^(99m)Tc标记卵巢癌单抗片段F(ab')_2放射免疫显像的实验研究

目的：为了改进放射免疫显像（ＲＩＩ），进行９９ｍＴｃ标记卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２Ｆ（ａｂ’）２ＲＩＩ的研究。方法：采用无花果酶制备单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２片段Ｆ（ａｂ’）２，改进ＳｎＣｌ２法进行９９ｍＴｃ标记片段Ｆ（ａｂ’）２及正常鼠ＩｇＧ（ＮＭＩｇＧ）；９９ｍＴｃＣＯＣ１８３Ｂ２或９９ｍＴｃＮＭＩｇＧ标记物分别经腹腔注入荷人卵巢癌裸鼠体内，１８ｈ进行ＲＩ。显像后测定并计算肿瘤与非肿瘤组织放射性活度比值（Ｔ／ＮＴ）。结果：（１）无花果酶可制备ＣＯＣ１８３Ｂ２单抗片段Ｆ（ａｂ’）２；（２）改进ＳｎＣｌ２法进行９９ｍＴｃ标记Ｆ（ａｂ’）２，标记率达９０％以上；（３）１８ｈ后ＲＩ，可见９９ｍＴｃＣＯＣ１８３Ｂ２组荷瘤裸鼠较９９ｍＴｃＮＭＩｇＧ对照组移植瘤图像清晰，且Ｔ／ＮＴ值明显高。结论：应用片段Ｆ（ａｂ’）２可改善ＲＩＩ。

^(131)I-Herceptin对卵巢癌细胞的体外作用

目的:研究^(131)I标记抗HER-2/neu单克隆抗体Herceptin(^(131)I-Herceptin)体外对高表达HER-2/neu卵巢癌细胞的生物学作用,探讨将其用于卵巢癌放射免疫治疗的可行性。方法:(1)流式细胞仪检测人卵巢癌SKOV3和HO8910细胞株HER-2/neu的表达。(2)Iodogen法^(131)I标记Herceptin,测定其标记率、放化纯度、稳定性及免疫活性。(3)MTT比色法检测^(131)I-Herceptin对人卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910的抑制作用。(4)流式细胞法检测SKOV3在^(131)I-Herceptin作用下细胞周期改变和凋亡情况。结果:(1)SK-OV3细胞株HER-2/neu表达率为92.67%;HO8910表达率为9.59%。(2)^(131)I-Herceptin标记率为89.8%,放化纯度为98.4%,24h后仍大于80%,标记物免疫活性较好。(3)131I-Her-ceptin对SKOV3细胞株的抑制作用明显高于HO8910(P<0.001),且明显高于^(131)I组﹑Her-ceptin组以及^(131)I+Herceptin组(P<0.01)。(4)流式细胞检测^(131)I-Herceptin组SKOV3细胞的凋亡率明显高于^(131)I+Herceptin、Herceptin和^(131)I组(P<0.05),各干预组均检测到细胞周期阻滞,^(131)I-Herceptin组G0-G1期细胞比例明显高于其它三组(P<0.05)。结论:^(131)I-Herceptin对高表达HER-2/neu的人卵巢癌细胞SKOV3有明显的抑制和杀伤作用。

卵巢癌预定位放射免疫显像的实验研究

目的：提高放射免疫显像（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｉｍａｇｉｎｇ，ＲＩＩ）质量，建立卵巢癌预定位放射显像技术。方法：将合成的环二乙基三胺五乙酸（ｃｙｃｌｉｃｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，ｃＤＴＰＡ）与卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２进行偶联，Ｓｅｐｈａｄｅｘ分离纯化后，采用免疫组织化学染色及细胞放射自显影对偶联物进行活性测定。将偶联的ＣＯＣ１８３Ｂ２ｃＤＴＰＡ或ＩｇＧ分别经腹腔注入荷人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型体内，４８ｈ后，将还原９９ｍＴｃ淋洗液经腹腔注入体内，６ｈ后进行ＲＩＩ。显像后，体外称重并测量瘤及其他正常组织放射性活性，计算瘤与非瘤放射性比值（Ｔ／ＮＴ）。结果：（１）ＣＯＣ１８３Ｂ２ｃＤＴＰＡ与浆液性卵巢癌组织免疫组化染色呈阳性；细胞放射自显影结果可见卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞膜周围呈环状显影，提示偶联后单抗仍保留了较好的免疫活性。（２）注射还原９９ｍＴｃ６ｈ后ＲＩＩ，可见实验组荷瘤裸鼠腹腔有特异放射性聚集；而对照荷瘤裸鼠腹腔无特异放射性聚集。实验组各器官Ｔ／ＮＴ值高于对照组，两者差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论：ｃＤＴＰＡ偶联ＣＯＣ１８３Ｂ２单抗进行卵巢癌预定位放射免疫显像?

^131I标记抗神经纤毛蛋白－2单克隆抗体在荷肺腺癌裸鼠中的生物分布及显像

目的制备131I标记的抗神经纤毛蛋白（NPR）－2单克隆抗体（mAb）（131I－anti－NRP－2－mAb），在体内外观察其与NRP－2表达阳性肿瘤的结合特性，以探讨其应用于NRP－2表达阳性肿瘤显像的可能性。方法（1）采用氯胺T法制备131I－anti－NRP－2－mAb，经Sephadex G25柱纯化，用薄层色谱法测定放化纯和稳定性。（2）利用A549细胞进行体外实验，测定131I－anti－NRP－2－mAb的结合率和受体的亲和力。（3）将A549荷瘤裸鼠以随机抽样法随机分为4组，每组4只，分别于尾静脉注射0.37 MBq 131I－anti－NRP－2－mAb，6、24、48和72 h后，测定并计算主要器官及组织的放射性摄取值[每克组织百分注射剂量率（%ID/g）]、肿瘤/肌肉放射性（T/M）比值和肿瘤/血液放射性（T/B）比值。（4）将A549荷瘤裸鼠以随机抽样法分为未阻断组和竞争性阻断组，每组3只，未阻断组经尾静脉注射3.7 MBq 131I－anti－NRP－2－mAb，竞争性阻断组经尾静脉注射同等剂量的标记物和100 μg未标记的抗NRP－2 mAb，均分别于注射后6、24、48和72 h行γ显像，观察肿瘤放射性浓聚状况。采用两样本t检验分析数据。结果（1）131I－anti－NRP－2－mAb标记率为（94.69±3.63）%，放化纯为（98.56±0.48）%；室温下磷酸盐缓冲液中放置72 h，其标记率仍〉85%。（2）131I－anti－NRP－2－mAb与A549细胞特异性结合率，在60、120、180和240 min时分别为（3.95±0.18）%、（5.19±0.65）%、（6.60±0.36）%和（5.58±0.63）%；加入过量未标记的anti－NRP－2－mAb后，下降至（0.94±0.31）%、（1.12±0.17）%、（1.24±0.25）%和（1.04±0.18）%，阻断组与未阻断组4个时间点细胞结合率间的差异具有统计学意义（t值：11.22、9.89、19.66和9.95，均P〈0.05）；与A549细胞表面受体结合的半抑制浓度（IC50）值为（410.8±1.2） nmol/L。（3）注射131I－anti－NRP－2－mAb后，T/B比值和T/M比值均随着时间的延长逐渐增高，在72 h达到最高，分别为1.10±0.20和3.83±0.18。（4） γ显像示：未阻断组荷瘤鼠注射131I－anti－NRP－2－mAb后6 h即可见肿瘤显影，48 h后肿瘤显像最清晰；竞争性阻断组荷瘤鼠在各时间点肿瘤均未见明显显影。结论成功制备131I－anti－NRP－2－mAb，该标记物对NRP－2具有良好的靶向性。

131I-Herceptin在昆明小鼠及荷人卵巢癌裸鼠模型中的生物分布和显像

目的 研究131 I标记抗人表皮生长因子受体-2蛋白（HER-2/neu）单克隆抗体Herceptin在正常昆明小鼠和荷人卵巢癌裸鼠体内的生物分布及荷人卵巢癌裸鼠的放射免疫显像特点.方法 （1）Iodogen法131I标记Herceptin,测定其标记率、放化纯、稳定性及免疫活性.（2）流式细胞仪和免疫组织化学法分别检测人卵巢癌SKOV-3、HO-8910细胞株及瘤组织HER-2/neu表达情况.（3）计算131I-Herceptin经昆明小鼠尾静脉注射后5,15,30 min和1,2,4,12,24,48,72 h及荷瘤裸鼠尾静脉注射后4,12,24和48h的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）和肿瘤/非肿瘤组织放射性（T/NT）比值.（4）行131I-Herceptin荷卵巢癌裸鼠模型显像,观察注射后1,2,4,8,12,24,48,72,96和120h显像情况并确定最佳显像时间.结果 （1）131I-Herceptin标记率为89.8%,放化纯为98.4%,24 h后仍大于80%,标记物免疫活性较好.（2）SKOV-3细胞株HER-2/neu高表达,表达率92.67% 而HO-8910细胞株表达很低,表达率仅9.59%.（3）131I-Herceptin在昆明小鼠体内主要经肝、脾及肾代谢,血液快相半排期为0.27 h,慢相半排期为51.96h.在荷人SKOV-3移植瘤部位,24 h时放射性摄取值达到18.08%ID/g,显著高于其他脏器组织 T/NT比值随时间延长逐渐增高,72 h时肿瘤/脑放射性比值高达27.27.（4）SKOV-3荷瘤裸鼠在尾静脉注射131I-Herceptin后2 h即可见移植瘤放射性浓聚,48 h后与周围组织对比更为明显,至120 h时仍见移植瘤部位放射性明显浓聚,与对侧感兴趣区比值高达11.44.而HO-8910荷瘤裸鼠各时间点移植瘤几乎未见放射性浓聚.结论 131I-Herceptin对荷人SKOV-3移植瘤具有良好的靶向作用,有望用于高表达HER-2/neu的人卵巢癌患者放射免疫显像及其复发转移灶的靶向治疗.

131I-Herceptin在乳腺癌裸鼠模型中的显像及体内分布研究

目的研究131I-Herceptin荷人乳腺癌裸鼠体内的生物学分布及荷人乳腺癌裸鼠的放射免疫显像特点。方法以对数生长期的SK-BR-3乳腺癌细胞皮下接种BALB／c-neu裸鼠建立动物模型，对荷瘤小鼠模型进行SPECT连续显像。测量小鼠注药后的4、12、24、48h各脏器每克组织每分钟的放射性计数（cpm／g），并计算T／NT以及每克组织的放射性计数占注射剂量放射性计数的百分比（％ID／g）。结果（1）SK—BR-3细胞皮下接种BALB／c-neu裸鼠后成瘤率96％。（2）实验组对比对照组，显像对比明显；实验组T／NT以及肿瘤组织％ID／g显著高于对照组（P〈0．01）。结论131I-Herceptin在sK。BR-3乳腺癌裸鼠肿瘤组织中的浓聚明显，具有良好的靶向作用。

^99Tc^m-SHNH-AC133的制备及对荷结肠癌裸鼠的显像

目的制备99Tcm-6-肼基烟酸琥珀酰亚胺酯盐酸盐（SHNH）-AC133，通过γ显像研究其靶向CD133阳性结肠癌的能力，探讨其作为肿瘤干细胞（CSCs）靶向分子探针的可行性。方法采用免疫荧光法及流式细胞术检测人结肠癌Lovo细胞及肿瘤组织CD133的表达。以SHNH为双功能螯合剂，对CD133的特异性单克隆抗体AC133进行99Tcm标记，合成99Tcm -SHNH-AC133，检测其标记率及放化纯。建立荷结肠癌裸鼠模型，进行γ显像，利用感兴趣区技术获得肿瘤与对侧肌肉组织的肿瘤/正常组织放射性（T/NT）比值。注射标记物前，经荷瘤鼠尾静脉注射过量未标记的AC133进行阻断实验。采用两样本t检验分析数据。结果免疫荧光检测结果显示，CD133表达于Lovo细胞表面。流式细胞检测结果显示，Lovo结肠癌组织中CD133阳性细胞的占比为（29.5±3.4）%。99Tcm -SHNH-AC133标记率〉85%，放化纯为（97.7±2.4）%。γ显像示，99Tcm -SHNH-AC133对Lovo肿瘤有较好的靶向性，12 h后瘤体逐渐显影，24 h肿瘤部位放射性浓聚较明显，其T/NT比值为8.16±0.45。阻断实验中，肿瘤部位放射性摄取明显减少（3.52±0.13；t＝19.8，P〈0.05）。结论99Tcm -SHNH-AC133具有较高的标记率及放化纯，该标记物对CD133阳性结肠癌具有较强的靶向能力，有望用于CSCs的体内示踪。