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水稻OsRacD蛋白G15V、T20N点突变对其细胞定位的影响及其与靶蛋白的相互作用 被引量:2
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作者 梁卫红 刘肖飞 +2 位作者 毕佳佳 吕超慧 彭威风 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期828-833,共6页
OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程.为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突... OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程.为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP和GDP结合形式的OsRacD.进一步构建了受控于CaMV35S的与绿色荧光蛋白融合表达的双元植物表达载体;采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下观察蛋白在活细胞内定位的特点.结果显示,野生型蛋白在细胞质和细胞膜都有分布,组成型激活的蛋白主要分布在细胞膜上,而失活型蛋白则大都集中到细胞核周围.蛋白相互作用的酵母双杂交体系分析显示,OsRacD及其2个突变体具有不同的靶蛋白结合特性.研究证实,水稻OsRacD蛋白G15V和T20N点突变不仅影响其在活细胞内的定位,而且也影响了与靶蛋白的相互作用.说明处于不同鸟苷酸结合状态的OsRacD具有不同的胞内定位方式,可能通过结合不同的靶蛋白,引发不同的细胞应答事件. 展开更多
关键词 osracd 定点突变 绿色荧光蛋白 蛋白相互作用
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光敏核不育水稻OsRacD启动子的分离及其育性相关性分析 被引量:5
2
作者 梁卫红 吴乃虎 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期216-218,共3页
以水稻OsRacD的cDNA序列为探针筛选光敏核不育水稻农垦58S基因组文库,获得了一个包含2kb的Os-RacD启动区和396bp编码区序列的阳性克隆。与反向PCR克隆的水稻农垦58N该基因的启动区比较,证实该基因的启动区在农垦58S和农垦58N的同源性达... 以水稻OsRacD的cDNA序列为探针筛选光敏核不育水稻农垦58S基因组文库,获得了一个包含2kb的Os-RacD启动区和396bp编码区序列的阳性克隆。与反向PCR克隆的水稻农垦58N该基因的启动区比较,证实该基因的启动区在农垦58S和农垦58N的同源性达到99.8%,且在预测的调控元件上不存在碱基差异。说明农垦58S和农垦58N在长日照条件下表现出的育性差别,并非两者在OsRacD调控序列结构上的差别所致,而与基因表达的发育调控有关。 展开更多
关键词 光敏核不育性 水稻 基因组文库 osracd 基因 启动子
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osRACD基因表达与光敏核不育水稻光周期育性转换的相关性 被引量:15
3
作者 叶建荣 黄美娟 +1 位作者 赵淑慧 吴乃虎 《自然科学进展》 北大核心 2004年第2期166-172,共7页
为检测水稻低分子量GTP结合蛋白编码基因osRACD与光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换的相关性,用农杆菌介导转化和潮霉素抗性筛选获得了大量的转基因水稻植株。通过PCR、Southern杂交、RT-PCR和Northern检测等,证明反义osRACD基因和正... 为检测水稻低分子量GTP结合蛋白编码基因osRACD与光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换的相关性,用农杆菌介导转化和潮霉素抗性筛选获得了大量的转基因水稻植株。通过PCR、Southern杂交、RT-PCR和Northern检测等,证明反义osRACD基因和正义osRACD基因均已分别在转基因农垦58N和58S水稻植株的幼穗中得到了稳定的表达。成熟转基因植株的自交结实率统计分析表明,反义osRACD基因的表达大大降低了转基因58N水稻植株的育性,其平均结实率明显低于对照植株;而正义osRACD基因在转基因58S水稻植株的幼穗中表达后,使得长日下生长的、本来不育的58S植株的育性得到一定程度上的恢复,有的植株的结实率还高于短日下生长的对照植株;而且,osRACD基因表达水平越高的转基因58S植株,其对应的结实率也越高。降低幼穗中内源osRACD基因的表达水平会导致转基因58N水稻植株的育性降低,恢复长日下生长的转基因58S水稻植株幼穗中osRACD基因的表达,则可恢复其育性。这表明,osRACD基因的表达参与了农垦58S光周期育性转换的调控过程。这是第一个报道的参与光信号传导与光敏核不育水稻光周期育性调控的低分子量GTP结合蛋白的编码基因。 展开更多
关键词 osracd基因表达 光敏核不育水稻 光周期育性转换 转基因 农垦58S 农杆菌 潮霉素
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转水稻osRACD反义基因拟南芥植株的育性分析 被引量:15
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作者 叶建荣 黄美娟 吴乃虎 《自然科学进展》 北大核心 2003年第3期313-317,共5页
利用反义RNA技术,将水稻低分子量GTP结合蛋白基因osRACD反向置于CaMV35S启动子的调控下,构成反义基因表达载体pBID,并用真空渗透法转化拟南芥植株,转基因植株的荚果自花谢之后就停止生长,其后荚果便自顶端开始逐渐枯黄并死亡;而对照植... 利用反义RNA技术,将水稻低分子量GTP结合蛋白基因osRACD反向置于CaMV35S启动子的调控下,构成反义基因表达载体pBID,并用真空渗透法转化拟南芥植株,转基因植株的荚果自花谢之后就停止生长,其后荚果便自顶端开始逐渐枯黄并死亡;而对照植株的荚果在花谢之后仍继续生长直到成熟。花粉离体萌发生长实验显示,转基因植株花粉萌发后的生长延伸过程受到抑制,形成短而略粗的花粉管;而对照植株花粉萌发后的生长状况正常,形成长圆柱形的花粉管。这些结果表明,osRACD基因的功能是参与控制花粉管的生长延伸过程,其编码的蛋白质可能是调控光敏核不育水稻58S育性的重要因子之一。 展开更多
关键词 水稻 osracd基因 转基因拟南芥 育性 反义RNA技术 花粉萌发 花粉管 光敏核不育
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G15V点突变对水稻OsRacD基因蛋白产物效应的影响 被引量:5
5
作者 梁卫红 吴乃虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期338-342,共5页
在水稻OsRacD基因编码GTPase结构域处,采用PCR方法引入G15V点突变模拟GTP结合形式的OsRacD.原核表达并纯化了突变前后的OsRacD蛋白,用于蛋白生化活性的分析.结果显示,突变后的OsRacD蛋白在GTP水解活性上有显著的提高,提示OsRacD在激活... 在水稻OsRacD基因编码GTPase结构域处,采用PCR方法引入G15V点突变模拟GTP结合形式的OsRacD.原核表达并纯化了突变前后的OsRacD蛋白,用于蛋白生化活性的分析.结果显示,突变后的OsRacD蛋白在GTP水解活性上有显著的提高,提示OsRacD在激活前后具有不同的蛋白生化特性,而且可能通过不同的胞内互作蛋白,引发不同的信号传递,证实了OsRacD在Rho信号转导通路中“分子开关”的重要作用. 展开更多
关键词 osracd 点突变 GTPase活性
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水稻OsMY1和OsRacD基因互作的分子鉴定 被引量:1
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作者 侯成千 梁卫红 王军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期63-66,共4页
OsRacD是光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换信号通路中的重要分子开关,通过酵母双杂交筛选,从水稻幼穗中分离到一种与OsRacD互作的新的肌球蛋白重链编码基因的cDNA片段,命名为OsMY1。在酵母双杂交体系鉴定的基础上,构建了OsMY1和OsR... OsRacD是光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换信号通路中的重要分子开关,通过酵母双杂交筛选,从水稻幼穗中分离到一种与OsRacD互作的新的肌球蛋白重链编码基因的cDNA片段,命名为OsMY1。在酵母双杂交体系鉴定的基础上,构建了OsMY1和OsRacD的原核表达载体,表达和纯化了融合蛋白GST-OsMY1和His6-OsRacD,通过pulldown实验进一步确认了上述互作关系。提示OsMY1和OsRacD可能在功能上相关,为深入研究二者在水稻生理功能上的联系提供了重要线索和依据。 展开更多
关键词 osracd OsMY1 基因互作 酵母双杂交
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水稻osRACD基因编码蛋白质的生化特性分析 被引量:4
7
作者 许云哲 米志勇 +2 位作者 曲红 尤瑞麟 吴乃虎 《自然科学进展》 北大核心 2003年第9期923-927,共5页
将控制光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换特性的发育调节相关基因osRACD克隆在原核表达载体pET28a(+)上,构成重组质粒pET-racd,并转化给大肠杆菌BL-21,提取转化子菌株的蛋白质,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和凝血酶因子的切割作用,最终... 将控制光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换特性的发育调节相关基因osRACD克隆在原核表达载体pET28a(+)上,构成重组质粒pET-racd,并转化给大肠杆菌BL-21,提取转化子菌株的蛋白质,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和凝血酶因子的切割作用,最终获得了单一的osRACD蛋白。此蛋白质经过超滤浓缩和谷胱甘肽氧化还原体系的复性作用之后,供作体外功能鉴定。结果显示,在大肠杆菌BL-21转化子菌株中表达的osRACD蛋白,具有与GTP特异结合及水解GTP的活性。 展开更多
关键词 水稻 osracd基因 基因表达 光周期育性转换 基因编码 GTP结合蛋白 生化特性
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水稻OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体的构建
8
作者 石宏浩 靳萍 +1 位作者 王利娜 梁卫红 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期113-115,共3页
水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRac... 水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体,为采用免疫共沉淀验证二者在体内的相互作用,解析OsRacD与OsRhoGDI2基因参与水稻育性控制的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 水稻 osracd基因 OsRhoGDI2基因 共表达载体
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Isolation and Analysis of the Promoter of OsRacD from PhotoperiodSensitive Genic Male Sterile Rice 被引量:1
9
作者 LIANG Wei-hong WU Nai-hu 《Rice science》 SCIE 2006年第1期29-33,共5页
By using OsRacD cDNA as probe to screen the genomic library of photoperiod sensitive genic male sterile rice line Nongken 58S, a positive clone containing 2 kb promoter and 396 bp coding region of OsRacD was obtained.... By using OsRacD cDNA as probe to screen the genomic library of photoperiod sensitive genic male sterile rice line Nongken 58S, a positive clone containing 2 kb promoter and 396 bp coding region of OsRacD was obtained. Compared with the promoter of OsRacD cloned by reverse PCR from normal rice variety Nongken 58 (Nongken 58N), the homology was 99.8%, and the different nucleotides were outside the predicted response elements in promoter, suggesting that the fertility between rice varieties Nongken 58S and Nongken 58N under the long-day conditions was not attributed to the difference in the structure of OsRacD upstream regulation sequences, but to the developmental regulation of gene differential expression. 展开更多
关键词 photoperiod sensitive genic male sterility RICE genomic library osracd gene PROMOTER
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T20N点突变对水稻OsRacD蛋白GTP酶活性的影响 被引量:1
10
作者 刘肖飞 梁卫红 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期56-61,共6页
OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻OsRacD基因... OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻OsRacD基因的第一个高度保守的基序G1区引入T20N点突变,模拟GDP结合形式的OsRacD。进一步构建了与组氨酸标签融合的原核表达载体,原核表达和纯化了野生型和突变型OsRacD蛋白,并通过Western blot证实了融合蛋白表达和纯化的正确性。纯化蛋白的GTP酶活性检测结果显示,突变后的OsRacD蛋白GTP水解活性显著降低,提示OsRacD在T20N突变前后具有不同的生化特性。 展开更多
关键词 osracd 点突变 原核表达和纯化 GTP酶活性
原文传递
Isolation of osRACD gene encoding a small GTP-binding protein from rice 被引量:17
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作者 Ml Zhiyong WANG Shusheng WU Naihu 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2002年第20期1673-1679,共7页
Using an improved version of mRNA differential display technology, we have obtained a differentially displayed fragment RDP-8. Homologous comparison indicated that the fragment RDP-8 has high homology with the gene en... Using an improved version of mRNA differential display technology, we have obtained a differentially displayed fragment RDP-8. Homologous comparison indicated that the fragment RDP-8 has high homology with the gene encoding maize small GTP-binding protein. By screening cDNA library of the rice Nongken 58N panicle using the newly obtained fragment RDP-8 as probe, we further found the full-length cDNA of osRACD gene that encodes a rice small GTP-binding protein. As compared with maize RACD gene, the osRACD of rice shows remarkable homology in both nucleotide sequence and amino acid sequence, 88% and 97% respectively. Evidence from RT-PCR study indicates that osRACD gene is related to photoperiod fertility conversion of photoperiod sensitive genie male sterility (PSGMS) rice. 展开更多
关键词 RICE osracd mRNA DIFFERENTIAL DISPLAY light signal transduction.
原文传递
两种水稻OsRhoGDIs基因启动子的克隆及分析 被引量:7
12
作者 张利娟 梁卫红 +3 位作者 刘悦霞 刘肖飞 侯成千 毕佳佳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2916-2922,共7页
【目的】OsRacD属于水稻小GTP结合蛋白Rho家族,是与光敏核不育水稻光周期育性转换相关的关键基因,功能之一是通过控制花粉管的延伸生长影响水稻的育性。在采用酵母双杂交技术,筛选到与OsRacD相互作用的两种鸟苷酸解离抑制因子的编码基因... 【目的】OsRacD属于水稻小GTP结合蛋白Rho家族,是与光敏核不育水稻光周期育性转换相关的关键基因,功能之一是通过控制花粉管的延伸生长影响水稻的育性。在采用酵母双杂交技术,筛选到与OsRacD相互作用的两种鸟苷酸解离抑制因子的编码基因OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的基础上,为深入分析OsRhoGDIs的调控机制以及与OsRacD的关系,对其上游调控序列进行克隆和分析。【方法】采用PCR方法克隆了OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的上游调控序列,并利用网络工具对启动子顺式作用元件进行预测。【结果】两种OsRhoGDIs基因具有与激素应答、光调控及胁迫诱导应答相关元件,且一些元件相同或相似;OsRhoGDIs与OsRacD启动子元件的比较显示,都具有与花粉管萌发相关的多个元件。【结论】OsRhoGDIs的表达调控方式复杂,可能受多条信号通路的共同调控;同时也提示OsRhoGDIs与OsRacD基因可能通过协同表达控制光敏核不育水稻的育性。 展开更多
关键词 水稻 OsRhoGDI RHO osracd 顺式作用元件
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Cloning and Analysis of the Promoters of Two OsRhoGDIs Genes from Rice
13
作者 ZHANG Li-juan LIANG Wei-hong LIU Yue-xia LIU Xiao-fei HOU Cheng-qian BI Jia-jia 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2008年第7期789-795,共7页
OsRacD, belonging to rice (Oryza sativa L. ssp. japonica) Rho family of the small GTPases, is a pivotal gene involved in rice photoperiod fertility conversion of photoperiod sensitive genic male sterile rice which i... OsRacD, belonging to rice (Oryza sativa L. ssp. japonica) Rho family of the small GTPases, is a pivotal gene involved in rice photoperiod fertility conversion of photoperiod sensitive genic male sterile rice which influences the rice fertility via controlling the pollen tube growth. Using OsRacD as bait, two GDP dissociation inhibitor genes designated as OsRhoGDI1 and OsRhoGDI2 were screened by yeast two-hybrid system. To further study the regulation mechanism of OsRhoGDIs, and also the relationships between OsRhoGDIs and OsRacD, the upstream regulation sequences of OsRhoGDI1 and OsRhoGDI2 were cloned by PCR, and the cis-elements in the promoters were predicted using internet tools in this study. The results showed that there were several kinds of response elements, such as phytohormone response elements, lightregulated elements and adversity induced elements in the promoters of OsRhoGDIs, some of which were similar. Comparing with the promoter of OsRacD, several pollen tube germination related elements were found. On one hand, the expression and regulation mechanism of OsRhoGDIs were complex, they may be regulated by several signaling pathways commonly, and the regulation mechanisms were similar to some extent. On the other hand, it was suggested that the fertility of photoperiod sensitive genic male sterile rice may be controlled by the cooperative expression of OsRhoGDIs and OsRacD. 展开更多
关键词 RICE OsRhoGDIs RHO osracd cis-acting elements
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