基础骨生物力学(一)

基础骨生物力学（一）崔伟，刘成林骨生物力学是生物力学的分支，它以工程力学的理论为基础，研究骨组织在外界作用下的力学特性和骨在受力后的生物学效应，是对骨质量进行评定的一种可靠方法。虽然骨密度的测定常常被用于评定骨脆性和对骨折危险性进行预测，但大量的动物...

卵巢切除大鼠椎体松质骨中IL-1β、IL-6免疫组织化学研究

卵巢切除大鼠椎体松质骨中ＩＬ－１β、ＩＬ－６免疫组织化学研究韩利华，王全平，刘建，朱潇玲绝经后骨质疏松症的发病机制目前尚不清楚，研究发现ＩＬ－１、ＩＬ－６等细胞因子参与骨代谢调节。细胞因子主要通过自分泌与旁分泌的方式参与调控骨的吸收与形成，而对骨质疏...

两种破骨细胞培养方法的比较及其吸收骨质的动态观察

目的:比较分析破骨细胞(osteoclast,OC)体外分离培养的方法,并动态观察其形态、分化及功能,为进一步探讨药物对OC性骨吸收的作用奠定基础。方法:采用两种OC的培养方法,即从新生24h的兔长干骨骨髓腔内壁机械分离成熟OC和1,25(OH)2维生素D3诱导鼠骨髓细胞形成破骨样细胞(osteoclastlikecell,OLC)的方法对获得的OC进行形态学和功能观察。结果:倒置显微镜下观察,OC是一种多核巨细胞,有伪足并借助伪足的凹凸伸缩而变化形态、运动行走;HE染色均可见OC多核、胞浆有空泡;特异性抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistanacidphosphatase,TRAP)染色可见OC胞浆阳性,呈酒红色,多核。体外OC与骨片共同培养形成骨吸收陷窝,且在培养的7d内陷窝数目和面积逐渐增大。1,25(OH)2维生素D3诱导鼠骨髓细胞形成OLC,其形态结构特征与成熟OC相同,诱导出的破骨样细胞数目多于机械分离的方法,但每个细胞胞核数目总体上少于机械分离的方法,而且胞核多位于细胞周边,在骨片上形成的陷窝也较小而浅;培养液上清中的钙离子含量和酸性磷酸酶(acidphosphatase,ACP)含量在培养的1～12d内随时间逐渐增加。结论:针对不同实验目的可以采用不同的分离培养OC方法。从骨髓腔内壁机械分离培养的方法可获得骨吸收功能较活跃的OC。1,25(OH)2维生素D3诱导鼠骨髓细胞形成的OLC数量较多,适于对OC分化过程的研究。

鸡破骨细胞分离培养方法的建立

为了寻找一种获得大量、纯化、有活力的破骨细胞的方法，我们对已经建立的兔破骨细胞体外分离培养方法的基础上加以改进。利用冲洗的方法，从２８天的鸡的长骨中得到细胞团１破骨细胞后，又对鸡的长骨相继进行胶原酶和胰蛋白酶的消化，得到细胞团２和细胞团３破骨细胞。将这些分离的细胞与盖玻片或骨磨片共同培养，通过相差显微镜观察到：这些分离的多核巨细胞能够运动，并能在骨磨片上形成吸收陷窝。另外，这些细胞对酸性磷酸酶染色呈阳性反应，而酸性磷酸酶是鉴别破骨细胞的标志。表明此分离培养鸡破骨细胞的实验技术是成功的。通过此方法获得的鸡破骨细胞比用以往方法获得的兔破骨细胞量多，且活力强。本方法的建立，为进一步研究骨吸收机理奠定了基础。

两种方法培养大鼠破骨细胞的比较研究

目的比较分析直接分离培养的Wistar大鼠破骨细胞(osteoclast,OC)和诱导培养的Wistar大鼠破骨样细胞(osteoclast-likecell,OLC)的形态和功能的差异,为体外药物干预试验奠定基础。方法采用两种培养法,即从新生(24h内)的Wistar大鼠的四肢长骨骨髓腔内壁机械分离成熟OC直接培养和10-8mol/L的1,25(OH)2D3诱导4周龄Wistar大鼠骨髓单核细胞形成OLC的方法,对获得的OC/OLC进行形态和破骨功能观察。结果两种方法都培养出了抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistantacidphosphatase,TRAP)染色阳性的多核细胞,诱导法获得的破骨细胞数量较多(P<0.05)。成熟OC与诱导获得的OLC形态特征相似,但后者在骨片上形成的陷窝较小而浅。结论直接分离培养法可获得骨吸收功能较活跃的OC,但数目较少,适合骨吸收功能分析、破骨迁移黏附、凋亡研究及单细胞分子生物学研究。1,25(OH)2D3诱导鼠骨髓单核细胞形成的OLC数量较多,但骨吸收功能较差,适合用于破骨细胞分化发育过程的研究。

骨疏康对1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养的破骨细胞影响

目的:观察骨疏康对1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养破骨细胞的影响。方法:雌性Wistar大鼠60只,2.5～3月龄,按照体重随机分为正常组(n=24)和1型糖尿病组(n=36)两大组,正常组又分为正常对照组(n=8)、正常假手术组(n=8)和正常双侧卵巢切除组(n=8);1型糖尿病组又分为糖尿病对照组(n=12)、糖尿病假手术组(n=12)和糖尿病双侧卵巢切除组(n=12)。单剂量腹腔注射链脲菌素(柠檬酸钠缓冲液制成2％溶液) 60 mg·kg-1制备1型糖尿病大鼠模型;无菌条件下切除大鼠双侧卵巢制备骨质疏松模型。在造模后第0,2,4,8周末时用sRANKL和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导大鼠骨髓进行体外破骨细胞培养,并观察骨疏康(20μg·mL-1)的影响。结果:糖尿病对照组破骨细胞明显高于对照组(P<0．01),糖尿病双侧卵巢切除组破骨细胞明显高于对照组(P<0．01),糖尿病骨质疏松组破骨细胞明显高于糖尿病对照组和正常双侧卵巢切除组(P<0．01)。经20μg·mL-1骨疏康干预后,各组破骨细胞数均明显减少(P<0．01)。结论:骨疏康明显抑制1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养的破骨细胞生成。

体外培养破骨细胞的功能观察

观察破骨细胞在离体状态下的骨吸收功能。新鲜牛皮质骨经锯式切片机横切成５０μｍ厚０．５×０．５ｃｍ大小骨片。参照已建立的破骨细胞分离培养方法，从新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠四肢长骨分离破骨细胞，培养于２．５ｃｍ细胞培养皿内或上述骨片上，相差倒置显微镜或扫描电镜观察，可见培养的细胞具有典型破骨细胞的形态特点，接种子骨片上的破骨细胞分别培养１、３、５、７天，扫描电镜观察，可见破骨细胞能在骨片表面形成吸收陷窝，其形态多样，深浅不一，边界清晰，底面粗糙，而且随培养时间延长，陷窝扩大，数量增多。结论，破骨细胞在体外培养条件下具有良好的骨吸收功能，可进行药物干预的研究。

密骨胶囊含药血清对骨吸收陷窝面积和深度的影响

目的 :探讨密骨胶囊含药血清对破骨细胞骨吸收陷窝面积和深度的影响。方法 :自 1d龄SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞 ,接种于象牙薄片底物上 ,设密骨胶囊组、西药倍美力组和生理盐水对照组 ,同等条件下制备含药血清和对照血清 ,以 30 %的浓度添加于培养体系中 ;第 7天终止培养 ,经甲苯胺蓝染色 ,每组随机拍摄照片各 6张 ,采用计算机图像分析系统测算陷窝与背景面积的比值 ,以及陷窝的平均光密度值。结果 :对照组、倍美力组和密骨胶囊组陷窝面积比值分别为 0 2 75± 0 0 6 2、0 0 96± 0 0 10和 0 0 6 5± 0 0 13,密骨胶囊和倍美力含药血清抑制陷窝面积增大的作用非常显著 (P <0 .0 1) ;对照组、倍美力组和密骨胶囊组陷窝平均光密度值分别为 1 6 4 3± 0 35 6、1 0 88± 0 4 4 9和 0 6 35± 0 345 ,密骨胶囊含药血清可明显抑制陷窝的加深 (P <0 .0 1) ,而倍美力含药血清的作用不明显 (P >0 .0 5 )。结论 :密骨胶囊含药血清能够明显抑制象牙薄片上骨吸收陷窝面积的增大和深度的加深 ,这可能是其提高骨质量的机制之一。

正常和双侧卵巢切除大鼠体外骨髓培养破骨细胞凋亡变化的研究

目的观察正常和双侧卵巢切除(Ovariectomized,OVX)大鼠体外骨髓破骨细胞样细胞(Osteoclastic like cell,OLC)凋亡变化。方法24只Wistar大鼠,分别在术后2 w、1、2、3、5和6个月取大鼠骨髓,24孔培养板上培养7 d后观察OLC凋亡变化。结果 OVX大鼠体外OLC凋亡百分数明显低于正常对照组(P<0.05)。结论 OVX大鼠因雌激素明显降低,破骨细胞凋亡减少,骨吸收增加,导致骨质疏松发生。

阿仑膦酸钠对OVX大鼠体外培养的破骨细胞的作用

目的研究第三代双膦酸盐类药物阿仑膦酸钠(alendronate,固邦)对体外培养的破骨细胞的作用。方法建立骨质疏松大鼠模型,于0、2、4、8w进行体外骨髓破骨细胞样细胞(OLC)的培养,并进行阿仑膦酸钠干预,观察OLC数量和形态的变化。结果OVX组大鼠OLC数量高于C组和Sham组;在所有组中,阿仑膦酸钠均能使OLC显著减少(P<0.01)。结论大鼠去卵巢后OLC形成增加;阿仑膦酸钠能显著抑制OVX大鼠体外培养的OLC的形成。

组织块法与传统破骨细胞培养方法对骨吸收功能的比较研究

目的:比较组织块法与传统破骨细胞培养方法对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:用组织块法与传统破骨细胞培养方法进行破骨细胞培养,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定破骨细胞,超声去除骨片上细胞后,骨片经1%甲苯胺蓝染色,光镜下观察骨片上吸收陷窝。根据骨片上陷窝数目、面积以及深度定量比较两组破骨细胞骨吸收功能。结果:吸收陷窝经甲苯胺蓝染色后光镜下可清晰识别,组织块法在骨片上的吸收陷窝数目比传统法明显少,而且骨片上陷窝面积及深度也比传统法小而浅(P<0.05)。结论:组织块法培养的破骨细胞无论从数量上还是从功能上均没有传统法培养的好。数量大的成骨细胞对共培养破骨细胞骨吸收功能起到负面作用。

大鼠骨肉瘤细胞吸收骨质实验模型的建立与应用初探

采用液体闪烁计数、光镜、电镜等技术,分别研究骨肉瘤细胞-骨培养体系中的骨代谢和形态变化,建立了骨肉瘤细胞吸收骨质的体外实验模型,应用该模型证实了高浓度的羟乙二磷酸(P<0.01)、小鼠表皮生长因子(P<0.05)及骨肉瘤细胞培养基上清液(P<0.05)能促进骨质吸收;而低浓度羟乙二磷酸可保护骨质(P<0.05)。上述各组实验中,未见破骨细胞的增生性变化,但见骨肉瘤细胞的形态学变化,故认为骨肉瘤细胞可直接破坏骨质。

凋亡破骨细胞的拉伸应变(英文)

背景:力学应变在骨重建中起重要作用。然而,力学应变是否影响破骨细胞的凋亡仍不清楚。目的:观察力学应变对体外培养破骨细胞凋亡的影响。方法:对小鼠单核细胞RAW264.7采用巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子诱导,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨吸收实验确定成功诱导出了破骨细胞。实验共分为3组,对诱导的破骨细胞分别施加0(对照组),2500和5000με的基底拉伸应变3d,1h/次,1次/d。结果与结论:与对照组相比,生理强度载荷2500με阻止了破骨细胞的凋亡和线粒体膜电位的下降。但是,病理强度载荷5000με对破骨细胞的凋亡和线粒体膜电位没有影响。

破骨细胞体外分离培养及其骨吸收活动的观察

目的 建立大鼠破骨细胞体外分离培养方法,为体外研究破骨细胞骨吸收机理奠定基础。方法 采用出生24h内的Wister大鼠,从其四肢长骨中分离出破骨细胞,与盖玻片、骨磨片共同培养,观察破骨细胞的形态结构及体外骨吸收活性。结果 相差显微镜及光镜观察到分离的细胞含多个核,能够移动,胞浆有伪足样突起,这些细胞用目前公认的鉴定破骨细胞的标志—抗酒石酸酸性磷酸酶染色呈阳性反应,扫描电镜观察到这些细胞能在骨片上形成典型的骨吸收陷窝。结论 用此方法分离培养的细胞为具有骨吸收活性的破骨细胞。

关于举办“第三届国际骨质疏松研讨会”准备工作意见的通知

关于举办“第三届国际骨质疏松研讨会”准备工作意见的通知各省、市、自治区老年学学会骨质疏松委员会、筹备组：中国老年学学会骨质疏松委员会二届委员、中国骨质疏松杂志编委：为了加强国际学术交流与合作，促进我国骨质疏松的防治和研究，在中国老年学学会、中国老龄协...

黄芪三仙汤干预成骨细胞护骨素及护骨素配体的表达

背景:长期临床研究表明黄芪三仙汤对骨质疏松症有一定的治疗作用,基础实验研究也表明黄芪三仙汤能改善实验动物的生物力学指标。在此基础上实验拟从细胞分子水平上探讨黄芪三仙汤对成骨细胞的相关作用。目的:观察黄芪三仙汤对体外培养成骨细胞护骨素、护骨素配体基因调节的作用,探讨黄芪三仙汤治疗骨质疏松的作用机制。方法:制备黄芪三仙汤和仙灵骨葆胶囊含药血清及空白血清,对体外培养新生SD大鼠成骨细胞进行干预,应用细胞形态观察、MTT、Western blot分析法及蛋白浓度测定法,观察各含药血清对体外培养成骨细胞的增殖及成骨细胞护骨素、护骨素配体表达的影响。结果与结论:经药物干预后成骨细胞变为长梭形、条索状,融合成片,分界较为模糊,细胞生长较密集。黄芪三仙汤可明显促进成骨细胞护骨素蛋白浓度的提高(P<0.01),同时也提高了护骨素配体蛋白浓度(P<0.01),而护骨素/护骨素配体浓度比例水平明显升高(P<0.01)。结果可见黄芪三仙汤可能是通过调节成骨细胞分化调控因子护骨素、护骨素配体的表达来调节成骨细胞的增长,从而实现其对骨质疏松症的治疗作用。

骨碎补提取液对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用

目的 :研究骨碎补对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用。方法 :体外分离出破骨细胞 ,与牛骨磨片共同培养 ,通过 Leica图像分析仪观察破骨细胞所形成骨吸收陷窝的数目与面积 ,反映破骨细胞性骨吸收情况。结果用 SPSS软件包分析。结果 :与空白血清组相比 ,2 0 %骨碎补提取液使骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 ) μm2减少到 ( 1 3 .2 0± 1 .2 6)个 /片和 ( 683 .1 7± 3 41 .3 8) μm2 ,空白血清组与 2 0 %骨碎补血清组比较差异具有显著性意义 ( P<0 .0 1 ) ,而 1 0 %低浓度骨碎补提取液对破骨细胞在骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 )μm2 减少到 ( 2 4.1 5±1 .1 2 )个 /片和 ( 82 3 .5 2± 5 2 7.1 8) μm2 ,二者比较无显著性意义 ( P>0 .0 5 )。结论 :骨碎补提取液对破骨细胞性骨吸收有抑制作用 。

中国老年学学会骨质疏松委员会二届委员会会议纪要

中国老年学学会骨质疏松委员会二届委员会会议纪要１９９７年１０月７日中国老年学学会骨质疏松委员会二届二次委员会议、各省、市、自治区骨质疏松委员会（筹）主任委员和秘书长工作会议及中国骨质疏松杂志编委会工作会议于１９９７年１０月７日在黄山市白云山庄召开。有...