藏绵羊GHR基因5′侧翼区序列特征分析

对欧拉型藏绵羊生长激素受体(GHR)基因5′侧翼区(包括P1启动子和外显子1A)进行了T-A克隆和序列测定(GenBank accession No.EF116490),在分析其序列结构特征的基础上与GenBank中摩弗伦羊、山羊、普通牛、欧洲野牛进行了比较基因组学和系统进化研究,结果表明:(1)欧拉型藏绵羊GHR基因启动子P1区存在C/EBP、C/EBPb、SP1、Cap、USF、HFH-2、HNF-3b、Oct-1等多个潜在的转录因子结合位点,可能与GHR基因的转录调控和起始以及特异表达有关。在该非编码序列中,重复序列所占比率为2.55%,不存在SINEs、LINEs、LTR类反转录元件和DNA转座子元件,而发现存在一(TG)11微卫星位点;(2)在启动子P1区,藏绵羊与摩弗伦羊、山羊、普通牛、欧洲野牛各物种间同源性大小分别为99.7%、94.2%、85.9%、86.5%;而在外显子1A区段,藏绵羊与摩弗伦羊、山羊、普通牛、欧洲野牛各物种间同源性大小分别为99.0%、97.0%、92.7%、94.6%。物种间欧拉型藏绵羊与摩弗伦羊同源性最高,而欧拉型藏绵羊与普通牛最低。(3)邻接法(即NJ法)构建的分子系统进化树聚类结果表明,欧拉型藏绵羊与摩弗伦羊先聚为一类,再与山羊聚类形成一个大分支,而普通牛和欧洲野牛先聚类形成另一大分支,两大分支最后再聚为一起,其聚类结果与线粒体DNA和动物学分类的研究结果一致。

精料补饲水平对藏羊屠宰性能和器官发育的影响

选用40只初始体重为(30.21±1.42)kg的9月龄欧拉型藏羊(Oura-type Tibetan sheep,OTTS)(高原型)羯羊,随机分为4组,每组10只,在放牧的基础上每只羊每天分别补饲0、0.1、0.2和0.3 kg精料,预试期15 d,正试期195 d,旨在研究精料补饲水平对藏羊屠宰性能和器官发育的影响。结果表明:补饲精料显著提高了OTTS的屠宰性能(P<0.05);提高了其头、皮+毛、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、大肠占体质量的百分比(P>0.05),降低了胃、小肠、胃肠道及其内容物占体质量的百分比(P>0.05);提高了胃内容物占总胃肠道内容物的百分比及大肠内容物占整个肠道内容物的百分比(P>0.05);降低了肠道占体长的倍数;提高了胃的容积(P>0.05)。初步说明,冷季补饲精料可提高OTTS屠宰性能,刺激器官发育,改变胃肠道内容物的分布。本研究为高海拔地区发展藏羊产业、改善藏羊器官发育和调控其胃肠道内容物分布提供理论依据。

欧拉型藏绵羊血红蛋白多态性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对河南县77只欧拉型藏绵羊的血红蛋白多态性进行了研究。结果发现,藏绵羊的血红蛋白位点上有HBA和HBB两个等位基因控制的HBAA、HBAB和HBBB三种基因型。其中HBAA和HBA分别为优势基因型和优势等位基因,其频率分别为0.6104和0.799。经χ2适合性检验,欧拉型藏绵羊HB基因型处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。HB位点的基因杂合度为0.3212。

冷季牧归补饲精料对高海拔地区藏系绵羊血液生化指标的影响

选取9月龄欧拉型藏系绵羊羯羊(30.21 kg±1.42 kg)40只,随机分为4组,A组冷季放牧,B、C和D组冷季牧归每天每只分别补饲0.10、0.20和0.30 kg混合精料,试验期210 d,研究冷季牧归补饲精料对其血清生化指标的影响。结果表明,补饲精料提高了欧拉型藏系绵羊血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、钙(Ca)的含量,钙/无机磷(Ca/IP)比值及肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和γ-谷氨酰胺基转移酶(GGT)活性;随着精料补饲量增大,绵羊血清葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、缩胆囊素(CCK)、胃泌素及免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)及免疫球蛋白M(IgM)的浓度增大,但补饲0.30 kg组试验羊IgG浓度较C组略有下降(P>0.05);与A组相比,补饲精料显著提高了试验羊碱性磷酸酶(AMP)活性、尿素氮(BUN)浓度和BUN/CRE的值,显著降低肌酐(CRE)和尿酸(UA)浓度(P<0.05)。综合上述结果,冷季归牧后补饲适量精料可改善欧拉型藏系绵羊能量和脂肪的代谢能力,增强肝脏蛋白合成,提高机体免疫力和抗氧化力,调节钙磷代谢。

藏绵羊GHRH基因部分片段的克隆及HaeⅢ-RFLP分析

对欧拉型藏绵羊生长激素释放激素(GHRH)基因部分片段进行PCR扩增、纯化和克隆测序,利用GenBank中的Blastn方法与普通牛相应基因序列进行了比对分析,并对54只欧拉型藏绵羊该基因片段进行了HaeⅢ-RFLP研究。结果表明:欧拉型藏绵羊与普通牛GHRH基因部分序列间同源性为93%;序列间碱基变异类型主要表现为碱基转换和颠换,亦存在碱基插入和缺失;54只欧拉型藏绵羊该基因片段HaeⅢ-RFLP分析均为单态,表现为AA基因型。

欧拉型藏绵羊GHRHR基因部分片段的克隆及多态性研究

对欧拉型藏绵羊生长激素释放激素受体(GHRHR)基因部分片段进行PCR扩增和克隆测序(GenBank Accession No:EU289218),利用BioEdit7.0.9.0、DnaSP 4.10.9和MEGA4.0等生物信息学软件对该部分序列与GenBank中普通牛、瘤牛、水牛相应序列进行比对分析,并对58只欧拉型藏绵羊该基因片段进行SmaI-RFLP研究。结果表明:欧拉型藏绵羊与普通牛、瘤牛、水牛3个物种基因序列间同源性大小依次为92.5%、92.0%、91.5%;4个物种间共发现41处序列间碱基差异(9.65/100 bp),其中藏绵羊与普通牛、瘤牛、水牛3个牛亚科物种均存在差异碱基29处。碱基变异类型主要表现为碱基转换和颠换,少数为碱基插入和缺失。推导的部分氨基酸序列间同源性大小依次为88.8%、88.8%、94.4%。58只欧拉型藏绵羊该基因片段SmaI-RFLP分析均为单态,表现为AA基因型。

欧拉型藏羊的肉质分析

对欧拉型藏羊肉质品质进行了分析,并与高原型藏羊和青海半细毛羊进行了肉质常规营养和氨基酸含量分析对比,结果表明欧拉型藏羊蛋白质含量达21%,脂肪含量3.15%,胆固醇含量为0.365mgg,挥发性盐基氮0.1126mgg,矿物质总量6785mgkg,氨基酸总量224.835mgg。欧拉型藏羊与高原型藏羊和青海半细毛羊相比,羊肉具有高能量、高蛋白质、矿物质丰富,低脂肪、低胆固醇的特点,且氨基酸含量更为丰富。

欧拉型藏羊屠宰试验

试验结果表明,青海省河南县10月龄羔羊宰前活重和胴体重分别达到38.3kg和15.97kg,1.5岁羯羊的宰前活重、胴体重和屠宰率,分别达到47kg,23.2kg和46.7%;1.5岁欧拉羊心脏、肺脏重分别为0.29kg和0.69kg,明显大于同龄藏羊(0.2kg,0.49kg),说明欧拉羊对缺氧的严酷环境具有很好的适应能力。

无角陶赛特与欧拉型藏羊杂种一代羊被毛纤维类型分析

对无角陶赛特与欧拉型藏羊杂种一代的被毛纤维类型进行了分析。结果表明:在杂一代羊被毛纤维类型中,按重量计算绒毛、两型毛、干死毛分别占70.18%,10.13%和18.93%;与其母本欧拉型藏羊相比,干死毛和两型毛比例明显下降,绒毛比例明显上升,特别是杂种羊中有一只羊的毛被已经达到同质水平。

欧拉型藏羊生长发育规律的研究

对欧拉型藏羊从初生到18月龄不同月龄体重、体尺的测定和分析表明,欧拉型藏羊在自然放牧、无补饲条件下,早期生长发育快,肉用体型较明显,10月龄体重接近40kg;6月龄后日增重随着月龄的增长呈递减趋势,10月龄以前生长发育性别间无显著差异;10月龄以后进入枯草季节,其生长发育基本处于停滞状态;18月龄时,公羊体重明显大于母羊,这与公羊在冬春季有少量补饲有直接关系。

欧拉型藏绵羊血清运铁蛋白多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对欧拉型藏绵羊的74份血样进行了血清运铁蛋白(serumtransferrin,TF)多态性的研究。结果发现,被检欧拉型藏绵羊的血清TF位点上检测出TFA、TFB、TFC、TFD和TFM5个复等位基因,其中TFB、TFC和TFD为优势等位基因,其基因频率分别为0.4122、0.2973和0.2162;发现TFAB、TFAC、TFAD、TFBB、TFBC、TFBD、TFBM、TFCC和TFDD等9种基因型,其中TFBC、TFBB、TFBD、TFCC和TFDD为优势基因型,其基因型频率分别为0.2703、0.1622、0.1622、0.1351和0.1216;TF位点的基因杂合度为0.6921。

欧拉型藏羊体重与体尺指标的回归分析

笔者采用逐步回归的方法对随机抽测的青海省河南县40只欧拉型藏羊成年公羊和104只成年母羊的体重和8个主要体尺指标进行回归分析,得到欧拉型藏羊成年公羊体重和主要体尺指标的最优回归方程为y=0.88x2+13.64x6-4.35x7+1.28x4-114.51(P<0.01);成年母羊体尺与体重的最优回归方程为y=0.49x1+0.46x2+0.30x3+0.43x4-43.51(P<0.01)。明确了欧拉型藏羊成年公羊和成年母羊体重与体尺指标的关系,为今后选育工作提供参考。

欧拉型藏羊睾丸与附睾中精子形态学观察

采集欧拉型藏羊的睾丸及附睾,对其不同区段内精子的形态指标进行观察。结果显示:睾丸及附睾不同区段的精子密度依次为:睾丸1.05╳10^7个/mL、附睾头4.31╳10^7个/mL、附睾体2.13╳10^7个/mL、附睾尾1.42╳10^8个/mL;精子畸形率分别为:睾丸14.18%、附睾头15.13%、附睾体15.7%、附睾尾15.20%;顶体完整率分别为:睾丸70.15%、附睾头70.09%、附睾体71.53%、附睾尾70.76%。结果表明,欧拉型藏羊睾丸、附睾中精子密度、顶体完整率较低,可能与藏羊所处环境中日粮、环境温度等有关,但其精子畸形率符合受精标准。