血清BGP、miR-17-92、sST2与CHD患者PCI术后预后的关系

目的探讨骨钙素(BGP)、微小RNA-17-92a(miR-17-92)可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)与冠心病(CHD)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后预后的关系。方法选取2020年6月至2022年6月南阳市第一人民医院收治并行PCI术的168例CHD患者作为研究组,另选取同期53例未行PCI的CHD患者作为对照组。比较两组患者的血清BGP、miR-17-92、sST2水平,研究组患者随访12个月,失访6例,依据预后情况分为预后不良组126例和预后良好组36例,采用多因素Logistic回归分析影响CHD患者PCI术后预后的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清BGP、miR-17-92、s ST2对预后不良的预测效能。结果两组患者的血清BGP比较差异无统计学意义(P>0.05),但研究组患者的血清miR-17-92、sST2分别为1.55±0.29、(53.48±10.84)ng/mL,明显高于对照组的1.41±0.30、(20.64±5.97)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者的miR-17-92、s ST2分别为1.59±0.29、(58.33±8.43)ng/mL,明显高于预后良好组的1.45±0.28、(52.15±6.86)ng/mL,而血清BGP水平为(23.06±3.84)ng/mL,明显低于预后良好组的(27.19±4.31)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,miR-17-92、sST2是CHD患者PCI术后预后的独立危险因素,而血清BGP是保护因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清BGP、miR-17-92、s ST2单独及联合检测预测CHD患者PCI术后预后的曲线下面积(AUC)分别为0.783、0.628、0.723、0.856,联合预测的AUC明显高于单独预测(Z=2.897、4.627、1.984,P<0.05)。结论血清miR-17-92、sST2均是CHD患者PCI术后预后的危险因素,BGP是保护因素,监测其变化对CHD患者PCI术后预后有一定预测价值。

骨钙素基因多态性与2型糖尿病糖、脂及骨代谢指标的相关性

目的探讨骨钙素(osteocalcin,OCN)基因启动子区RS1800247和RS1543297位点单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)与2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)葡萄糖糖、血脂谱及骨代谢指标的关系。方法根据骨密度的值将217名T2DM患者分为2组:糖尿病合并骨质疏松症(diabetic osteoporosis DO) 124例,糖尿病非骨质疏松症(Non-diabetic osteoporosis, NDO) 93例。用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术对OCN基因RS1800247和RS1543297位点进行多态性分析,比较不同基因型葡萄糖、血脂、骨代谢指标的差异。结果(1)所有研究对象RS1800247和RS1543297位点基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg定律,DO组和NDO组间RS1800247和RS1543297位点基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);(2) RS1800247位点TT基因型携带者稳态模型胰岛素分泌指数(homeostasis model assessment insulin secretion index HOMA-β)高于CT+CC基因型携带者(P <0.05);(3) RS1543297位点TT基因型携带者胰岛素敏感性指标(Insulin sensitivity index,ISI)高于CT+CC基因型患者,稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)低于CT+CC基因型患者;(4)未发现RS1800247、RS1543297不同基因型与T2DM骨代谢及脂代谢指标有相关性。结论 RS1800247位点可能与T2DM胰岛细胞β细胞功能相关,其中T等位基因与胰岛β细胞功能的保护性相关,C等位基因可作为预测胰岛β细胞功能降低的一项遗传标志。RS1543297位点可能与T2DM胰岛素敏感性相关,其中T等位基因与胰岛素敏感性正相关,C等位基因与胰岛素抵抗相关。显示OCN基因多态性与影响糖代谢的关键因素相关,提示骨组织可通过OCN参与机体葡萄糖稳态的调控。

中国妇女维生素D受体基因型与骨密度及骨钙素关系的研究

为探讨中国妇女维生素D受体（VDR）基因型与骨密度（BMD）及含钙素间的关系，笔者采用聚合酶链反应、限制性酶切技术和Southern杂交技术，对202名北京地区汉族妇女的VDR基因型进行了分析。另外，采用双能X线法测量BMD，并采用放免法测定骨钙素。采用协方差分析的方法对结果进行分析处理。结果发现：中国妇女VDR基因型分布显著不同于高加索人种；绝经后妇女中bb与aa基因型在股骨颈及大转子区呈对应较低的BMD值；未发现VDR基因型与骨钙素间相关。因此，中国妇女VDR基因型与BMD间有一定关联，但其对骨质疏松发病的预测价值还有待深入研究。

部分骨钙素启动子控制荧光素酶基因真核载体的构建及表达

目的 构建部分骨钙素启动子控制荧光素酶报告基因的真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc,转染细胞后检测报告基因对 rh BMP- 2的反应 ,以期用于 rh BMP活性的定量测定 .方法 用 PCR方法扩增骨钙素部分启动子 14 7bp,克隆入p GEM- 3zf(- )中 ,经酶切鉴定和序列分析正确后 ,亚克隆入能稳定高效表达荧光素酶的真核表达载体 pc DNA3- L uc中 ,构建真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc,然后分别将 pc DNA3-L uc和 pc DNA3- OCP- L uc转染细胞 ,并检测其对 rh BMP- 2的反应 .结果 成功构建了部分骨钙素启动子控制荧光素酶报告基因的真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc;转染细胞后其报告基因的基础活性较 pc DNA3- L uc大为降低 ,而且报告基因的表达与 rh BMP- 2剂量在一定范围内成线性正相关 .结论 真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc的报告基因表达具有特异性 ,可代替直接测定骨钙素用于 rh BMP- 2活性的定量测定研究 .

bFGF促进骨膜细胞成骨性生长的研究

目的研究bFGF对骨膜细胞的成骨性生长的影响。方法手术分离大鼠骨膜,用胰酶消化法分离骨膜细胞进行元代培养稳定传代后,选择第3～5代细胞随机分成两组;细胞同步化处理后,实验组用终浓度10ug/L的bFGF刺激细胞,对照组正常培养,72h后,用[3H]-TDR方法检测细胞的增殖状态,RT-PCR方法和Western blot方法检测成骨细胞骨钙素基因的表达。结果 10ug/L的bFGF处理细胞72h后,[3H]-TDR方法检测显示细胞DNA合成水平明显上调;而成骨细胞骨钙素基因在mRNA水平和蛋白水平的表达也明显上调。结论 bFGF能刺激骨膜细胞的成骨性生长。

局部应用降钙素基因相关肽对小鼠肩袖损伤后早期愈合的影响

背景:骨腱界面的损伤修复一直是骨科和运动医学领域里的一大难题,新生骨的形成有利于骨腱界面的愈合。降钙素基因相关肽在维持组织稳态和组织损伤后修复过程中发挥着非常重要的作用,但是其在骨腱界面损伤中的作用至今未见报道。目的:建立小鼠肩袖损伤模型,观察降钙素基因相关肽对损伤处成骨因子骨钙素表达的影响,评估其对小鼠肩袖损伤后早期愈合的作用。方法:建立小鼠冈上肌止点-肱骨损伤模型,随机分成2组:实验组术后当天经盂肱关节注入5nmol/kg降钙素基因相关肽,每周3次,共2周;对照组注入等量的生理盐水。术后4,6周安乐死动物获取肩袖损伤标本,行苏木精-伊红染色观察其组织病理变化,实时荧光定量PCR检测骨钙素mRNA的表达,免疫组织化学、免疫印迹实验观察骨钙素的蛋白表达水平,生物力学检测两组肩袖损伤标本的拉断载荷。结果与结论:术后4,6周实验组成骨因子骨钙素的mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05);与对照组比较,实验组术后4周有更多的纤维软骨生成,术后6周有更多的新生骨生成;实验组术后4周的力学拉断载荷比对照组轻微上升,但没有统计学差异(P>0.05);术后6周,实验组的力学拉断载荷比对照组高(P<0.05)。结果证实局部注射降钙素基因相关肽能提高损伤处骨钙素的表达及新生骨的形成,有利于肩袖损伤后早期愈合。

熊果酸干预骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化

背景:熊果酸可通过Wnt信号通路抑制破骨细胞增殖分化,对胶原诱导性关节炎模型大鼠有抗炎和骨保护作用,但是熊果酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、分化以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白表达的影响尚不明确。目的:探讨熊果酸对骨髓间充质干细胞增殖、分化及Wnt信号通路的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,不同浓度(1.0,2.5,5.0,10.0,20.0μmol/L)熊果酸作用骨髓间充质干细胞,以不含熊果酸的培养基为对照组,MTT法检测熊果酸对骨髓间充质干细胞增殖的影响。用含不同浓度(1.0,2.5,5.0μmol/L)熊果酸的成骨诱导液培养骨髓间充质干细胞,以不含熊果酸的成骨诱导液为对照组,在诱导后第7天和第14天采用ELISA法检测碱性磷酸酶活性和骨钙素水平,在诱导第14天采用RT-PCR检测成骨基因ALP、COL-I、OCN、OPN、RUNX2 mRNA表达水平,采用RT-PCR和Western blot法检测Wnt信号通路相关Wnt-3α、GSK-3β、β-catenin mRNA和蛋白表达。结果与结论:①不同浓度熊果酸均可促进骨髓间充质干细胞增殖,浓度为5.0μmol/L时增殖率最高;②骨髓间充质干细胞成骨诱导第7天和第14天时碱性磷酸酶活性和骨钙素水平均比对照组增高,差异有显著性意义(P<0.05),且诱导相同时间,随熊果酸浓度增加碱性磷酸酶活性增强,骨钙素水平升高(P<0.05);③诱导14d,熊果酸可促进骨髓间充质干细胞分化后成骨基因ALP、COL-I、OCN、OPN、RUNX2m RNA表达以及Wnt信号通路相关Wnt-3α、GSK-3β、β-cateninm RNA和蛋白表达,随熊果酸浓度增加其表达水平升高(P <0.05);④结果表明,熊果酸通过Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化。

体重指数影响骨钙素基因HindⅢ多态性与中国绝经前妇女空腹血糖间的关联

目的:考察骨钙素(BGP)Hind III基因多态性是否与中国绝经前妇女空腹血糖(FPG)变异间存在关联;检测BGP基因型和体重指数(BMI)间的关联是否可以部分地解释BGP基因型与FPG间的关联。方法:研究对象是328名中国绝经前妇女,年龄21岁以上[(33.2±5.9)岁],FPG值平均为4.92 mmol/L(标准差,0.81),采用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态(RFLP)法对所有研究对象的BGP Hind III位点进行基因分型。结果:BGP Hind III多态性与校正年龄的FPG以及未用年龄校正的FPG间均存在显著的关联(P值分别为0.028和0.041),且BGP基因可以解释3.32%的FPG变异。但BGP Hind III多态性与年龄和BMI校正的FPG间无显著关联(P=0.517)。此外,BGP Hind III多态性与未校正的BMI(P=0.002)或年龄校正的BMI(P=0.003)都有显著的关联,且BMI与未校正的FPG也存在显著相关(r=0.424,P<0.01),BMI可以解释20.15%的FPG变异。结论:BMI可影响BGP Hind III多态性与中国绝经前妇女FPG间的关联。该研究结果提示协变量如BMI在FPG的遗传关联研究中的重要性。

全反式维A酸与骨形态发生蛋白联合应用对不同鼠源细胞骨钙素及成骨相关基因表达的影响

目的探讨全反式维A酸(AT R A)与骨形态发生蛋白(B M Ps)单独或联合应用对小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)和大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的骨钙素(OCN)以及成骨相关基因ALP、OCN、Runx2表达的影响。方法传代培养MC3T3-E1细胞及BMSCs,分别经不同浓度细胞因子刺激培养后分为10个组:空白对照组、ATRA组、5ng/ml BMP2/7组、50ng/ml BMP2/7组、5ng/ml BMP2组、50ng/ml BMP2组、ATRA+5ng/ml BMP2/7组、ATRA+50ng/ml BMP2/7组、ATRA+5ng/mlBMP2组、ATRA+50ng/mlBMP2组,采用免疫荧光染色观察细胞形态,免疫酶联吸附实验(ELISA)检测两种细胞OCN的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测ALP、OCN、Runx2基因的表达。结果免疫荧光染色观察结果显示,MC3T3-E1及BMSCs细胞生长状态良好,结构完整。单独应用ATRA可明显抑制两种细胞(MC3T3-E1及BMSCs)的OCN表达,第7天尤为明显:MC3T3-E1细胞ATRA单独组[(20.97±0.31)ng/ml]明显低于空白对照组[(33.45±0.55)ng/ml],BMSCs细胞ATRA单独组[(9.90±0.16)ng/ml]也明显低于空白对照组[(14.30±0.53)ng/ml],差异均有统计学意义(P<0.05)。单独应用BMPs可浓度依赖性地促进细胞OCN表达,且BMP2/7促进作用更强,50ng/ml BMP2/7作用后MC3T3-E1细胞的OCN浓度为(47.13±0.59)ng/ml,BMSCs的OCN浓度为(49.92±0.53)ng/ml,50ng/ml BMP2/7能够完全拮抗ATRA对细胞OCN表达的抑制作用(P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示,单独应用ATRA可明显抑制MC3T3-E1细胞ALP、OCN基因的表达,但可促进Runx2基因的表达(P<0.05),单独应用BMPs呈浓度依赖性地促进MC3T3-E1细胞成骨相关基因的表达(P<0.05),ATRA可显著抑制BMPs对OCN基因表达的促进作用,但ATRA与50ng/ml BMP2/7可协同促进ALP基因的表达(P<0.05);单独应用ATRA第7天可显著促进BMSCsRunx2基因的表达,但可抑制ALP、OCN基因的表达(P<0.05),50ng/mlBMPs可显著促进BMSCsALP、Runx2基因的表达(P<0.05),50ng/mlBMP2/7可拮抗ATRA对ALP基因表达的抑制作用并促进其表达(P<0.05)。结论单独应用ATRA可抑制细胞OCN蛋白的表达,抑制细胞ALP、OCN基因的表达;BMP2/7可显著促进细胞OCN蛋白的表达,BMPs可促进成骨相关基因的表达;50ng/ml BMP2/7可完全拮抗ATRA对细胞的成骨抑制作用。

CRISPR/Cas 9介导的基质Gla蛋白基因敲除对破骨细胞分化的影响

目的利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术,构建基质Gla蛋白(MGP)基因敲除的RAW264.7巨噬细胞系,明确MGP基因在破骨细胞分化过程中的作用。方法利用在线软件分析并筛选出3个针对MGP基因外显子区的单链向导RNA(gRNA),人工合成gRNA寡核苷酸序列,并将其插入线性化的LentiCRISPRv2质粒中,构建成LentiCRISPRv2 MGP gRNA重组质粒。将重组质粒与psPAX2、VSVG包装质粒一同转染293 T细胞,包装并收集重组慢病毒,将其感染RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选得到稳定RAW264.7细胞系,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western Blot)验证MGP mRNA及蛋白表达水平。qPCR检测破骨细胞分化标志分子的表达情况。结果成功构建了LentiCRISPRv2 MGP gRNA重组质粒,成功包装了含有MGP gRNA的重组慢病毒,筛选得到了稳定低表达MGP的RAW264.7细胞系。qPCR及蛋白质印迹法检测显示,其MGP mRNA、蛋白表达显著性下调(P<0.05)。qPCR结果显示,最具有代表性的LentiCRISPRv2 MGP gRNA1细胞破骨标志分子Itgb3(2.29±0.17)、Acp5(2.86±0.15)、Ctsk(2.07±0.13)的mRNA水平均显著上调(P<0.05)。结论利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术成功构建了MGP基因敲除的RAW264.7细胞系,敲除MGP后RAW264.7细胞破骨分化能力增强。

聊城市汉族正常人血清骨钙素参考值的研究

建立聊城市汉族正常人血清骨钙素水平的参考值。利用化学发光免疫分析法对聊城市162例汉族体检健康者血清骨钙素(BGP)水平进行检测,检测范围0.2ng/ml^100ng/ml。结果聊城市汉族正常人血清骨钙素水平的参考值为5.21±0.73ng/ml。首次报道了聊城市汉族正常人血清骨钙素参考值,为骨病骨代谢研究提供一项新的量化指标依据。

瘦素对人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质相关基因表达的影响

目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达。实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达。结果 hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因。与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P <0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P <0.05)。3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P <0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P <0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P <0.05),于14 d达到峰值。结论 Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达。

补骨脂提取物对体外培养小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞分化的影响

目的：研究补骨脂提取物对体外培养新生小鼠颅骨MC3T3-E1细胞分化的影响。方法：以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型，将培养的MC3T3-E1小鼠成骨细胞分为4组：空白组，补骨脂提取物（含生药）0．02，0．2，2g·L^-1不同剂量组。检测细胞ALP，I型胶原蛋白的含量，采用real—time PCR测定补骨脂提取物对MC3T3一E1细胞ALP，I型胶原蛋白及骨钙素mRNA表达的影响。结果：补骨脂提取物生药剂量0．2g·L^-1，能提高MC3T3-E1细胞ALP的活性，促进I型胶原蛋白分泌。同时分别在7～14d对MC3T3-E1细胞ALP，以及在14～21d I型胶原蛋白、骨钙素mRNA表达有明显的促进作用。结论：中药补骨脂提取物能有效促进成骨细胞的分化，为研究中药补骨脂的作用机制提供参考。

孕酮从基因水平调节骨钙素的合成

目的 观察孕激素对离体成骨细胞骨钙素基因表达及其合成的影响。方法 胎鼠头盖骨成骨细胞在含有不同浓度孕酮的培养基中培养约２０ 天。培养不同时期的骨钙素ｍ Ｒ Ｎ Ａ 含量及骨钙素的生成量通过 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交及放免的方法测定。结果 孕酮刺激骨钙素基因表达及其合成。其对ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达的最大作用可达对照组的２ 倍以上。激素的作用呈时间及剂量依赖性。骨钙素ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达及其生成的增加见于培养的中、晚期阶段，提示孕激素对成熟的成骨细胞更具潜能。此外，所选用的４ 种浓度的孕酮以浓度为１０ － ６ ｍｏｌ／ Ｌ 时作用最明显。结论 孕酮从基因水平调节离体胎鼠成骨细胞骨钙素的生成，这种调节呈现时间及剂量依赖。

黄芪散对高糖作用下成骨细胞相关功能的影响

目的:观察黄芪散含药血清对高糖条件下成骨细胞功能的影响及与糖尿病性骨质疏松发病机制相关基因的影响,探讨黄芪散(HQS)对糖尿病性骨质疏松症的疗效机制。方法:选用健康清洁级5周龄Wistar大鼠10只,随机分为正常组和药物组。制备黄芪散含药血清和空白血清,选用健康清洁级新生大鼠乳鼠4只,体外以酶消化法分离培养新生乳鼠颅骨成骨细胞(Ob),行细胞计数(CCK-8)法测定高糖条件下(25.5 mmol·L^(-1))5%,10%,20%,30%含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖活性最佳血清浓度,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪散对成骨功能相关基因骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OC),碱性磷酸酶(ALP)和胰腺-骨骼相关基因骨保护素(OPG),叉头转录因子1(Fox O1)表达的影响。结果:10%和30%血清浓度组细胞增殖较空白组有明显升高(P<0.05);20%血清浓度组较空白组有显著升高(P<0.01)。与空白组比较,5%浓度条件下,OPN,OPG mRNA表达明显下调(P<0.05);10%浓度条件下,OC,ALP,OPN mRNA表达明显上调(P<0.05,P<0.01);OPG,Fox O1 mRNA较空白组表达显著下调(P<0.01)。20%浓度和10%浓度条件差异性一致,OPN,OPG,Fox O1 mRNA影响趋势较10%浓度药物血清组更明显。20%浓度血清条件下,与空白组比较,OC和OPN蛋白表达显著上调(P<0.01),OPG蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:黄芪散对糖尿病性骨质疏松的疗效机制可能与其促进高糖作用下成骨细胞增殖作用有关,与下调胰腺-骨骼相关基因OPG,Fox O1表达有关。

强骨抗萎方对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响

目的 探讨复方强骨抗萎方对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响 ,拟揭示该方对抗骨丢失的分子生物学机制。 方法 分离乳鼠颅骨成骨细胞 ,体外培养后 ,分为正常对照、失重模型、强骨抗萎方大剂量 ( 2 .0 % )、中剂量 ( 1.0 % )和小剂量 ( 0 .5 % ) 5组。置回旋器 ,30r/min ,连续回旋 6 0h模拟失重 ,观察该方对回旋 12h、36h和 6 0h时大鼠成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)和骨钙素(BGP)生成及ALP基因转录水平 (mRNA)的影响。 结果 与正常对照组比较 ,模型组成骨细胞在回旋 12h、36h和 6 0h不同时间点的细胞培养液中的ALP活性均明显降低 ,其中 12h和 6 0h时差异显著 (P <0 .0 5 ) ;且ALPmRNA表达低微 ;BGP活性均减低 ,6 0h时差异显著 (P <0 .0 5 )。与模型组比较 ,中药复方不同剂量组于回旋不同时间点细胞培养液中的ALP活性均有不同程度升高 (P <0 .0 5 ) ;ALPmRNA表达活性也较高 ;但BGP活性无明显变化。 结论 该方能改善模拟失重条件下成骨细胞的功能 ,缓解其分化抑制状态 ,促进骨基质的形成和成熟。

氯原酸对成骨细胞Ⅰ型胶原及骨钙蛋白基因表达的影响

为了探讨陆英作为骨折常用中草药对成骨细胞的影响和相关机理。以陆英提取物氯原酸(chlorogenic acid,简称CHA)对成骨细胞的作用为研究模型,通过提取纯化获得原代成骨细胞,并经细胞活性观察、组织化学染色及荧光定量PCR检测技术,分别对CHA作用于成骨细胞后,检测成骨细胞活性及CHA对成骨细胞生长及Ⅰ型胶原及骨钙蛋白基因表达的影响。结果表明:10μmol/L,100μmol/L CHA能促进成骨细胞钙化结节形成,且能促进I型胶原基因持续增长;在培养第3d时,CHA对骨钙蛋白的表达具有促进作用。陆英有效成分氯原酸能明显增强成骨细胞I型胶原蛋白和骨钙蛋白基因的表达,合成和分泌骨基质,具有一定的成骨活性。

孕激素对成骨细胞增殖和分化的影响

目的 观察孕酮和左炔诺孕酮对正常妇女成骨细胞和成骨肉瘤MG 6 3细胞增殖和分化的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝法 ,检测应用不同浓度孕酮及左炔诺孕酮刺激上述两种成骨细胞增殖的情况 ;并采用半定量RT PCR及免疫组化法 ,测定c fos、c jun基因及其蛋白和骨钙素mRNA表达。结果 以浓度为 0mol/L的孕酮和左炔诺孕酮为对照 ,10 -10 、10 -8、10 -6mol/L孕酮分别增加人成骨细胞及MG 6 3细胞增殖达 9 8%、2 3 0 %、32 8%及 7 8%、15 6 %、2 1 8% ;10 -10 、10 -8、10 -6mol/L左炔诺孕酮分别增加人成骨细胞及MG 6 3细胞增殖达 12 5 %、2 1 9%、32 8%及9 6 %、14 4 %、2 3 0 % ;孕酮及左炔诺孕酮促进两种成骨细胞c fos、c jun基因及其蛋白的表达 ,表达呈剂量依赖性 ;10 -10 、10 -8、10 -6mol/L孕酮和左炔诺孕酮增加人成骨细胞骨钙素mRNA表达分别为 12 2 %、2 3 7%、4 5 5 %及 18 6 %、32 1%、6 0 3% ;孕酮和左炔诺孕酮对MG 6 3细胞骨钙素mRNA的表达无影响。结论 孕酮和左炔诺孕酮可刺激成骨细胞增殖 ,增加c fos、c jun基因及其蛋白的表达 。

骨肉瘤中cbfa1基因表达与临床因素的相关性研究

目的 cbfa1 基因是一种结合在Osteocalcin 启动子上并能调节其在成骨细胞中表达的转录因子, 在成骨细胞的分化和成熟中起着重要的作用。由于cbfa1 基因在成骨细胞分化过程中所起的重要作用, 研究骨肉瘤中cbfa1 的表达有重要的意义。方法 应用Southern blot 法和RT- PCR 技术对43 例骨肉瘤标本和3 株骨肉瘤细胞系(SaOS- 2 、HOS 和U - 2) 中cbfa1 基因的结构和表达进行了研究。结果 在43 例骨肉瘤标本中未发现cbfa1 基因重排、缺失或扩增的现象。43 例骨肉瘤标本中27 例(63 % ) 及3 株骨肉瘤细胞检出cbfa1 的m RNA。但cbfa1 的表达水平,在大多数的骨肉瘤细胞中低于正常淋巴细胞的表达。Osteocalcin (cbfa1 的靶基因) 的表达, 在大多数骨肉瘤标本中与cbfa1 基因的表达是平行的。cbfa1 转录水平和患者生存率之间在统计学上有明显的相关性。结论 肿瘤中有cbfa1 基因表达的患者比缺乏这种基因表达的患者有更长的生存期。cbfa1

儿童钙代谢相关激素与ER及VDR基因多态性关系

目的探讨儿童钙代谢相关激素与雌激素受体(ER)及维生素D受体(VDR)基因多态性的关系。方法选取河南省某地140名8～12岁中国汉族健康儿童作为研究对象,抽取空腹外周血,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测ERα基因PvuⅡ,XbaⅠ以及VDR基因FokⅠ多态性;放免法测定血清骨钙素(OC)和降钙素(CT)浓度。结果携带ER PvuⅡ3种基因型儿童血清OC浓度分别为PP 5.82μg/L,Pp5.01μg/L,pp 6.21μg/L,差异有统计学意义(P<0.05),携带纯合pp基因型儿童血清OC浓度高于另外2组儿童;血清Ca、CT浓度在ER PvuⅡ各基因型间差异无统计学意义(P>0.05);携带VDR FokⅠ不同基因型儿童血清Ca浓度分别为ff2.71 mmol/L,Ff 2.39 mmol/L,FF 2.48 mmol/L,携带ff基因型儿童血清Ca浓度高于其余2种基因型儿童,差异有统计学意义(P<0.05);血清CT和OC浓度在FokⅠ各基因型差异无统计学意义(P>0.05);结论 ER PvuⅡ不同基因型可能影响血清OC浓度;血清钙浓度可能受VDR基因FokⅠ多态性的影响。