响应面法同步优化褶牡蛎中蛋白和多糖提取工艺

于单因素试验基础上,以牡蛎蛋白和多糖提取率(Y1和Y2)为响应值,利用响应面法对牡蛎中蛋白和多糖提取工艺进行同步优化。试验结果表明,液料比(X1)、提取时间(X2)、提取温度(X3)及pH值(X4)4个因素对Y1和Y2均有显著影响。由响应面三维及等高线叠加图得到牡蛎蛋白和多糖提取率均高的最佳提取工艺参数:液料比33∶1,提取时间2.6h,提取温度40℃,pH值4.2。在此条件下,验证试验得到牡蛎蛋白提取率为21.15%,牡蛎多糖提取率为12.07%,与数学模型预测值非常接近。可见,响应面同步优化法对牡蛎蛋白和多糖提取条件进行同步优化合理可行。

僧帽牡蛎保鲜过程中游离氨基酸、牛磺酸的变化

探讨了僧帽牡蛎在低温贮藏保鲜过程中鲜度指标及游离氨基酸、牛磺酸等的变化。实验表明，在０～２℃及３～５℃的贮藏中挥发性盐基氮呈平缓上升趋势，贮藏１５天分别为１５．２ｍｇ／１００ｇ和２０．６ｍｇ／１００ｇ；而在６～８℃下贮藏，挥发性盐基氮变化相对较快，１５天后高达２６．８ｍｇ／１００ｇ。在萃取液中，牛磺酸的含量最高，其在贮藏中略有下降，但基本上在３５７ｍｇ／１００ｇ～３８７ｍｇ／１００ｇ范围内波动；游离氨基酸的含量较高的为丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸等，丝氨酸、精氨酸、赖氨酸次之，其余氨基酸初始含量相对较低，其含量的变化在不同的贮藏温度下快慢不一样，但各自呈现出一定的规律性。

牡蛎净化技术的研究

使用1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L三种不同浓度的臭氧水对新鲜牡蛎进行微生物净化处理,浸泡时间分别为3 min、6 min、9min.然后将牡蛎分装于无菌的保鲜袋内,封口后置于0～4℃冰箱中贮藏8 d,观察其对牡蛎的保鲜效果.结果表明:臭氧对牡蛎中的细菌有一定的杀菌效果,较高浓度和较长时间的处理杀菌效果较好.综合分析检测到的各个处理牡蛎的T-VBN值、细菌总数值、大肠菌群数卫生指标,使用浓度为3 mg/L的臭氧水浸泡处理牡蛎9 min后对其保鲜效果较好,其在浸泡处理后对牡蛎中的细菌总数的杀菌效果达到了95.9%,可使牡蛎保质到6 d,比对照组延长了4 d保质期,并且对牡蛎的感官质量没有影响.因此,臭氧可以有效地应用于牡蛎的净化保鲜上.

褶牡蛎金属硫蛋白基因的克隆及组织表达分析

金属硫蛋白是一类广泛存在于生物体中的低分子质量、富含半胱氨酸、高度诱导性的内源金属结合蛋白。采用RACE技术,首次获得了褶牡蛎金属硫蛋白基因的全长cDNA序列。该序列全长500bp,由长54bp的5′非翻译区,122bp的3′非翻译区和324bp的开放阅读框组成,共编码107个氨基酸。该蛋白序列中半胱氨酸含量丰富(28%),不含芳香族氨基酸,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构,存在软体动物等无脊椎动物金属硫蛋白特征序列,是金属硫蛋白家族成员。荧光定量PCR法,测定褶牡蛎体内3种组织(内脏团、鳃、外套膜)中金属硫蛋白mRNA组织特异性表达以及重金属(Cd^(2+)、Zn^(2+))慢毒胁迫效应。结果表明,金属硫蛋白mRNA在褶牡蛎内脏团中相对表达量最高;褶牡蛎内脏团金属硫蛋白mRNA表达量与重金属胁迫时间呈现出一定时间效应关系,从胁迫开始至7d表现为正调,而7~10d开始为负调,Cd^(2+)胁迫和Zn^(2+)联合Cd^(2+)胁迫下金属硫蛋白mRNA表达量显著增加,最大表达量为对照组的42.5倍(Cd),Zn^(2+)联合Cd^(2+)胁迫表现为拮抗作用。本试验结果为生产实践上在多种重金属污染下应用金属硫蛋白作为生物标志物监测水域污染状况,保护水生生态环境提供了依据。

象山港褶牡蛎的生殖周期研究

首次报道了褶牡蛎雌、雄生殖细胞的发生、生殖腺发育分期和发育周期等组织学方面的研究工作。褶牡蛎雌性生殖细胞的发生分为卵原细胞期、无卵黄期、卵黄形成早期、卵黄形成后期和成熟期。雄性生殖细胞的发生为精原细胞期、初级精母细胞期、次级粮母细胞期、精细胞期和精子期。褶牡蛎生殖腺发育分为休止期（从第一年１１月至翌年２月中旬）、增殖期（２月中旬至４月中旬）、生长期（４月中旬至５月中旬）、成熟期（５月中旬至１０月上旬）和排放期（５月下旬至１０月下旬）五期。褶牡蛎为一年一个生殖周期（一足龄褶牡蛎的生殖腺已经成熟），生殖细胞分批成熟、分批排放，估计象山港整个褶牡蛎群体从５月下旬至１０月，每月排放一次，大约总共可排放５－６次。褶牡蛎在生殖期间雌雄个体的比例（性比）接近１：１，也发现极少数个体是雌雄同体。

市售三种食用贝类可培养细菌多样性研究

为了解厦门市售三种食用贝类中可培养细菌的多样性,用自制培养基培养牡蛎、缢蛏、疣荔枝螺样品中的细菌,并根据16S rDNA测序结果,对所分离的细菌进行鉴定并进行系统发育分析。研究结果显示:从牡蛎中分离得到的35株细菌分属14个种,从缢蛏中分离得到的32株细菌分属16个种,从疣荔枝螺中分离得到的31株细菌分属7个种。结果表明市售牡蛎、缢蛏、疣荔枝螺体内含有较为丰富的细菌种类,而且分离得到的细菌(如解鸟氨酸拉乌尔菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等)大多数具有致病性,对食用人群具有潜在威胁,不建议直接生食或食用加工不当的贝类产品。

高效液相色谱法测定牡蛎中牛磺酸含量

目的:通过优化流动相组成,制定牛磺酸的标准工作曲线,评价牛磺酸测定的稳定性及准确性。测定不同条件下提取的牡蛎牛磺酸样品,建立并评价高效液相色谱法测定牡蛎中牛磺酸含量的方法。方法:采用水煮法提取牡蛎中的牛磺酸,分别用HCl和NaOH溶液除去其中的酸性蛋白质和碱性蛋白质,经浓缩、乙醇脱水,制得牡蛎牛磺酸粗品;用邻苯二甲醛(OPA)法柱前衍生3min;色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18,流动相流速0.50mL/min,检测波长360nm,柱温30℃。结果:优化得到测定牡蛎牛磺酸的流动相为20%乙腈和80%水,牛磺酸的出峰时间为3.858min,走样时间为7min,此时牛磺酸和牡蛎提取物中的其它成分完全分离(R>1.5)。牛磺酸质量浓度在5～60μg/mL范围具有良好的线性(R2=0.9946),最低检出限0.02μg/mL,最低定量限0.07μg/mL,平行样品的相对标准偏差(RSD)1.31%～4.48%。相同样品4h内测定的RSD为4.93%,样品测定的回收率95.82%～98.03%。随着提取温度的升高,牡蛎牛磺酸的提取率上升,当提取温度100℃时,牡蛎中牛磺酸的提取率达219.42mg/100g。结论:所建立的方法专属性好,灵敏度高,可精确测定牡蛎提取物中的牛磺酸含量。

莱州湾增殖礁附着牡蛎的固碳量试验与估算

通过对莱州湾增殖型人工鱼礁附着生物的取样调查,分析了礁体附着优势种褶牡蛎壳干质量、总湿质量和附着厚度的季节变化及其随礁龄变化的差异,并对礁区的总固碳量进行了估算.结果表明：增殖礁礁体附着褶牡蛎壳干质量和总湿质量均呈现明显的季节性变化（P〈0.01）,4月最低,12月最高.增殖礁礁龄对附着褶牡蛎壳干质量、总湿质量和附着厚度影响显著（P〈0.01）,均随礁龄的增加呈递增趋势.莱州湾圆管型增殖礁5、4和3年礁龄的礁体附着牡蛎固碳量分别为17.61、16.33和10.45 kg·m-3.2009—2013年,莱州湾金城海域64.25 hm2海洋牧场圆管型增殖礁礁体上附着牡蛎总固碳量约为297.5 t C,相当于封存了1071 t CO2,而封存固定这些CO2所需费用约1.6×105-6.4×105美元.因此,增殖礁附着牡蛎具有巨大的生态效益。

电子束辐照对鲜牡蛎杀菌保鲜效果的影响

以新鲜牡蛎为材料,采用不同剂量电子束辐照,通过测定菌落总数、大肠菌群、T-VBN值及感官评分,评价电子束辐照对鲜牡蛎的杀菌效果及其冷藏保质期。结果表明：1）经1~9kGy剂量电子束辐照,鲜牡蛎的组织弹性几乎没有变化,而9 kGy剂量组产生明显异味;2）辐照剂量越高,杀菌效果越好。当鲜牡蛎的初始菌落总数为4.6×105CFU/g时,D10=2.22 kGy;1,3 kGy和5 kGy剂量电子束辐照对鲜牡蛎的抑菌效果明显,冷藏条件下的保质期由对照组的3 d分别延长到7,10 d和11 d。该结果可为电子束辐照应用于生食鲜牡蛎保鲜提供依据。

净化后的褶牡蛎细菌菌相分析

采集浙江省宁海县西店养殖的褶牡蛎去壳取肉,经过臭氧水杀菌净化处理后,对牡蛎体内细菌菌落总数、大肠菌群和细菌菌群组成进行了分析研究。牡蛎体内需氧平板菌落数为4.3×103cfu/g,大肠菌群数为157MPN/100g。从牡蛎体内共分离出细菌52株,通过鉴定,96.2%是革兰阴性杆菌,3.8%是革兰阳性杆菌,本研究没有分离到球菌。优势菌为弧菌属(Vibrio)28株,其次是黄杆菌属(Flavobocterium)6株、假单胞菌属(Pseudomonas)5株、无色菌属(Achromobacter)5株、气单胞菌属(Aeromonas)3株,此外还有肠杆菌科(Enterobacteriaceae)2株、杆状菌属(Bacillus)2株,另有1株细菌在传代中失去了生长能力。

泥蚶与牡蛎净化工艺优化初探

应用臭氧与二氧化氯对活体泥蚶和牡蛎进行微生物净化处理。首先对泥蚶和牡蛎进行暂养吐泥,每5 h换水一次,收集排泄物经离心计算相对吐泥量;臭氧净化处理浓度分别为0.4、0.8、1.6 mg/L,二氧化氯浓度分别为5、10、20 mg/L。结果表明:经5 h暂养吐泥即基本完成;用臭氧浓度0.4～1.6 mg/L或二氧化氯浓度5～20 mg/L净化处理24 h,细菌总数减少90%左右,大肠菌群与致病菌则由净化前的超标变成净化后的全面达标;净化处理后的泥蚶与牡蛎在5℃的条件下保存,10 d以内存活率为100%,净化处理后的泥蚶保存10 d再进行微生物检测依然达标。得出简便可行的净化工艺流程为:暂养吐泥5 h,再用0.4 mg/L臭氧净化24 h,然后用尼龙袋密封在5℃条件下保存。研究亮点:通过一系列对比试验,对贝类净化工艺进行优化改进,得出既能使泥蚶与牡蛎净化后微生物达标,又能提高其存活率的简便可行的净化工艺流程,提高贝类净化技术水平。另外,本工艺使贝类净化后无任何有害物质残留,不会造成二次污染。

褶牡蛎体内菌落结构分析及创伤弧菌的定量检测

食用被致病菌污染的牡蛎常引起食品安全问题。采用16S rDNA克隆文库法研究褶牡蛎体内的菌落结构,用荧光定量PCR技术对样品体内的副溶血弧菌、沙门氏菌、创伤弧菌和钩端螺旋体进行定性、定量检测。研究结果表明:褶牡蛎体内的优势菌属为螺旋体属和类杆菌属,分别占总菌数的39.21%和23.53%;样品中含有创伤弧菌,含量为(8.48±0.48)×103cfu/g,而副溶血弧菌、沙门氏菌和钩端螺旋体未检测到。