆到自杀载体pSET4s上,构建基因敲除载体,通过同源重组构建gene0969突变体,再用小鼠感染模型对突变株和野生株的毒力进行比较。结果:获得了gene0969基因敲除突变体,并发现其毒力与野生型相比有下降趋势。结论:2型猪链球菌假想毒力因子gene0969可能与毒力有关,其作用和机制值得进一步分析。

嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达

报导了以启动子探测质粒 p KK2 32 - 8为载体克隆嗜碱芽孢杆菌 NTT89启动子的研究 .用限制性内切酶 Hind 分别消化嗜碱芽孢杆菌 NTT89染色体 DNA和质粒 p KK2 32 - 8,在体外重组 ,转化大肠杆菌 DH5 α感受态细胞 ,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性平板上筛选转化子 ,结果从 NTT89染色体 DNA中克隆到一系列带有启动子活性的 DNA片段 ,并在大肠杆菌中得到表达 ,这些转化子抗氯霉素水平在 34～ 5 0 0 mg/ L 不等 ,随机挑选10个转化子 ,提取其重组质粒进行限制性酶切 ,表明转化子中的重组质粒外源片段插入的效率很高 ,插入片段大小在 5 0 0～ 5 5 0 0 bp之间 ,通过地高辛标记的点杂交和 Southern杂交均证明重组质粒上插入的具启动子功能的 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌的染色体 DNA.