哈士蟆卵油化学成分研究

Three compounds were isolated from the ovum oil of Rana temporaria chensinensis David. by column chromatography,and they were i dentif ied by examining their physical and chemical properties and spectroscopic analys is as cholesterol,palmitote and palmitic acid.The fatty acids in the ovum oil of Rana temporaria chensinensis David. have been analyzed qualitat ively by GC-MS and 21 kinds of the compounds were identified.

中国林蛙卵油的中枢抑制作用

目的揭示CO2 超临界萃取的中国林蛙卵油 (eggoilofRanatemporariachensinensisDavid ,EORTCD)的镇静和抗惊厥作用。方法通过自主活动监测、协同巴比妥催眠和士的宁诱发惊厥等实验 ,探索中国林蛙卵油的药效和最大效能 ,并与安定、佳静安定进行比较。结果EORTCD对小鼠自主活动有明显的抑制作用 ,对戊巴比妥钠诱导的睡眠有协同效果 ,显著对抗士的宁引起的小鼠惊厥反应 ,通过最大效能比较EORTCD的抗惊厥潜伏期长于安定和佳静安定 ,最大效能三者在同一水平。结论EORTCD具有显著的中枢抑制作用 ,对惊厥动物产生保护作用。

中国林蛙卵油的抗焦虑作用

目的研究中国林蛙卵油 (eggoilofRanatemporariachensinensisDavid ,EORTCD)的抗焦虑作用。方法应用高架十字迷路和小鼠爬梯实验评价中国林蛙卵油的抗焦虑活性及其量效、时效关系。结果与对照组比较 ,EORTCD 2 0、4 0 g·kg-1能显著延长大鼠在十字迷路开放通路连续停留时间 ,增加大鼠进入开放通路次数 ,而对封闭通路连续停留时间和进入封闭通路次数无明显影响 ;小鼠爬梯实验中 ,EORTCD 1 4～5 6g·kg-1组小鼠站立数明显减少而爬梯数无显著差异 ;EORTCD抗焦虑时效实验表明在给药后 3 0、60min抗焦虑活性较强 ;γ 氨基丁酸 (γ aminobutyricacid ,GABA) 5 0、1 0 0mg·kg-1分别与EORTCD 1 2 g·kg-1联合给药组的小鼠站立数显著降低而爬梯数无显著减少 ,且比单独给予EORTCD组小鼠站立数少。结论中国林蛙卵油有明显抗焦虑作用。

哈士蟆卵油化学成分研究(Ⅱ)

目的分离鉴定哈士蟆卵油化学成分。方法硅胶、LH 2 0柱色谱分离 ,通过IR、NMR及MS光谱分析法确定结构。结果分得 6个化合物 ,分别鉴定为 (Ⅰ )棕榈酸 α 单甘油酯、(Ⅱ )棕榈酸 α,α′ 甘油二酯、(Ⅲ )油酸 α 单甘油酯、(Ⅳ )硬脂酸、(Ⅴ )棕榈酰胺和 (Ⅵ )棕榈酸乙酯及硬脂酸乙酯。结论 6个化合物均为首次从哈士蟆卵中分离得到。

林蛙卵油脂肪酸组分的分析研究

林蛙卵经石油醚和超临界CO2流体萃取得到林蛙卵油。把林蛙卵油甲酯化,用石英毛细管色谱/质谱法测定其脂肪酸组分。采用石油醚方法萃取得到的林蛙卵油分离出19种组分,不饱和脂肪酸含量为72.38%;采用超临界CO2流体萃取得到的林蛙卵油分离出26种组分,不饱和脂肪酸含量为69.65%。研究结果表明:两种方式获得的林蛙卵油脂肪酸主要组分及含量基本一致,均由C12-22脂肪酸组成,主要不饱和脂肪酸是十六碳烯酸、亚油酸、油酸、EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)等。

林蛙油对冷应激小鼠抗氧化能力的影响

研究林蛙油对冷应激小鼠抗氧化能力的影响,为林蛙油的合理开发和利用提供依据。本实验将40只雄性昆明品系小鼠随机分为4组:对照组、冷应激组、林蛙油5倍剂量组和25倍剂量组,每组10只。对照组和冷应激组灌胃生理盐水,5倍剂量组和25倍剂量组灌不同剂量的林蛙油,每组连续灌胃28d。灌胃到第15天,每天除对照组灌胃后置室温外,其他各组灌胃30min后,置-10℃冰箱30min,连续14d,杀鼠,测血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,林蛙油可以增加小鼠血和脑组织中SOD活性(p<0.01),降低MDA含量(p<0.01),在低温条件下林蛙油能增强小鼠抗氧化能力。

中国林蛙卵油抗士的宁惊厥的机制

目的揭示CO2超临界萃取的中国林蛙卵油(Rana temporaria chensinensis Davidegg oil,EORTCD)抗士的宁惊厥作用的机制。方法以士的宁为致惊剂,评价中国林蛙卵油抗惊厥活性的时效和量效关系。通过利血平耗竭单胺神经递质和奥单西隆阻断5-HT3受体,在士的宁致惊厥的小鼠模型中探讨中国林蛙卵油抗惊厥作用机制。结果中国林蛙卵油给予动物30 min,其抗惊厥作用效果最好。中国林蛙卵油抗惊厥作用呈现良好的剂量-效应关系;利血平耗竭单胺递质后,EORTCD对抗士的宁惊厥的效应消失;奥丹西隆阻断5-HT3受体后,再给EORTCD 1.4 g.kg-1,EOTCD的抗士的宁惊厥作用也被阻断。而高剂量组EORTCD未受奥丹西隆阻断。结论高、低剂量EORTCD抗惊厥作用可能启动不同的通路。低剂量EORTCD抗士的宁惊厥可能与5-HT3受体有关。

一种中国林蛙抗菌肽的光谱研究

从中国林蛙皮中纯化得到了一种抗多种临床多重耐药菌的抗菌肽(RTCⅠ),初步氨基酸组成分析结果表明其不含碱性氨基酸,此抗菌肽在276·5和356·5nm波长光的激发下发射出448nm的荧光,利用傅里叶变换红外光谱、拉曼光谱、电子吸收光谱及荧光光谱等技术研究了此特定荧光产生的结构依据.此抗菌肽的主要组成是Tyr,Asn(Asp)和Glu(Gln),抗菌肽特殊的荧光光谱和电子吸收谱与Tyr的酚羟基和Asn侧链的强氢键有关.这一特殊的荧光(448nm)及圆二色谱(259,263和267nm)信号为进一步在分子水平上研究此抗菌肽的抗菌机理提供了依据.

中国林蛙卵油对高脂血症大鼠降脂作用的观察

目的:揭示CO_2超临界萃取的中国林蛙卵油(egg oil of Rana temporaria chensinensis David,EORTCD)对大鼠血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)以及脂蛋白的影响。方法:用SBA-300型全自动生化分析仪测定连续口服EORTCD前后高脂血症大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯以及血清脂蛋白的含量。结果:连续口服EORTCD 20d后,能明显降低实验性高血脂症大鼠血清TC、TG和低密度脂蛋白(LDL)的含量。结论:EORTCD具有显著的降血脂作用。

林蛙卵油灌胃对于雄激素预处理大鼠妇科内分泌的影响

目的研究初生大鼠注射雄激素后,在成年期给予林蛙卵油灌胃,对于妇科内分泌激素水平的影响。方法乙醇萃取法提取林蛙卵精油,初生期给予雄激素制造动物模型,分为四组:高剂量组、中剂量组、低剂量组和模型组,同时设置正常对照。成年后给予治疗组林蛙卵油灌胃后处死大鼠,子宫和卵巢称重,血清放免法检测各组雌二醇、FSH、孕酮水平。结果模型组子宫及卵巢重量明显低于正常组(P<0.01),而林蛙卵油各剂量均可明显增加子宫及卵巢的重量(P<0.001),尤其以林蛙卵油高剂量组增加的最为明显。模型组卵巢体重之比明显低于正常组(P<0.05),而林蛙卵油各剂量均可明显增加卵巢体重之比(P<0.001),尤其以林蛙卵油高剂量组增加的最为明显。而林蛙卵油各剂量组对子宫体重之比没有明显影响。模型组大鼠血清中FSH、雌二醇、孕酮的含量与正常对照组相比明显降低(P<0.05),而林蛙卵油各剂量组均能明显提高大鼠体内FSH、雌二醇的含量,其中林蛙卵油中剂量对体内FSH含量增加最明显,而林蛙卵油大剂量对体内雌二醇含量增加最为明显,林蛙卵油各剂量组对体内孕酮含量的改变不明显。结论初生期雄激素注射通过影响卵巢发育对于成年内分泌系统造成影响,林蛙卵油可以发挥保护卵巢的作用,进而调节妇科内分泌功能。

林蛙卵油灌胃对雄激素预处理大鼠卵巢凋亡的影响

目的研究初生大鼠注射雄激素后,在成年期给予林蛙卵油灌胃,对于卵巢凋亡的影响,分析林蛙卵油的卵巢保护作用机制。方法乙醇萃取法提取林蛙卵精油,初生期给予雄激素制造卵巢凋亡大鼠模型,分为4组:高剂量组、中剂量组、低剂量组和模型组,同时设正常对照。大鼠成年后给予各剂量组林蛙卵油灌胃后处死,TUNEL检测凋亡比率。结果 TUNEL染色显示模型组的凋亡指数较正常组升高,给予林蛙卵油后,凋亡指数降低(P<0.05)。正常组与模型组之间有显著性差异(P<0.05),中剂量组和大剂量组与模型组比较有显著差异(P<0.05),小剂量组与模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论林蛙卵油可能通过抑制大鼠卵巢细胞的凋亡,发挥保护卵巢的作用。

超临界CO_2流体萃取林蛙卵油的工艺研究

根据超临界流体萃取的基本原理,分析了超临界CO2流体萃取林蛙卵油的主要因素,探讨了萃取压力、温度、时间、CO2流量及水分含量对萃取得率的影响。通过正交实验和单因素试验,研究了萃取得率与各因素之间的关系,并得到了最佳萃取工艺:萃取压力35MPa、萃取温度40℃、萃取时间2.0h,林蛙卵水分含量应低于10%。

中国林蛙皮cDNA文库的构建

目的:为研究林蛙皮抗菌肽,筛选、克隆及表达相关抗菌功能基因,构建林蛙皮cDNA文库。方法:提取林蛙皮总RNA后,利用v-gene纯化试剂盒纯化mRNA,RT-PCR合成双链cDNA;取10ng/μLcDNA按照不同比例连接到λ噬菌体载体,以选择最佳连接比例。结果:获得克隆总数为1.2×105的林蛙皮cDNA文库,重组率为99.4%。结论:所建立的cDNA文库可用于进一步筛选、克隆抗菌功能新基因。

繁殖季节中国林蛙雄蛙血清睾酮水平和性腺变化的研究

对辽宁、吉林两地采集的中国林蛙 (RanatemporariachensinensisDavid .)雄蛙繁殖季节精巢的组织学和睾酮水平进行了测试分析。结果表明 :在周期性生殖活动中 ,精子成熟呈周期性 ,血清睾酮水平的变化与生殖腺所经历的结构变化是一致的 。

中国林蛙卵油对高脂血症大鼠血脂的影响

目的 :揭示CO2 超临界萃取的中国林蛙卵油 (eggoilofRanatemporariachensinensisDavid ,EORTCD)对大鼠血液中总胆固醇 (TC)、三酰甘油 (TG)以及脂蛋白的影响。方法 :用SBA - 30 0型全自动生化分析仪测定连续口服EORTCD前后高脂血症大鼠血清中总胆固醇、三酰甘油以及血清脂蛋白的含量。结果 :连续口服EORTCD 2 0d后 ,高、中、低剂量给药组均能明显降低实验性高血脂症大鼠血清TC、TG和低密度脂蛋白 (LDL)的含量 (P <0 .0 5 ) ,呈现良好的剂量反应关系。对高密度脂蛋白 -胆固醇 (HDL -C)无显著影响。结论

哈士蟆油中脂肪酸的GC、GC-MS分析

用气相色谱（ＧＣ）与气相色谱－质谱（ＧＣ－ＭＳ）联用技术对哈士蟆油中的脂肪酸组成进行了定性与定量分析，共鉴定出１０种脂肪酸并用气相色谱法作了定量，对所得的结果进行了讨论。

哈士蟆-第三代“激素替代疗法”概述

从激素替代疗法的应用历史和激素种类；哈士蟆的文献记载、产地、中医理论、药理、生态习性、营养学、南北方养殖差异等方面对哈士蟆的应用进行了分析论证，提出其应用于“激素替代疗法”的可能性。

中国林蛙蝌蚪期饲料配方的研究

为研究一种适合林蛙蝌蚪生长的饲料配方,试验选用林蛙蝌蚪受精卵共800只,分为4个大组,每大组设两个重复,共8个小组,分别饲养在8个水盆中,每盆100只。试验对比研究了蛋白质含量分别为37.765%、31.628%、23.535%及11.562%的4种饲料。试验结果表明,饲喂蛋白质含量为23.535%的一组蝌蚪重量最大,体长最长,发育的也最为良好。同时通过试验分析证明,从蝌蚪发育到变态前的饲料应以植物性饲料为主并适当的加入部分动物性饲料,这样才有利于蝌蚪的生长发育。此外,还提出用传统方法配制蝌蚪饲料的不足及解决的办法。

重金属在中国林蛙体内富集特征研究

目的通过测定中国林蛙不同部位中重金属的含量,初步诠释重金属在中国林蛙体内富集特征,并阐明中国林蛙药用、食用的安全性。方法采用原子吸收法和原子荧光法,测定中国全体(去除输卵管和卵的雌、雄体)、输卵管和卵中铅、砷、汞、镉、铜的含量。结果 3个产地的中国林蛙输卵管、卵及雌雄蛙全体中重金属含量均符合标准。结论重金属在中国林蛙体内有富集,但并未显示靶向积聚趋势。此研究表明中国林蛙在应用时比较安全。

甘肃地区中国林蛙产油量差异调查

根据甘肃不同地区中国林蛙雌性生殖系统比例分析,甘肃不同产区林蛙出油量平均相差3.43～4.92％,个体间出油率相差达4.65倍。