外源视黄酸对小鼠早期胚胎形态及Otx2基因表达的影响

以全反式视黄酸（ａｌｌｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）体外处理ＥＢ（ｅａｒｌｙａｌｌａｎｔｏｉｃｂｕｄ）期和ＬＢ（Ｌａｔｅａｌｌａｎｔｏｉｃａｃｉｄ）期的小鼠胚胎，然后用洋地黄毒苷（ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记的Ｏｔｘ２反意义ＲＮＡ探针对整体胚胎进行原位杂交．０．５×１０－６ｍｏｌ～２×１０－６ｍｏｌ的ＲＡ处理ＥＢ和ＬＢ期胚胎１２ｈ后对其形态学和Ｏｔｘ２表达都没有影响；以４×１０－６ｍｏｌ的ＲＡ处理，抑制或减少了胚胎的前肠形成，经处理的胚胎的头褶没有对照的那样明显向腹面突出，其神经沟也不整齐；以４×１０－６ｍｏｌ的ＲＡ处理ＥＢ期的胚胎，其ＯｔＸ２表达范围剧烈地向前退缩或只有很微弱的表达；但以同样浓度处理ＬＢ期胚胎时，与对照胚胎相比，ＯｔＸ２的表达除了在极少数胚胎中变得弱一些外，在绝大多数胚胎中其表达模式没有变化．

OTX2基因对hFOB1.19成骨细胞增殖和分化的影响

背景:研究成骨细胞的表达及分化有助于阐明骨性反牙合畸形下颌骨发育过度的分子机制。目的:应用RNA干扰技术下调成骨细胞系hFOB1.19中OTX2基因的表达,进一步研究OTX2基因对成骨细胞增殖及分化的影响。方法:实验分为6组:特异性OTX2-siRNA1、OTX2-siRNA2、OTX2-siRNA3组,GAPDH-siRNA组,阴性对照组和空白对照组。设计3个靶序列的小干扰RNA(iRNA),转染人成骨细胞hFOB 1.19。RT-PCR检测转染后成骨细胞中OTX2 mRNA水平的变化;Western Blot检测蛋白质表达水平;MTT法评估OTX2-si RNA对成骨细胞增殖的抑制作用;化学比色法检测细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)转染后,出现OTX2 mRNA水平下调,蛋白表达水平下调;(2)倒置显微镜下观察漂浮细胞OTX2-si RNA组明显多于各对照组,细胞增殖抑制率明显高于各对照组,OTX2-si RNA组碱性磷酸酶活性明显降低;(3)结果提示,化学合成的特异性OTX2-siRNA转染人成骨细胞系hFOB1.19,能有效下调OTX2mRNA水平;OTX2基因表达下调能够抑制hFOB1.19成骨细胞增殖;OTX2基因表达下调可降低h FOB1.19成骨细胞碱性磷酸酶活性,抑制其分化。

一个先天性小眼畸形家系的全外显子组测序分析及产前诊断

目的分析1个先天性小眼畸形家系的临床表型及遗传学病因。方法应用高通量测序技术对先证者及其父母进行全外显子组测序,筛选候选致病位点,对其家系进行Sanger测序验证,并通过羊水穿刺和Sanger测序为先证者母亲提供产前诊断。结果全外显子组测序和Sanger测序发现家系中的3例患者均携带OTX2基因c.289C>T(p.R97*)杂合变异,先证者母亲亦携带该变异,但无小眼畸形。先证者的父亲、舅母和胎儿未携带上述变异。结论OTX2基因c.289C>T(p.R97*)杂合变异很可能是该家系的发病原因。上述诊断将有助于该家系的遗传咨询和产前诊断。