淋巴管内皮细胞微环境对卵巢癌淋巴结定向高转移细胞上皮-间质转化的影响

目的通过人卵巢癌淋巴结定向高转移的细胞株(SKOV3-PM4)与人淋巴管内皮细胞株(HLEC)的条件培养和共培养,探讨HLEC微环境对SKOV3-PM4的运动迁移能力以及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法采用transwell小室体外侵袭法,观察经HLEC的条件培养后SKOV3-PM4的侵袭、迁移能力的改变。SKOV3-PM4经HLEC的条件培养和共培养后的爬片细胞,采用免疫组化法检测转化生长因子(TGF-β1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达的变化。结果经HLEC培养基的条件培养后SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(53±11)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(30±5)%(P<0.05);条件培养后SKOV3-PM4细胞的迁移率为(48±5)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的迁移率为(34±2)%(P<0.05)。SKOV3-PM4细胞经条件培养和共培养后TGF-β1和vimentin表达上调(P均<0.05),E-cadherin表达下调(P<0.05)。结论淋巴管内皮细胞微环境可促进卵巢癌淋巴结定向高转移细胞间质化的转变,增强卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。

SFRP1在卵巢癌淋巴结定向高转移细胞中的表达及意义

目的进一步探讨分泌型卷曲相关蛋白(SFRP1)在卵巢癌发生、发展中的作用。方法采用荧光定量PCR法定量分析SFRP1 mRNA在不同淋巴结转移能力卵巢癌Skov3细胞亚系中表达水平。结果SFRP1 mRNA在原代Skov3细胞与转移能力依次增高的Skov3-pm2、Skov3-pm3、Skov3-pm4细胞系中的表达呈下降趋势(P<0.05)。结论SFRP1在高淋巴结转移能力的卵巢癌细胞中表达减少,与卵巢癌发生、发展密切相关,其可作为监测卵巢癌的分子靶标。

卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴定向高转移细胞分泌蛋白差异初筛

目的:分析卵巢癌细胞株(SKOV3)与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞株(SKOV3-PM4)分泌蛋白的差异,寻找与卵巢癌淋巴定向转移密切相关的潜在诊断分子标志。方法:分别收集SKOV3与SKOV3-PM4培养上清,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI_T0F-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点,对其进行生物学分析后采用蛋白质印迹法验证挑选目标蛋白在细胞分泌蛋白中的表达情况。结果:二维凝胶电泳显示,SK-OV3细胞分泌蛋白质点数约为569±156,SKOV3-PM4细胞分泌蛋白质点数约为598±175。选取差异较大的7个差异蛋白点进行MS+MS/MS质谱鉴定,分别为乙二醛酶1(GLO1)、翻译后调节肿瘤蛋白(TPTC)、二磷酸核苷激酶B(ND-PK-B)、膜联蛋白(ANXA1)、热休克蛋白27(HSP)、过氧化物氧化还原(PRDX1)和磷脂酰乙醇胺结合蛋白Ⅰ(PEBP-Ⅰ)。挑选NDPK-B、ANXA1和HSP蛋白经蛋白质印迹法验证发现,SKOV3-PM4细胞中ANXA1和HSP27表达高于SKOV3细胞,而NDPK-B表达低于SKOV3细胞。与质谱分析的结果基本一致。结论:在卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞之间分泌蛋白存在很大的差异,其中已被鉴定的ANXA1和HSP27与卵巢癌淋巴结转移密切相关,有望成为诊断或预测卵巢癌淋巴结转移患者血清检测的标志。

3种齐墩果酸纳米粒对小鼠HCa-F细胞体外抑制作用比较

目的:比较齐墩果酸(OA)/乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(OPN)、OA/乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(OPTN)和OA/聚己内酯-聚乳酸-水溶性维生素E纳米粒(OPPTN)对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞(HCa-F)的体外抑制作用。方法:采用水溶性四氮唑(WST-1)法比较低、中、高浓度(2.5、10、20μg·mL-1)的OPN、OPTN、OPPTN、OA溶液剂(OS)组和阳性对照(氟尿嘧啶注射液)组对HCa-F细胞培养24、48、72h后的细胞生长抑制率(IR)和3种纳米粒的半数抑制浓度(IC50),另设立空白纳米粒(NPs)组、空白组(不加任何物质)、阴性对照组(加入培养液)。结果:浓度分别为2.5、10、20μg·mL-1的OPN组在72h时的IR分别为(42.9±0.9)%、(63.6±1.1)%、(75.4±1.3)%,OPTN组分别为(54.3±1.2)%、(79.2±1.4)%、(92.6±1.5)%,OPPTN组分别为(50.8±0.8)%、(71.7±1.3)%、(83.9±1.2)%,阳性对照组分别为(31.5±0.9)%、(50.3±0.8)%、(60.6±0.9)%。与阳性对照组相同浓度比较,72h时OPN、OPTN、OPPTN组的中、高浓度的IR均明显升高(P均<0.01)。3种纳米粒对HCa-F细胞的IC50均随时间延长逐渐减小,其中OPTN组(8.64、1.39、0.38μg·mL-1)明显小于OPPTN组(11.86、5.52、3.46μg·mL-1)和OPN组(30.27、8.21、5.00μg·mL-1)(P<0.05或P<0.01)。结论:OPTN对HCa-F细胞的IR最高,表明OPTN体外具有良好的细胞相容性和显著的抗肿瘤活性。