Ovol2对食管鳞癌细胞增殖、迁移能力的影响和机制研究

目的初步探索转录因子Ovo样锌指2(Ovol2)对食管鳞状细胞癌(ESCC)增殖、迁移能力的影响和相关机制。方法体外培养食管鳞癌细胞系HKESC1、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE140、KYSE180、KYSE410、KYSE510、KYSE520和正常食管上皮细胞系NE1,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测上述细胞系中Ovol2的m RNA表达水平,采用Western blot检测上述细胞Ovol2蛋白表达水平、EC9706和TE1稳定株对照组(DMSO处理)和实验组(Doxycycline处理)Ovol2蛋白表达水平及EC9706和TE1细胞空白对照组(Blank)、稳定株对照组(DMSO处理)和稳定株实验组(Doxycycline处理)中上皮间充质转化(EMT)相关基因的蛋白表达水平;采用慢病毒感染的方法构建Ovol2诱导过表达稳定株,1μg/mL的Doxycycline处理稳定株诱导Ovol2表达,1DMSO处理稳定株作为对照;平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验、Transwell细胞迁移实验检测食管癌细胞迁移能力。结果与正常食管上皮细胞系NE1相比,Ovol2在食管癌细胞系中蛋白表达水平明显降低,且Ovol2在不同食管癌细胞系中的表达存在明显差异,差异均有统计学意义(P<0.05);Ovol2在食管癌细胞系和NE1中的m RNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。EC9706和TE1细胞实验组的克隆形成数量较对照组减少,其中EC9706对照组为(246.33±11.50)个,EC9706实验组为(83.00±7.55)个,TE1对照组为(170.00±9.00)个,TE1实验组为(20.33±3.06)个,两个细胞系过表达组和对照组的差异均有统计学意义(P<0.05);EC9706和TE1实验组的增殖速率较对照组减慢,差异均有统计学意义(P<0.05)。EC9706和TE1细胞实验组较对照组穿过Transwell小室的细胞数量减少,其中EC9706对照组为(150.00±20.27)个,EC9706实验组为(25.00±7.00)个;TE1对照组为(180.00±10.40)个,TE1实验组为(33.00±6.70)个,以上差异均有统计学意义(P<0.05);EC9706细胞实验组在同样时间内划痕愈合范围较对照组缩小,差异有统计学意义(P<0.05)。EC9706实验组细胞形态更加接近上皮细胞,与对照组相比,EC9706细胞克隆形态更加规则,克隆边缘毛刺减少。EC9706和TE1细胞实验组较空白对照组和对照组中E-cadherin表达升高,N-cadherin、Vimentin表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ovol2通过调控上皮间充质转化(EMT)而抑制食管癌细胞的增殖及迁移能力。