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水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选
被引量:
8
1
作者
邹禹
刘园园
+4 位作者
钱宝云
占新春
郑乐娅
张炜
张培江
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第4期753-763,共11页
为了挖掘水稻OsRPK1胞内互作蛋白质,阐明OsRPK1参与高盐胁迫的分子机制,本研究利用SMART技术,构建水稻高盐胁迫下根尖的酵母双杂交文库。PCR扩增获得OsRPK1基因编码胞内区域的碱基序列,构建诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),检测诱饵表...
为了挖掘水稻OsRPK1胞内互作蛋白质,阐明OsRPK1参与高盐胁迫的分子机制,本研究利用SMART技术,构建水稻高盐胁迫下根尖的酵母双杂交文库。PCR扩增获得OsRPK1基因编码胞内区域的碱基序列,构建诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),检测诱饵表达载体在酵母中的毒性和自激活活性,筛选OsRPK1胞内互作蛋白,进一步分析高盐胁迫下候选基因的表达模式。结果表明,构建的cDNA文库库容量为1.11×10~7 CFU,文库重组率为96%,文库插入片段多态性较好。成功构建了诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),经检测诱饵表达载体无毒性,无自激活活性。诱饵表达载体与cDNA文库进行双杂交筛选,经测序和比对分析获得了11个重要的候选基因,检测候选基因在高盐处理下的表达情况,其中8个候选基因受高盐诱导表达,2个候选基因受高盐胁迫抑制表达,1个候选基因受高盐胁迫瞬时诱导表达后表达量又受到显著抑制。
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关键词
水稻
osrpk1
高盐胁迫
酵母双杂交cDNA文库
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职称材料
水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用研究
被引量:
2
2
作者
邹禹
刘园园
+2 位作者
张培江
钱宝云
张炜
《江苏农业科学》
2019年第8期46-51,共6页
为明确水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用机制,首先分析外源生长素2,4-D对OsRPK1转基因水稻根部表型的影响;其次,异源表达OsRPK1胞外富亮氨酸重复LRRs,检测H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs后的放射性活度以及...
为明确水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用机制,首先分析外源生长素2,4-D对OsRPK1转基因水稻根部表型的影响;其次,异源表达OsRPK1胞外富亮氨酸重复LRRs,检测H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs后的放射性活度以及利用等温滴定量热(ITC)法分析IAA与融合蛋白GST-LRRs相互作用的微热量变化。结果表明,在正常生长条件下,OsRPK1过表达能够抑制水稻侧根的生长;0.01μmol/L 2,4-D处理4 d后发现,OsRPK1抑制表达植株侧根的数量比野生型多112%(P<0.01),而OsRPK1过表达植株侧根生长受到极显著抑制(P<0.001);0.1μmol/L 2,4-D处理10 d后,抑制表达植株不定根的数量相对于野生型多18.2%(P<0.05),而过表达植株不定根的生长受到显著抑制(P<0.01);大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达获得了包涵体形式的GST-LRRs融合蛋白,通过复性、纯化获得可溶性融合蛋白;H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs以及IAA溶液滴定融合蛋白的微热量分析都表明OsRPK1与外源生长素未发生直接作用。
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关键词
水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶
osrpk1
原核表达
外源生长素
融合蛋白GST-LRRs
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职称材料
OsRPK1基因过表达和RNA干涉对水稻苗期耐盐性的影响
被引量:
7
3
作者
李晶岚
陈鑫欣
+3 位作者
石翠翠
刘方惠
孙静
葛荣朝
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第8期1217-1224,共8页
水稻OsRPK1基因属于富含亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶,在盐胁迫下其表达量暂时升高后出现明显下降。前期研究表明,OsRPK1基因过表达会造成拟南芥非生物胁迫耐受性明显降低。本研究对OsRPK1基因在水稻中实现过表达和RNA干涉,进而对OsR...
水稻OsRPK1基因属于富含亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶,在盐胁迫下其表达量暂时升高后出现明显下降。前期研究表明,OsRPK1基因过表达会造成拟南芥非生物胁迫耐受性明显降低。本研究对OsRPK1基因在水稻中实现过表达和RNA干涉,进而对OsRPK1的抗逆性功能加以探究。结果表明,OsRPK1基因表达量增加时,水稻幼苗表现为耐盐性下降;RNA干涉则使水稻幼苗表现为耐盐性增加。盐胁迫后OsRPK1过表达植株脯氨酸含量低于野生型、MDA含量和相对电导率显著高于野生型,而OsRPK1-RNAi水稻植株的脯氨酸含量显著高于野生型、MDA含量和相对电导率显著低于野生型。因此,OsRPK1基因的表达量对水稻耐盐性具有明显影响,脯氨酸含量及细胞质膜受破损程度的改变可能是造成转基因水稻耐盐性变化的内在原因。本研究为进一步阐明OsRPK1基因的抗逆作用机制奠定了基础,对于通过调整该基因表达改良水稻的耐盐性具有重要意义。
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关键词
水稻
osrpk1
基因
过表达
RNA干涉
生理指标
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职称材料
题名
水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选
被引量:
8
1
作者
邹禹
刘园园
钱宝云
占新春
郑乐娅
张炜
张培江
机构
安徽省农业科学院水稻研究所
南京农业大学生命科学学院
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第4期753-763,共11页
基金
国家自然科学基金项目(31701409)
安徽省重点研究和开发计划项目(1804a07020111、1804h07020156)
+1 种基金
安徽省自然科学基金项目(1408085MKL63)
安徽省农业科学院院长青年创新基金(17B0101)
文摘
为了挖掘水稻OsRPK1胞内互作蛋白质,阐明OsRPK1参与高盐胁迫的分子机制,本研究利用SMART技术,构建水稻高盐胁迫下根尖的酵母双杂交文库。PCR扩增获得OsRPK1基因编码胞内区域的碱基序列,构建诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),检测诱饵表达载体在酵母中的毒性和自激活活性,筛选OsRPK1胞内互作蛋白,进一步分析高盐胁迫下候选基因的表达模式。结果表明,构建的cDNA文库库容量为1.11×10~7 CFU,文库重组率为96%,文库插入片段多态性较好。成功构建了诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),经检测诱饵表达载体无毒性,无自激活活性。诱饵表达载体与cDNA文库进行双杂交筛选,经测序和比对分析获得了11个重要的候选基因,检测候选基因在高盐处理下的表达情况,其中8个候选基因受高盐诱导表达,2个候选基因受高盐胁迫抑制表达,1个候选基因受高盐胁迫瞬时诱导表达后表达量又受到显著抑制。
关键词
水稻
osrpk1
高盐胁迫
酵母双杂交cDNA文库
Keywords
rice
osrpk1
high salinity stress
yeast two hybrid cDNA library
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S511 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用研究
被引量:
2
2
作者
邹禹
刘园园
张培江
钱宝云
张炜
机构
安徽省农业科学院水稻研究所
南京农业大学生命科学学院
出处
《江苏农业科学》
2019年第8期46-51,共6页
基金
国家重点研发计划(编号:2016YFD0101801)
国家自然科学基金(编号:31701409)
+1 种基金
安徽省自然科学基金(编号:1408085MKL63)
安徽省农业科学院学科建设项目(编号:17A0101)
文摘
为明确水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用机制,首先分析外源生长素2,4-D对OsRPK1转基因水稻根部表型的影响;其次,异源表达OsRPK1胞外富亮氨酸重复LRRs,检测H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs后的放射性活度以及利用等温滴定量热(ITC)法分析IAA与融合蛋白GST-LRRs相互作用的微热量变化。结果表明,在正常生长条件下,OsRPK1过表达能够抑制水稻侧根的生长;0.01μmol/L 2,4-D处理4 d后发现,OsRPK1抑制表达植株侧根的数量比野生型多112%(P<0.01),而OsRPK1过表达植株侧根生长受到极显著抑制(P<0.001);0.1μmol/L 2,4-D处理10 d后,抑制表达植株不定根的数量相对于野生型多18.2%(P<0.05),而过表达植株不定根的生长受到显著抑制(P<0.01);大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达获得了包涵体形式的GST-LRRs融合蛋白,通过复性、纯化获得可溶性融合蛋白;H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs以及IAA溶液滴定融合蛋白的微热量分析都表明OsRPK1与外源生长素未发生直接作用。
关键词
水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶
osrpk1
原核表达
外源生长素
融合蛋白GST-LRRs
分类号
S511.01 [农业科学—作物学]
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
OsRPK1基因过表达和RNA干涉对水稻苗期耐盐性的影响
被引量:
7
3
作者
李晶岚
陈鑫欣
石翠翠
刘方惠
孙静
葛荣朝
机构
河北师范大学生命科学学院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第8期1217-1224,共8页
基金
国家自然科学基金项目(30900104)
河北省自然科学基金项目(C2016205158)资助。
文摘
水稻OsRPK1基因属于富含亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶,在盐胁迫下其表达量暂时升高后出现明显下降。前期研究表明,OsRPK1基因过表达会造成拟南芥非生物胁迫耐受性明显降低。本研究对OsRPK1基因在水稻中实现过表达和RNA干涉,进而对OsRPK1的抗逆性功能加以探究。结果表明,OsRPK1基因表达量增加时,水稻幼苗表现为耐盐性下降;RNA干涉则使水稻幼苗表现为耐盐性增加。盐胁迫后OsRPK1过表达植株脯氨酸含量低于野生型、MDA含量和相对电导率显著高于野生型,而OsRPK1-RNAi水稻植株的脯氨酸含量显著高于野生型、MDA含量和相对电导率显著低于野生型。因此,OsRPK1基因的表达量对水稻耐盐性具有明显影响,脯氨酸含量及细胞质膜受破损程度的改变可能是造成转基因水稻耐盐性变化的内在原因。本研究为进一步阐明OsRPK1基因的抗逆作用机制奠定了基础,对于通过调整该基因表达改良水稻的耐盐性具有重要意义。
关键词
水稻
osrpk1
基因
过表达
RNA干涉
生理指标
Keywords
rice
osrpk1
genes
overexpressed
RNA interference
physiological indexes
分类号
S511 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选
邹禹
刘园园
钱宝云
占新春
郑乐娅
张炜
张培江
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2019
8
下载PDF
职称材料
2
水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用研究
邹禹
刘园园
张培江
钱宝云
张炜
《江苏农业科学》
2019
2
下载PDF
职称材料
3
OsRPK1基因过表达和RNA干涉对水稻苗期耐盐性的影响
李晶岚
陈鑫欣
石翠翠
刘方惠
孙静
葛荣朝
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
7
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职称材料
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