马家柚花部特征及其访花昆虫种类调查

马家柚是江西优质水果品种,但自花授粉结实率低,需要异花传粉。昆虫是自然界中重要的传粉媒介,通过调查马家柚访花昆虫种类和了解马家柚的花部特征,可为使用昆虫实现马家柚授粉提供参考依据。本研究首先调查了马家柚的访花昆虫种类,其次对马家柚花不同形态参数进行测量,并采用蒸馏法提取马家柚鲜花的精油及利用GC-MS分析挥发油的组分。马家柚共有访花昆虫23种,隶属于5目12科,其中中华蜜蜂Apis cerana cerana是最常见的访花昆虫。马家柚的花为双性花,具白色花瓣,黄色花药和绿色柱头。花朵盛开后,花瓣分离,呈辐射对称。雄蕊围绕雌蕊着生,花丝28~47枚。雌蕊具近球形柱头,直径为5.10±0.88 mm,表面具乳白色液体。从马家柚花挥发油中共获得78种化合物,鉴定出其中73种,相对含量占99.40%。挥发油中萜类化合物种类最多,共有39种,相对含量为70.19%;其次是脂肪酸衍生物,有30种,相对含量为28.53%;苯环类化合物4种,相对含量为0.60%。含量较高的组分是法尼醇,α-橙花叔醇和芳樟醇,其含量分别是28.48%、12.85%、10.12%。马家柚访花昆虫种类多样,这可能与其花部结构特征及丰富多样的挥发物作为视觉和嗅觉信号吸引不同类型昆虫有关。

不同保鲜膜包装对蜜柚冷藏效果和货架品质的影响

为冷藏蜜柚选择较适宜的单果包装保鲜膜,提高保鲜效果,以微孔保鲜膜和不同厚度的聚乙烯(PE)保鲜膜对蜜柚(Citrus grandis (L.) Osbeck.cv.Miyou)进行单果包装,在5～6℃下冷藏4个月后在货架期条件下(约20℃)放置15d。在不同阶段分别测定各包装袋内氧气和二氧化碳体积分数,以及果实质量损失率、果肉硬度、果肉营养物质(可溶性固形物、可滴定酸和维生素C)含量、乙醇含量,并进行感官评价。微孔膜包装袋内具有较高的氧气体积分数(20%)和较低的二氧化碳体积分数(0.7%～1.4%)。在整个冷藏期和货架期内,微孔膜包装的蜜柚具有较高的质量损失率,但其营养物质含量较高、果肉硬度较低,而且乙醇含量最低,风味也最佳。15d货架期后,各处理的蜜柚的质量损失率和乙醇含量急剧升高,可溶性固形物、可滴定酸急剧下降。微孔膜包装对蜜柚的贮藏和保持货架期品质具有良好的效果。

沙田柚树体营养特性研究

研究梅州沙田柚（Citrus grandis Osbeck cv. Shatianyou）结果树叶片营养特点、树体中营养元素的季节性变化及叶片营养元素含量与果实品质的相关性。结果表明，营养叶中的各元素在不同的生育时期含量均有不同，树体内各营养元素间的关系存在着相互促进和相互抑制的复杂作用；叶片和果实中各元素含量的年周期变化规律不同，说明沙田柚在不同的生育时期对各元素的需求量及它们之间的需求比例有不同要求；结果还表明，沙田柚的树体养分含量在７－９月份对柚果品质影响最大，与果实全糖相关性最显著的是大量元素Ｃａ和Ｐ，其次是微量元素Ｂ、Ｃｕ、Ｍｏ、Ｚｎ等。

细胞壁代谢与琯溪蜜柚果实成熟过程汁胞粒化的关系

以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的琯溪蜜柚(Citrus grand is(L.) Osbeck‘Guanxi-miyou’)果实为材料,研究了果实成熟过程中汁胞粒化发生与细胞壁代谢的关系。结果表明:老龄树果实的汁胞粒化指数随着果实成熟而上升。在汁胞粒化发生过程中,汁胞维持较低的细胞壁降解酶[果胶甲酯酶(PE)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)、纤维素酶(Cx)]活性,保持较高的细胞壁物质(原果胶、纤维素、半纤维素)含量;尤其在汁胞粒化的起动阶段和加快阶段,纤维素、半纤维素含量极显著增加。相反,适龄树果实的汁胞粒化指数在果实成熟过程中变化不大,汁胞中细胞壁降解酶活性较高,促进原果胶、纤维素、半纤维素等细胞壁物质的降解,保持较低的细胞壁物质含量,使汁胞发育正常、柔软多汁。这说明PE、PG、Cx活性和原果胶、纤维素、半纤维素含量与琯溪蜜柚汁胞粒化密切相关。

琯溪蜜柚果实汁胞粒化过程中同工酶变化的研究

研究琯溪蜜柚果实粒化过程中过氧化物酶(POD)、超氧物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)同工酶的变化;通过授粉处理,以未授粉的自交果和授粉的杂交果的琯溪蜜柚果实汁胞为材料,采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行同工酶测定;琯溪蜜柚果实粒化过程中汁胞粒化指数随着果实成熟而上升,自交果汁胞粒化指数大于杂交果;自交果汁胞中出现的POD同工酶酶谱共分离出4条,SOD同工酶酶谱分离了6条,CAT同工酶酶谱有3条,相应的杂交果汁胞POD同工酶出现2条谱带、SOD同工酶显示4条谱带,过氧化氢酶同工酶没有观察到谱带;与琯溪蜜柚汁胞粒化关系密切的同工酶为POD、SOD同工酶。

沙田柚多倍体的获得与基因组原位杂交(GISH)分析

【目的】沙田柚是中国特有的柚类名优品种,但种子多,一般100粒左右。为创新三倍体无核品种积累育种材料,本研究通过实生筛选获得不同倍性沙田柚新种质,同时运用基因组原位杂交(GISH)技术分析天然与人工四倍体新种质的染色体组组成。【方法】随机采集沙田柚自然授粉果实,萌发种子检测其染色体数目获得倍性变异植株;以2x母株gDNA为探针,同获得的4x植株中期染色体杂交进行GISH分析。【结果】从6000粒沙田柚种子中共获得三倍体5株,四倍体9株;对沙田柚天然与人工四倍体新种质的基因组原位杂交(GISH)分析表明,天然四倍体中有7株为异源四倍体,2株为同源四倍体,秋水仙碱诱导获得的人工四倍体4株均为同源四倍体;初步观察显示;与二倍体相比,四倍体植株生长缓慢,树冠较小,枝短而密生,叶片浓绿,宽度变宽,叶形指数减小,叶片厚度增加明显。【结论】多倍体单胚柚新种质的获得为进一步选育无核品种奠定了基础,同时GISH分析证实了沙田柚雌性未减数配子的存在。

授粉处理对琯溪蜜柚粒化过程中果皮若干生理生化指标的影响

以琯溪蜜柚未授粉的自交果和授粉的杂交果果皮为材料,研究果实粒化过程中授粉处理对果皮细胞膜透性、膜脂过氧化作用等生理生化指标的影响.结果表明:随着果实成熟,自交果汁胞粒化指数和果皮相对电渗率逐渐上升,膜脂过氧化产物(MDA)逐渐积累,同时保持在较高水平;过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性较高;而还原型谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(AsA)含量则较低.相反,杂交果的汁胞粒化指数随着果实成熟变化不大,在果实成熟粒化过程中,其果皮相对电渗率较低,维持较低的POD、CAT酶活性和MDA含量,保持较高的AsA和GSH含量.因此,授粉处理能减轻琯溪蜜柚果实汁胞粒化;较大的果皮相对电渗率、较高的果皮MDA含量与琯溪蜜柚汁胞粒化有关.

大红甜橙遗传转化高效再生体系的建立

以大红甜橙的实生苗为试材,研究6-BA与IAA的不同浓度组合和Km不同浓度对大红甜橙不同外植体离体再生的影响和IBA的不同浓度对不定芽生根的影响,建立了高效的大红甜橙遗传转化再生体系.该体系的最佳条件是:1)以实生苗上胚轴为外植体.2)以MS无机盐+100mg/L肌醇+0.2mg/LV-B1+1mg/LV-B6+1mg/L烟酸+3%蔗糖+0.8%琼脂(pH5.8)+3mg/L6-BA为不定芽诱导培养基,在26℃黑暗条件下培养7d后,转移至光/暗周期16/8h的条件下诱导不定芽的分化(40d分化率达90%).以1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+2.0mg/LIBA为不定芽的生根培养基(40d生根率达94.7%).3)筛选遗传转化转化体的Km质量浓度为50mg/L.

盐胁迫下柚实生苗生长、矿质营养及离子吸收特性研究

以坪山柚为材料,对盐胁迫下实生苗生长、矿质营养及离子吸收特性进行了研究。结果表明,沙培30d,80～200mmol/L盐胁迫,随盐浓度提高,坪山柚实生苗株高、叶面积、地上部干重和根部干重明显降低。溶液培养8d,坪山柚实生苗地上部及根Na+、Cl-含量随盐浓度的增加而增加,根及地上部K+、Ca2+、Mg2+以及P和Mn含量下降,Fe、Zn、Cu含量的变化因器官而异。其中,地上部Fe含量对盐胁迫敏感,可作为柚耐盐性鉴定指标。40mmol/L盐胁迫,坪山柚地上部K+/Na+、Ca2+/Na+、Mg2+/Na+值均显著下降,且Mg2+/Na+值<1。在浓度≤120mmol/L盐胁迫下,坪山柚实生苗地上部K+/Na+值>1;浓度≥160mmol/L盐胁迫,K+/Na+值<1,这是坪山柚实生苗对盐胁迫的一种适应性反应。盐胁迫下,坪山柚实生苗根系对Na+吸收、运转效率比Cl-高。

文旦柚和下河蜜柚组织培养快速无性繁殖

对两种柚类的茎尖和幼嫩的茎段进行组织培养快速无性繁殖,研究结果表明:不同柚类的培养结果不同,文旦柚的繁殖系数大于蜜柚的,为386.2%;文旦柚不同外植体的培养结果是带腋芽的茎段的繁殖系数大于茎尖,差异达到极显著;茎段在附加激素的基本培养基MS上培养诱导形成不定芽,低浓度的奈乙酸(NAA)和6-苄基嘌昤(6-BA)对外植体的成活率没有显著影响,激素浓度升高则会显著影响外植体的成活率;培养基以MS添加6-BA0.5 mg/L和NAA 0.2 mg/L的培养效果最好,繁殖系数达到407.1%,与其它处理差异达到极显著水平;

沙田柚多倍体基因组AFLP分析

沙田柚性状优良却多核，通过多倍体选育获得无核或少核品种具有很高的价值。本研究运用AFLP技术分析沙田柚多倍体基因组的变化，以期为多倍化选育优良品种提供一定的理论依据。结果表明，多倍体沙田柚基因组存在大量片段的丢失，也有许多新的酶切位点出现，变异率在21％-29％之问。其中多个位点同时发生了相同变异，暗示着多倍体基因组的进化并不是一个随机事件，而这些变异与哪些表观遗传变异直接相关，还有待深入研究。

琯溪蜜柚果实成熟过程中汁胞粒化与活性氧代谢的关系

【目的】探讨琯溪蜜柚[Citrus grandis(L.)Osbeck cv.Guanximiyou]果实成熟过程中汁胞粒化与活性氧代谢的关系。【方法】以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的琯溪蜜柚果实为材料,研究成熟过程中果实汁胞MDA、H2O2、木质素含量,活性氧清除酶(POD、SOD、CAT)活性和内源抗氧化物质(AsA、GSH)含量的变化。【结果】与不易发生粒化的适龄树果实相比,易发生汁胞粒化的老龄树果实汁胞成熟过程中,汁胞粒化指数、H2O2、MDA和木质素含量增加,AsA和GSH含量减少,SOD活性前期减少后期增加,CAT活性增加,POD活性显著增加。【结论】琯溪蜜柚果实成熟过程中,活性氧代谢失调导致活性氧(H2O2)积累和POD活性的增强而促进木质素的合成,从而导致汁胞粒化的发生。

提高沙田柚茎尖嫁接成活率的研究

研究了可以影响沙田柚茎尖嫁接成活率的部分因素。结果表明 :当沙田柚接穗选择带 4个叶原基的茎尖、枳壳砧木选择黑暗培养 1 4d的实生苗或培养基中蔗糖浓度选择 7.5 %时各自的嫁接成活率较高。若在茎尖嫁接切口外缠绕 parafilm胶可令成活率明显增加。若在培养基中加入 GA3、6-BA和 IBA则明显抑制嫁接成活率。GA3、6-BA和 IBA处理接穗和砧木均可提高嫁接成活率 ,其中以 1 0 mg/L GA3处理效果最好 ,嫁接成活率可达 45 % ;6-BA和 IBA处理虽然也可提高嫁接成活率 ,但是同时又增加了接穗的脱落死亡率。

红肉脐橙果实发育过程中主要糖含量的变化

以气相色谱法测定了红肉脐橙(Citrus.sinensis (L) Osbeck cv.Cara Cara)果实发育过程中果肉和果皮的葡萄糖、果糖、蔗糖和总糖的含量变化,结果显示,红肉脐橙果肉中蔗糖主要在果实着色前积累,而葡萄糖和果糖主要于果实成熟期积累,成熟时果肉中葡萄糖、果糖和蔗糖含量的比例约为1∶1∶2,表明红肉脐橙果肉以积累蔗糖为主;果皮蔗糖含量也于果实着色前迅速增加,着色期和成熟期逐渐下降,而葡萄糖和果糖于着色期以较快的速度积累,成熟期维持在稳定而较高的水平,成熟时果皮葡萄糖、果糖和蔗糖含量的比例约为2∶2∶1,表明成熟红肉脐橙果皮以积累己糖为主。

沙田柚遗传转化再生体系的建立

以沙田柚的实生苗不同外植体为对象,进行了沙田柚遗传转化再生体系建立研究。研究结果表明:以实生苗上胚轴作为外植体,以MS无机盐+100mg/L肌醇+0.2mg/L维生素B1+1mg/L维生素B6+1mg/L烟酸+3%蔗糖+0.8%琼脂(pH5.8)+5mg/L6-BA为不定芽诱导培养基,暗培养7天后,转移至光/暗周期16/8h的条件下培养,不定芽的分化率高达91.1%;不定芽在1/2MS基本培养基+3%蔗糖+0.7%琼脂+1.5mg/LIBA+0.2%活性炭的生根培养基,生根率高达80%;以卡那霉素作选择剂时,选择浓度为50mg/L。

‘红肉脐橙’八氢番茄红素合成酶基因的克隆与原核表达

【目的】克隆、分析‘红肉脐橙’(Citrus sinensis Osbeckcv.Cara Cara)八氢番茄红素合成酶(phytoenesynthase,PSY)基因,并进行原核表达。【方法】以‘红肉脐橙’果实中分离的mRNA为模板,通过RT-PCR扩增到PSY cDNA片段,并分析其序列;利用PCR技术获得‘红肉脐橙’PSY cDNA的编码区全长,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+),获得重组质粒pET-CitPSY转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】‘红肉脐橙’PSY cDNA长1520bp,最大开放读码框为1308bp,可编码436个氨基酸,核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在75%和70%以上,并且发现‘红肉脐橙’PSY的N末端存在转运肽信号序列,成熟的PSY包含1个跨膜结构域。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY,Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应,分子量约为52kD。【结论】该研究为进一步开展柑橘果实色泽分子改良奠定了基础。

蒸馏法与溶剂萃取法提取金柚果皮精油成分的比较分析

采用蒸馏法和溶剂萃取法,提取梅州金柚(Citrus grandis Osbeck cv.)果皮精油,利用GC-MS联用技术测定其化学成分和质量分数,并对两种提取方法进行比较分析。蒸馏法和溶剂萃取法提取的柚皮精油经GC-MS分析,分别鉴定出15个和17个成分,分别占峰面积的99.01%和97.55%,两者共有成分有6个,主要成分均为柠檬烯,梅州金柚果皮可作为柠檬烯的重要资源。此外,溶剂萃取法提取的精油中,质量分数相对较高的9,12-四环辛二烯酸(0.62%)、蛇床子素(0.5%)和谷甾醇(0.5%),在有关金柚精油成分的研究中尚未见报道。其中蛇床子素有抗骨质疏松、抗病毒等药理活性,谷甾醇有降低血清胆固醇的作用。

红江橙体胚发生及影响因素的研究

红江橙花后４周的幼果，直径约１ｃｍ左右，这时期的胚珠最适于胚性愈伤组织的诱导。以ＭＴ为基本培养基，加上适当浓度的ＩＡＡ、ＢＡ和ＭＥ可显著提高胚性愈伤组织诱导率。体胚发生，以ＭＴ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ１－１＋ＢＡ（ＺＴ）１ｍｇ１－１培养基较好，能诱导产生正常体胚，且频率较高。胚性愈伤组织继代次数对体胚发生也有一定的影响，继代６次以内，胚性愈伤组织具有旺盛产生体胚能力；继代至第９次时，产生体胚的能力明显下降；至第１２代时，不能产生胚状体。成熟胚转换成小植株，以ＭＴ＋ＧＡ２ｍｇ１－１＋ＮＡＡ０．１ｍｇ１－１培养基成苗率最高。

盐胁迫下琯溪蜜柚苗木生理生化特性的变化研究

水培试验研究了不同浓度盐胁迫下琯溪蜜柚苗木生理生化特性的变化。结果表明,盐胁迫下溪蜜柚苗木根系活力、叶片相对含水量(RWC)、叶片细胞汁液pH、光合色素含量及氨基酸含量降低,大分子渗漏值及丙二醛(MDA)含量增加,且它们之间均呈显著和极显著相关性。琯溪蜜柚植株根系活力及叶片MDA含量对盐胁迫较敏感,根系活力下降可能是柚植株受盐胁迫后最早的伤害反应。