Study on Complete Mitochondrial Genome of Oula Sheep(Ovis aries)

Mitochondrial genome has been widely used in species identification and gene conservation.In the present study,the complete mitochondrial genome of Oula sheep(Ovis aries)was determined using next-generation sequencing.This genome was16 618 bp(NCBI accession number:KU575248)and contained 13 protein coding genes,22 transfer RNA genes,two ribosomal RNA genes,and a typical control region.The overall nucleotide composition was 33.7%A,27.4%T,25.8%C,and 13.1%G,with a total A+T content of 61.1%.The phylogenetic analysis of selected sheep breeds showed that Oula sheep were clustered within branch A and originated from approximately 6 ka.This mitochondrial genome will provide valuable information for molecular genetic research of Oula sheep.

欧拉-湖羊杂交繁育同期发情与人工授精技术应用研究

为了提升临潭县牧区肉羊的繁殖能力、解决肉羊养殖体系不完善的问题,试验以当地优势湖羊为母本、引进欧拉羊为父本进行杂交改良。首先采用虎红平板凝集试验和聚合酶链式反应(PCR)对羊只进行布鲁氏杆菌病检测;其次通过DNA测序筛选湖羊多胎纯合子(GG型)个体,以此增加杂交肉羊的繁殖能力;最后应用同期发情及人工授精技术进行肉羊品种杂交改良,从而构建出一套增强临潭县肉羊繁殖性能的生产模式。结果表明:欧拉羊与湖羊杂交模式既利用了母本品种的繁殖力优势,又利用了父本的肉用和抗病力优势,后备母羊的受孕率得到了明显提升(85%),同时缩短了其繁育周期,有效增加了优质种公羊的配种效果,进一步降低了养殖成本。

欧拉羊角性状相关RXFP2基因SNPs检测及分析

旨在分析有角和无角欧拉羊群体RXFP2基因对犄角表型的调控作用及相关SNP分子标记,以期为欧拉羊的遗传改良、品种培育提供技术支持。通过采集青海省河南县健康成年欧拉羊母羊血液样品100份,其中有角、无角各50份,提取DNA,随机选取有角、无角样品各15份开展全基因组测序,随后采用多重PCR扩增全部血样验证RXFP2基因SNP。全基因组检测结果表明,包含RXFP2基因在内的欧拉羊10号染色体存在强选择信号,最强选择信号出现在RXFP2基因区段;多重PCR检测验证了全基因组重测序筛查到的4个编码区SNP的准确性,并检测到7个欧拉羊RXFP2基因内含子区域高频SNPs(29508704G>A、29509428A>C、29509766G>A、29512170G>A、29512176G>A、29514968T>A、29521377C>A);经统计检验,该7个SNP位点的基因型在犄角有无表型上表现出分离,纯合子基因型均100%表现为无角或有角,杂合子基因型89.66%表现为无角,10.34%表现为有角;突变等位基因频率小于野生等位基因频率,群体表现为哈代温伯格不平衡状态,受到人工选择强度大,但多态信息含量中等,选育改良潜力仍较大。综上,确认了RXFP2基因在欧拉羊群体中对犄角有无的强调控作用,并筛选出了欧拉羊RXFP2基因的7个犄角有无表型的分子标记,相关结果可作为欧拉羊无角性状群体的遗传改良的分子标记。

秋季补饲对不同年龄阶段欧拉羊血清生化指标的影响

试验旨在探究秋季补饲对不同年龄阶段欧拉羊血清生化指标的影响。选取6、12、36月龄健康且体况相近的欧拉羊母羊各24只,将各年龄阶段欧拉羊随机分为放牧组(Ⅰ组)和放牧+补饲组(Ⅱ组),每组3个重复,每个重复4只羊。预试期10 d,正式试验期60 d。结果表明,6、12月龄Ⅱ组欧拉羊平均日增重高于Ⅰ组(P<0.05)。6月龄Ⅱ组欧拉羊血清雌二醇(E2)、生长激素(GH)含量高于Ⅰ组(P<0.05);12、36月龄Ⅱ组欧拉羊血清碱性磷酸酶(ALP)活性高于Ⅰ组(P<0.05)。6月龄Ⅱ组欧拉羊血清球蛋白(GLB)含量高于Ⅰ组(P<0.05);12月龄Ⅱ组欧拉羊血清白细胞介素-2(IL-2)含量高于Ⅰ组(P<0.05);36月龄Ⅱ组欧拉羊血清GLB、免疫球蛋白M(IgM)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)含量高于Ⅰ组(P<0.05)。6月龄Ⅱ组欧拉羊血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性高于Ⅰ组(P<0.05);12、36月龄Ⅱ组欧拉羊血清超氧化物歧化酶(SOD)活性高于Ⅰ组(P<0.05)。研究表明,秋季补饲促进了6月龄母羊的快速成熟,增强了不同年龄阶段欧拉羊生长代谢能力、免疫功能和抗氧化能力。

添加双歧杆菌对欧拉羊生长性能及粪便微生物多样性的影响

【目的】探究补饲不同剂量双歧杆菌对欧拉羊生长性能及粪便微生物组成的影响。【方法】选取健康、体况一致的6月龄欧拉羊母羊30只,随机分为对照组(CG组)、低剂量补饲组(BIFlow组)和高剂量补饲组(BIFhigh组),每组10个重复。对照组饲喂基础饲粮,BIFlow组和BIFhigh组分别在基础饲粮的基础上添加双歧杆菌5×10~6、5×10^(7)cfu/g。补饲30 d后每组随机选择5只采集肠道粪便,进行16S rDNA测序和生物信息学分析。【结果】补饲双歧杆菌后,欧拉羊的平均日增重显著提高(P<0.05,下同),BIFhigh和BIFlow组的Chao1指数和Richness指数显著高于CG组。比较3组肠道微生物相对丰度差异显著OTUs发现,BIFlow组与CG组、BIFhigh组与CG组、BIFhigh组和BIFlow组之间丰度差异性OTUs分别为70、81和23种。对3组属水平肠道微生物中丰度差异显著的微生物进行数量统计发现,BIFhigh组与CG组之间Phocaeicola等7个属的细菌丰度显著上升,消化杆菌属(Peptacetobacter)等4个属的细菌丰度显著下降。BIFlow组与CG组之间冻丝菌属(Kineothrix)等6个属丰度显著上升;消化杆菌属等7个属的细菌丰度显著下降。BIFhigh和BIFlow两组肠道差异微生物主要表现为Mediterraneibacter、无杆菌属(Agathobacter)等2个属丰度显著上升。对照组与补饲组在细胞进程、细胞运动等功能方面有显著差异。【结论】补饲双歧杆菌后提高欧拉羊的平均日增重,改变肠道菌群Beta多样性,各组肠道微生物属水平等细菌丰度有显著差异,肠道微生物群落结构发生了改变,引起了微生物功能变化。

青海欧拉羊肌肉脂肪酸组成的气相色谱-质谱分析

对青海欧拉羊肌肉脂肪酸进行分析,并与高原型藏羊和小尾寒羊的肌肉脂肪酸组成进行比较。欧拉羊肌肉提取脂肪后进行甲酯化,用气相色谱-质谱联用法测定脂肪酸组成。结果显示:在欧拉羊肌肉中分离鉴定出17种脂肪酸,其主要成分是棕榈酸(22.33%)、硬脂酸(25.91%)、油酸(39.32%)、亚油酸(1.87%),其中饱和脂肪酸占51.62%、单不饱和脂肪酸占42.41%、多不饱和脂肪酸占5.34%。欧拉羊不饱和脂肪酸含量与高原型藏羊比较,无明显差别,比小尾寒羊的含量要高。

甘南玛曲夏季牧场欧拉型藏羊牧食行为的研究

为研究甘南玛曲夏季牧场草地状况对欧拉型藏羊牧食行为的影响,根据草地植被特征,通过野外调查了解甘南玛曲夏季牧场的草地状况,并采用跟踪观测的方法对欧拉型藏羊的牧食行为进行观察。结果表明:在夏季草场的昼采食时间最长(约450min),游走时间较长(约80min);反刍和站立时间基本相近,分别为32min和28min;夏季牧场白天的卧息时间非常少,约8min。采食时间与地上生物量和牧草盖度成正相关(r=0.782,0.902;P>0.05);昼反刍时间与牧草高度成极显著正相关(r=0.995;P<0.01);昼卧息时间与地上生物量成极显著负相关(r=-0.9994;P<0.01);昼站立时间与牧草高度成显著正相关(r=0.989;P<0.05),与牧草盖度成极显著负相关(r=-0.995;P<0.01);昼游走时间与牧草盖度成负相关(r=-0.905;P>0.05)。随牧草高度的增加,欧拉型藏羊的昼采食时间呈下降趋势,但采食时间占放牧时间的71.4%;由于夏季牧场牧草幼嫩多汁,欧拉型藏羊采食牧草后的反刍和卧息行为较少。

甘南玛曲不同年龄欧拉型藏羊放牧采食量季节动态研究

为确立高寒地区天然草地欧拉型藏羊放牧采食量的季节动态变化,本试验采用TiO_2外源指示剂法和瘤胃尼龙袋法分别测定欧拉型藏羊不同季节排粪量和牧草消化率从而计算放牧采食量。结果表明:玛曲高寒草地牧草干物质消化率(DMD)和粗蛋白(CP)含量夏季显著(P<0.05)高于冬春季与秋季;欧拉型藏羊各年龄段排粪量3季差异显著(P<0.05)且秋季>夏季>冬春季;随着年龄增长,欧拉型藏羊三季牧草采食量均有增大的趋势,同年龄段不同季节的藏羊采食量和代谢采食量(除4岁母羊)差异显著(P<0.05)且秋季>夏季>冬春季;各年龄段藏羊累计牧草消耗量(AFC)差异显著(P<0.05)分别为339.37,757.58,1185.93和1655.61kg。由此可见,牧草干机物质消化率、排粪量和采食量夏秋季较高、冬春季较低,随着年龄增大排粪量和采食量有增高的趋势。因此,在高寒牧区应提倡草地季节性畜牧业,充分考虑牧草营养与动物营养需求之间的耦合性来提高经济和生态效益。

欧拉型藏羊Callipyge基因多态性与生长性状相关性研究

利用PCR-SSCP方法,对215只欧拉型藏羊Callipyge基因序列的多态性进行了检测,并分析了AA和AB基因型与生长性状的相关性.结果表明:Callipyge基因存在AA、BB和AB 3种基因型,其基因型频率分别为0.823 3、0.009 3和0.167 4;测序结果显示:基因多态的产生是在扩增序列的第176bp处发生了C→T的突变;χ2检验表明,该群体在这一位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),遗传杂合度和多态信息含量分别为0.168 7和0.154 5.对生长性状(体重、胸围和胸深)的相关性分析表明:AA和AB 2个基因型个体之间生长性状的差异不显著,但AB型有大于AA型的趋势.

欧拉型藏羊肉理化及近红外光谱特性研究

欧拉型藏羊是生长在青藏高原的肉用羊,具有独特的耐高寒低氧属性。本研究对1.0～1.5岁龄的欧拉型藏羊背最长肌的理化特性和近红外光谱特性进行分析,发现其蛋白质和肌内脂肪含量分别高达24.18%和2.05%,剪切力为40.92N,总体品质较好;欧拉型藏羊背最长肌近红外原始光谱在1180、1450nm有吸收峰,一阶求导可以对原始数据进行有效处理,经一阶求导后近红外光谱在1380nm处有明显峰值特征。研究结果表明,欧拉型藏羊肉有良好的食用和加工价值,其特定理化特性导致其出现独特的近红外光谱特性。

宰后藏羊肉Hsp70表达量变化及其与肉品质相关性分析

为研究欧拉藏羊肉宰后成熟过程背最长肌中热休克蛋白Hsp70表达量的变化及其与肉品质间的关系,选取了24头甘南欧拉藏母羊,宰后在4℃环境中成熟,在成熟过程的不同时间点(2、12、24、48、72、120、168 h)进行pH值、L~*、a~*、b~*、剪切力、系水率、肌原纤维小片化指数(MFI)、糖原含量、Hsp70表达量的测定,并进行Hsp70表达量与肉品质指标的相关性分析。结果表明:Hsp70表达量与MFI呈极显著负相关(P<0.01),与L~*呈显著负相关(P<0.05),与剪切力、糖原含量呈显著正相关(P<0.05),与系水率呈极显著正相关(P<0.01)。

超高压处理对藏羊肉肌原纤维蛋白特性的影响

为阐明超高压对藏羊肉肌原纤维蛋白特性的改善作用,该研究以欧拉藏羊肉肌原纤维蛋白为研究对象,对其进行不同压力强度(0、150、250、350、450、550 MPa,保压10 min)处理后,测定肌原纤维蛋白的乳化性、起泡性、溶解度、浊度、巯基和羰基含量,并对其进行分析。结果表明,肌原纤维蛋白的总巯基含量随着压力强度增加而显著降低(P<0.05),而羰基和活性巯基含量显著上升(P<0.05),在压力强度为550 MPa时,肌原纤维蛋白的总巯基含量比对照组低30.3%,羰基和活性巯基含量分别比对照组高54.8%、56.7%。处理后肌原纤维蛋白的乳化性、乳化稳定性、溶解度、起泡性、起泡稳定性及表面疏水性呈先上升后下降的趋势,压力强度为350 MPa时,乳化性、溶解度、起泡稳定性、表面疏水性分别比对照组高56.6%、54.8%、26.7%、39.8%。此外,处理后肌原纤维蛋白的浊度呈先下降后保持稳定,在450 MPa时,比对照组低20%。超高压处理改善了藏羊肉肌原纤维蛋白的乳化特性、溶解度、起泡特性、表面疏水性、羰基、巯基和浊度。

夏季放牧补饲对欧拉型藏羊羔羊育肥效果的研究

[目的]为藏羊羔羊夏季的育肥提供参考。[方法]选用6月龄欧拉型藏羊羔羊90只分为放牧组(对照组)和放牧补饲组(试验组),在夏季牧草旺盛期进行补饲育肥,研究青藏高原夏季不同育肥方式对藏羊羔羊育肥性能和肉品质的影响。[结果]试验组羔羊的净增重和平均日增重显著高于对照组(P<0.05)。试验组羔羊的宰前活重、胴体重、屠宰率、胴体净肉重和胴体净肉率均极显著高于对照组(P<0.01),而试验组羔羊的骨重、肉骨比、花油重和板油重均显著高于对照组(P<0.05)。试验组羔羊的肌肉内脂肪含量为3.43%,显著高于对照组(P<0.05)。试验组欧拉型藏羊羔羊的肉色评分、大理石和熟肉率均显著高于对照组(P<0.05)。试验组和对照组羔羊肉中异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸酪氨酸的含量均高于FAO/WHO的标准模式。[结论]通过夏季补饲可进一步提高欧拉型藏羊羔羊的育肥效果。

欧拉型藏羊GH基因5′端侧翼序列多态性与生长性状的关联分析

采用PCR-SSCP方法,检测了126只欧拉型藏羊GH基因5′端侧翼序列的遗传多态性,并与生长性状进行关联分析.结果表明:GH基因在5′端侧翼序列存在2个等位基因3种基因型;χ2检验表明,该群体在这一位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),多态信息含量为0.152 2,属于低度多态(PIC<0.25).与藏绵羊的基因序列(GenBank登录号:EF077162)相比,B等位基因在86bp、87bp处分别发生T→C和G→A的突变.关联分析表明:欧拉型藏羊BB基因型个体的体长、体高显著高于AA型和AB型(P<0.05),不同基因型之间体重、胸深、胸宽、管围差异均不显著.

欧拉羊胎儿皮肤细胞的培养、保存与鉴定

用胰蛋白酶对欧拉羊胎儿皮肤组织进行热消化分离并培养原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代时用液氮保存,复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。结果显示,欧拉羊胎儿皮肤细胞呈成纤维型,复苏活力93.5%以上,生长良好,细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖量为3.31×105 mL-1,倍增时间为26.2h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。表明欧拉羊胎儿皮肤细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。

阿勒泰羊、藏绵羊(贾洛类群、欧拉类群)Sry基因序列分析及亲缘关系研究

利用山羊Sry基因设计引物,PCR扩增获得阿勒泰羊、藏系欧拉羊、藏系贾洛羊包含Sry基因整个编码区的雄性特异性片段.经测序及人工校对、剪切获得Sry基因编码区序列.分析结果表明三个类群羊Sry基因序列完全相同,且与其他品种羊具有高度的同源性:阿勒泰羊、藏系贾洛羊、藏系欧拉羊与普通绵羊、盘羊及摩弗伦羊具有相同的Sry基因序列,亲缘关系最近,其次是赤羊,最远是大角羊.这说明,这三个类群羊可能是由中国盘羊经当地居民长期人工选育而成的地方性品种(系).

欧拉羊胚肾细胞的分离培养和鉴定

[目的]分离培养并鉴定欧拉羊胚肾细胞,为该品种基因组文库构建和遗传多样性研究提供生物学材料。[方法]用胰蛋白酶热消化法分离并培养欧拉羊胚肾原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。[结果]欧拉羊胚肾细胞呈成纤维型,复苏活力90%以上,生长良好,生长曲线呈"S",最大增殖浓度为4.61×105/ml,倍增时间26 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。[结论]欧拉羊胚肾细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。

欧拉型藏羊肉的炖煮加工特性

选取成年欧拉型公羊和母羊的前腿肉、后腿肉和肋腹肉,研究其炖煮加工后感官、理化和蛋白质热变性等特性。结果表明:炖煮后欧拉型藏羊肉肉质柔软、富有多汁性,具有典型的羊肉香气,炖煮后肉汤透明澄清,脂肪团聚于表面,有明显的香味和鲜味。炖煮后欧拉型藏羊肉色差没有显著变化(P>0.05),欧拉型公藏羊与母藏羊的前腿肉、后腿肉、肋腹肉的硬度、弹性、咀嚼性、黏聚性均没有显著性差异(P>0.05)。炖煮后欧拉型藏羊肉的肌原纤维蛋白质热降解,其蛋白质热稳定性与性别、部位无关;肌浆蛋白质炖煮后大量消失,发生了热变性,进而导致溶解性急剧降低,性别和部位对肌浆蛋白质的热稳定性影响显著。

欧拉型藏羊肉的涮制加工特性

选取成年欧拉型藏羊公羊和母羊的前腿肉、后腿肉和肋腹肉,研究其涮制加工中感官、理化和蛋白质降解特性。结果表明:母羊肉的感官得分高于公羊肉,更适合涮制;肋腹肉整体感官品质最好,后腿肉次之;醛类物质对欧拉型藏羊肉涮制挥发性风味的形成贡献率最大,公羊肉醛类物质含量高于母羊肉,后腿肉醛类物质含量高于其他部位肉;欧拉型藏羊母羊肉的肌原纤维蛋白降解程度大于公羊肉;前腿肉的涮制损失最大,肋腹肉最小。

欧拉型藏羊生长发育曲线模型预测及趋势分析

试验旨在研究欧拉型藏羊的生长发育状况,初步探讨欧拉型藏羊的生长发育曲线理论模型并找出欧拉型藏羊养殖的最佳生长点,以期为欧拉型藏羊的选育和饲养管理的改善提供理论依据。选用甘肃省甘南玛曲县欧拉乡牧户的欧拉型藏羊羔羊60只,测定了0（初生）、2、7、14、21、28、42、56、70、84、98、112日龄的体重、体高和体长。采用Logistic、Richards、Exponential Association和Gompertz Relation 4种生长曲线模型对欧拉型藏羊羔羊的生长曲线进行拟合。结果发现：Richards曲线模型最适宜描述欧拉型藏羊体重增长模式,Exponential Association是拟合欧拉型藏羊羔羊体高和体长早期生长过程的最优模型。