非小细胞肺癌中卵巢肿瘤泛素异肽酶1与程序性死亡受体-1配体的表达相关性

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中卵巢肿瘤泛素异肽酶1(OTUB1)与程序性死亡受体-1配体(PD-L1)的相关性。方法分析肿瘤基因组数据库(TCGA)中NSCLC与癌旁正常组织OTUB1 mRNA的差异性。基于基因表达谱数据动态分析(GEPIA)探讨NSCLC中OTUB1与PD-L1 mRNA表达相关性。免疫组化法检测46例NSCLC及41例癌旁正常组织蜡块OTUB1及PD-L1蛋白表达,收集临床病例数据及随访资料。分析OTUB1在癌组织与癌旁组织中的表达差异,OTUB1与PD-L1相关性、临床病理特征的关系以及无复发生存期(RFS)预测意义。结果 NSCLC与癌旁正常组织的OTUB1 mRNA及蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC的OTUB1与PD-L1 mRNA无相关性(P>0.05),但两者蛋白表达有相关性(P=0.029)。OTUB1与TNM分期有相关性(P=0.039),与年龄、吸烟史、分化程度、转移淋巴结数及病理类型无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier分析显示,TNM分期(P<0.001)、转移淋巴结数(P=0.001)及分化程度(P=0.042)是RFS的影响因素;OTUB1阴性及阳性中位RFS分别是18、19个月,差异无统计学意义(P>0.05)。COX多因素分析结果提示,分化程度(P=0.005)及TNM分期(P=0.006)是影响RFS的独立危险因素。结论 NSCLC中OTUB1 mRNA及蛋白表达均高于癌旁正常组织。在蛋白水平方面,OTUB1与PD-L1呈正相关。OTUB1表达与TNM分期相关。

卵巢癌组织中带状疱疹透明带样结构域蛋白1 mRNA表达与肿瘤增殖、侵袭及自噬相关基因表达的相关性

目的探讨卵巢癌组织中带状疱疹透明带样结构域蛋白1(CUZD1)mRNA表达与增殖、侵袭及自噬相关基因表达的相关性。方法选取2018年1~10月宜宾市第二人民医院病理科保存的122例卵巢癌、72例卵巢囊肿和20例正常卵巢组织标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组织标本中CUZD1 mRNA、肿瘤增殖相关基因[β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-myc]、侵袭相关基因[核转录因子κB(NF-κB)、钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、肿瘤转移相关基因1(MTA1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、整合素α2(ITGA2)]、自噬相关基因[bcl-2同源结构域样蛋白1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)]的表达,采用Pearson相关分析卵巢癌组织中CUZD1 mRNA与增殖、侵袭及自噬相关基因表达的相关性。结果卵巢癌、卵巢囊肿及正常卵巢组织中CUZD1 mRNA相对表达量分别为947.354±24.263、367.944±16.256、2.116±0.032,卵巢癌组织中CUZD1 mRNA相对表达量显著高于卵巢囊肿和正常卵巢组织(P<0.05),卵巢囊肿组织中CUZD1 mRNA相对表达量显著高于正常卵巢组织(P<0.05)。卵巢癌组织中增殖相关基因β-catenin、Cyclin D1、C-myc相对表达量显著高于卵巢囊肿和正常卵巢组织(P<0.05),卵巢囊肿组织中β-catenin、Cyclin D1、C-myc基因相对表达量显著高于正常卵巢组织(P<0.05)。卵巢癌组织中侵袭相关基因NF-κB、Vimentin、MTA1、MMP-9、VEGF、ITGA2相对表达量显著高于卵巢囊肿和正常卵巢组织(P<0.05),而E-cadherin基因相对表达量显著低于卵巢囊肿和正常卵巢组织(P<0.05)。卵巢囊肿组织中NF-κB、Vimentin、MTA1、MMP-9、VEGF基因相对表达量高于正常卵巢组织(P<0.05),卵巢囊肿组织与正常卵巢组织中ITGA2、E-cadherin基因相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌组织中自噬相关基因Beclin1、LC3相对表达量显著低于卵巢囊肿和正常卵巢组织(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,卵巢癌组组织中CUZD1 mRNA表达水平与增殖相关基因β-catenin、Cyclin D1和C-myc表达水平呈正相关(r=0.998、0.990、0.988,P<0.05);与侵袭相关基因NF-κB、Vimentin、MTA1、VEGF、ITGA2、MMP-9表达水平呈正相关(r=0.926、0.946、0.928、0.928、0.924、0.930,P<0.05),而与侵袭相关基因E-cadherin表达水平呈负相关(r=-0.954,P<0.05);与自噬相关基因Beclin 1、LC3表达水平呈负相关(r=-0.928、-0.931,P<0.05)。结论卵巢癌组织中CUZD1 mRNA表达增高,且其表达水平与癌细胞增殖和侵袭活性呈正相关,与细胞自噬活性呈负相关,CUZD1可以作为卵巢癌诊断、病情评估的指标。

卵巢癌结构域蛋白酶-1基因拮抗IFN-α抗病毒效应研究

目的研究卵巢癌结构域蛋白酶-1(ovarian tumor domain-containing protease-1,OTUD1)基因对Ⅰ型干扰素信号通路的影响以及对IFN-α抗病毒效应的影响。方法双荧光素酶报告试验检测OTUD1基因对IFN-α诱导的干扰素刺激应答元件(interferon-stimulated response elements,ISRE)启动子转录活性的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测OTUD1对IFN-α诱导的干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)表达水平的影响;Western blot检测OTUD1对干扰素信号通路关键分子表达的调控作用,qPCR和ELISA检测其对IFN-α抑制乙型肝炎病毒复制的影响。结果在HEK293T和Huh7.0细胞中,OTUD1下调了干扰素信号通路下游的ISRE启动子转录活性以及ISG15和ISG56等抗病毒基因的表达。在HEK293T细胞中,OTUD1降低了磷酸化蛋白质酪氨酸激酶(phospho-Jak1,p-JAK1)的蛋白质表达水平,但是OTUD1酶活突变体C320S不能调控ISGs和p-JAK1的表达。在Huh7.0细胞中,OTUD1降低了IFN-α抑制乙型肝炎病毒复制的效应。结论OTUD1通过其泛素化酶活性下调p-JAK1的蛋白质表达水平,抑制干扰素JAK-STAT信号通路及ISGs表达。OTUD1拮抗IFN-α抑制病毒复制的效应可能与干扰素诱导的JAK-STAT信号通路有关。

芍药内酯苷对人卵巢癌多药耐药的逆转作用

目的研究芍药内酯苷(albiflorin,AL)逆转人卵巢癌多药耐药的作用和潜在机制。方法采用CCK-8试剂盒检测AL对SKOV3/DDP细胞的耐药逆转作用,采用流式细胞术检测AL对P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)功能的影响,采用RT-qPCR和Western blot检测AL对SKOV3/DDP细胞中MYC、WWP1和ABCB1/P-gp的影响。采用RNA干扰技术构建MYC敲低的SKOV3/DDP细胞株,观察其耐药性、P-gp功能及相关基因和蛋白表达变化。结果AL对SKOV3/DDP细胞有耐药逆转作用,对P-gp功能抑制作用具有浓度依赖性。AL 25、50、100μmol·L^(-1)对ABCB1/P-gp、MYC和WWP1的抑制作用均逐渐增强。MYC抑制剂MYCi975对ABCB1/P-gp、MYC和WWP1的抑制作用均强于或相当于AL 100μmol·L^(-1)组。SKOV3/DDP细胞敲低MYC后,细胞耐药性、P-gp功能以及相关基因和蛋白表达均受到抑制。结论AL对SKOV3/DDP细胞的耐药逆转作用可能与抑制P-gp功能和ABCB1/P-gp、MYC、WWP1表达有关,为AL作为耐药逆转剂用于卵巢癌的临床治疗提供了实验基础。

上皮性卵巢癌组织WW结构域E3泛连接酶1表达及意义

目的观察WW结构域E3泛连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1, WWP1)在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与上皮性卵巢癌患者临床病理特征的关系,探讨其在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用。方法上皮性卵巢癌患者69例,均行卵巢癌肿瘤细胞减灭术,术后紫杉醇+卡铂方案化疗6个周期。取手术切除肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测WWP1 mRNA相对表达量。根据术后FIGO分期,将69例患者分为早期组(Ⅰ~Ⅱ期)21例,晚期组(Ⅲ~Ⅳ期)48例;依据肿瘤组织WWP1 mRNA相对表达量中位数,将69例患者分为WWP1高表达组(WWP1 mRNA相对表达量≥0.025)36例,WWP1低表达组(WWP1 mRNA相对表达量<0.025)33例。比较早期组、晚期组和癌旁组织WWP1 mRNA相对表达量;比较WWP1高、低表达组年龄、病理类型、FIGO分期等临床病理特征;随访观察WWP1高、低表达组无进展生存期。结果早期组、晚期组WWP1 mRNA相对表达量[0.031(0.019, 0.044)、0.041(0.021, 0.054)]均高于癌旁组织[0.025(0.015, 0.034)](P<0.05),晚期组高于早期组(P<0.05)。WWP1低表达组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期比率(54.5%)高于WWP1高表达组(27.8%)(P<0.05);WWP1低表达组与高表达组年龄、病理类型、肿瘤分化程度、糖链抗原125水平及淋巴结转移率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。WWP1低表达组中位无进展生存期(18个月)长于WWP1高表达组(14个月)(P<0.05)。结论 WWP1在上皮性卵巢癌肿瘤组织表达升高,WWP1高表达提示FIGO分期晚、预后差。