梓醇对T2DM大鼠大血管病变的保护作用及与oxLDL/LDL和NF-κB信号通路的关系

目的探讨梓醇对2型糖尿病(T2DM)大鼠大血管病变的保护作用与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)/低密度脂蛋白(LDL)和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的关系。方法用高糖高脂饲料喂养和腹腔注射STZ复合因素对大鼠进行T2DM造模,将大鼠分为模型组、二甲双胍组(134 mg·kg^(-1)·d^(-1))、梓醇组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),另设对照组,每组10只,模型组和对照组给予相同体积的0.9%氯化钠溶液,干预4周。结束后,自动生化分析仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平;酶联免疫吸附法测定人巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、oxLDL含量;RT-PCR法检测主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA表达;Western blot检测主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达;透射电镜观察大鼠主动脉内皮细胞结构。结果对照组大鼠主动脉内皮细胞形态正常,模型组细胞显著肿胀,连续性中断、见空泡,部分内皮细胞有显著脱落,细胞核褶皱变形,线粒体、内质网中度肿胀,嵴肿胀紊乱或溶解,见脂滴、糖原颗粒;二甲双胍组和梓醇组内皮细胞形态结构轻微肿胀,线粒体、内质网结构正常,细胞核轻微变形,部分内皮细胞有轻微脱落,损伤程度显著轻于模型组。与对照组比较,模型组血清FBG、TC、TG、LDL水平,MCP-1和oxLDL水平,主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA及蛋白表达量显著性升高(P<0.05);与模型组比较,二甲双胍组和梓醇组血清FBG、TC、TG、LDL水平,MCP-1和oxLDL水平,主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA及蛋白表达量显著性降低(P<0.05)。结论梓醇可能通过oxLDL/LDL和NF-κB信号通路减轻T2DM大鼠大血管病变。

LDL、oxLDL对THP-1巨噬细胞PCSK9、LDLR表达的影响研究

为研究低密度脂蛋白(LDL)、氧化修饰的低密度脂蛋白(oxLDL)对THP-1源性巨噬细胞中PCSK9、LDLR表达的影响及两者之间的关系.分别用0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L的LDL和0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L的oxLDL处理THP-1巨噬细胞,油红O染色检测细胞荷脂情况,免疫荧光检测THP-1巨噬细胞上PCSK9蛋白表达及分布情况,RT-PCR、Western blot检测THP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达.结果发现,不同浓度LDL处理THP-1巨噬细胞后,随着LDL浓度的增大,细胞内脂滴数目略有增多.免疫荧光染色发现,PCSK9在THP-1巨噬细胞上的表达随LDL浓度的增加而增多,胞浆内定位于某一特定细胞器中;RT-PCR、Western blot检测发现,LDL可以呈浓度依赖性下调THP-1巨噬细胞中LDLR的表达和上调PCSK9的表达.不同浓度oxLDL处理THP-1巨噬细胞后,随oxLDL浓度的增大,脂滴颗粒明显增加;oxLDL处理对THP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达影响均不明显.研究结果表明:THP-1巨噬细胞上,同时有PCSK9和LDLR的表达,且PCSK9定位于胞浆中某一特定细胞器;oxLDL对THP-1巨噬细胞LDLR和PCSK9表达没有影响;LDL能够降低THP-1巨噬细胞表面LDLR的表达,同时上调PCSK9表达,初步说明在THP-1巨噬细胞中,两者有一定的相关性.

缺血性脑血管病患者颈动脉斑块与TXB2、OxLDL、Lp(a)、Hcy相关性分析

目的探讨缺血性脑血管病的颈动脉斑块与TXB2、OxLDL、Lp(a)、Hcy的相关性,以更好的对该病进行预防、治疗。方法35例急性缺血性卒中患者和20名正常对照组行颈动脉血管彩色多普勒超声检测颈动脉斑块,采用ELISA双抗体夹心法测定血浆TXB2、OxLDL、Lp(a),采用荧光偏振免疫分析法测定Hcy的含量,两组相比,并作相关性分析。结果斑块最大厚度、血浆TXB2、OxLDL、Lp(a)、Hcy的含量均高于正常对照组(P<0.01)。斑块最大厚度与TXB2、OxLDL、Lp(a)呈正相关。结论颈动脉斑块,血浆TXB2、OxLDL、Lp(a)、Hcy可能与缺血性脑血管病相关;TXB2、OxLDL、Lp(a)可能参与促进颈动脉粥样硬化斑块的形成。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的机制

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达黏附分子的影响,以及Toll样受体4(TLR4)信号通路在其中发挥的作用。方法用单纯培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、LPS分组刺激HUVEC,收集总RNA和蛋白,利用实时定量PCR和Western blot法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管黏附分子1(VCAM-1)和冯·维勒布兰德因子(v WF)的mRNA和蛋白水平;采用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂SB203580(10μmol/L)预处理的方式,探索阻断TLR4通路后,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附分子表达的影响,通过THP-1细胞黏附实验检测oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附能力的影响。结果与培养基对照组相比,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够显著提高HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和v WF表达,并且能够增强HUVEC对THP-1细胞的黏附,TAK-242或SB203580处理能够抑制该过程。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强HUVEC的黏附分子表达和对THP-1细胞的黏附,TLR4和p38MAPK与该过程密切相关。

血清药漏芦对oxLDL诱导U937细胞表面CD36表达的影响

目的观察血清药漏芦对oxLDL诱导U937细胞表面CD36表达的影响。方法先用oxLDL与U937细胞孵育造成泡沫细胞模型,同时用血清药漏芦对泡沫细胞进行干预,采用流式细胞仪检测CD36的表达情况。结果漏芦提取液1000、500、250mg/L可不同程度地抑制CD36的表达,且三者呈剂量依赖关系(P<0.01)。结论漏芦抗AS作用机理可能与其抑制CD36的表达有关。

云芝多糖对冠心病患者血清OxLDL和NO含量的影响

为探讨云芝多糖对动脉粥样硬化（ＡＳ）的治疗作用，我们用氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）单克隆抗体检测和硝酸还原酶法观察了冠心病患者血清ＯｘＬＤＬ和ＮＯ含量的变化以及云芝多糖对这些变化的影响，结果显示：（１）冠心病组血清ＯｘＬＤＬ含量显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ＮＯ含量显著低于正常对照组（Ｐ<０.０１〕；（２）口服云之多糖３０天后冠心病患者血清ＯｘＬＤＬ含量明显下降（Ｐ＜０．０１）而ＮＯ含量显著升高（Ｐ＜０．０１）。提示云芝多糊４冠心病具有一定的治疗作用。

oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物调节A7r5表型转化及脂质转运分子表达

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物(oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab complex)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A7r5)表型转化和细胞表面脂质转运分子的影响,以及toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路在其中的作用。方法分别用oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/抗β2GPⅠ抗体复合物、β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物、oxLDL/β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物刺激A7r5,收集总RNA和蛋白质,利用实时定量PCR、western blot及免疫荧光染色等方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、巨噬细胞表面标志CD68、半乳糖凝集素3(galectin-3,LGALS3)、B类清道夫受体3(CD36)和ATP结合盒转运体(ATP-binding cassette transporter)A1/G1(ABCA1/ABCG1)的表达情况;用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或c-Jun氨基末端激酶1/2(c-Jun N-terminal kinases 1/2,JNK 1/2)阻断剂SP600125(90 nmol/L)预处理的方式,观察TLR4及下游信号分子在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5表型转化和脂质转运分子表达变化的作用。结果 oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物明显上调细胞CD68和LGALS3水平,降低α-SMA表达,而TAK-242能够反转该现象;oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物能够促进细胞表达CD36,同时抑制ABCA1/ABCG1表达,TAK-242和SP600125能够逆转该过程。结论 oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物促进A7r5细胞向"巨噬样"细胞发生表型转变,调节脂质转运相关分子的表达,增强脂质向细胞内转运的能力;TLR4和JNK1/2与该过程密切相关。

血脂、ApoB100、Lp(a)及oxLDL对ASCVD的辅助诊断价值探讨

本文测定了90例ASCVD患者和120例对照的血脂、ApoB100、Lp（a）和oxLDL，以探讨它们对ASCVD的辅助诊断价值．结果表明：对于ASCVD的实验室检查，oxLDL（834±379μg／L对对照组的442±193和446±215μg／L，P＜0．001）可能在特异性和敏感性方面优于其他项目，APoB100亦有显著差异，而LP（a）则是反映遗传背景的一个较好的指标．在常规血脂检测中，HDL-C／TC比值有一定价值．

普罗布考对脑梗死患者急性期血清oxLDL-Ab及MMP-9水平的影响

目的:观察普罗布考对脑梗死患者急性期血清氧化型低密度脂蛋白自身抗体(oxLDL-Ab)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平的影响。方法:采用自身对照和组间对照,将62例急性期脑梗死患者分为两组,其中普罗布考组(32例),常规组(30例)。治疗2周后,用酶联免疫吸附法和酶谱法分别测定治疗前后血清oxLDL-Ab及MMP-9水平的变化。以神经功能评分为标准,分别观察治疗7 d和14 d后两组的疗效。结果:①普罗布考组治疗2周后,血清oxLDL-Ab及MMP-9水平均较治疗前明显降低(均P<0.05),神经功能明显改善(P<0.05)。②治疗2周后,普罗布考组血清oxLDL-Ab及MMP-9水平均较常规组明显降低(均P<0.05),神经功能明显改善(P<0.05)。③普罗布考组治疗前后,血清oxLDL-Ab及MMP-9水平降低无相关性(P>0.05)。结论:普罗布考能降低脑梗死患者急性期血清oxLDL-Ab及MMP-9水平,可能通过稳定动脉粥样硬化斑块,抑制了血-脑屏障的早期开放和脑水肿,从而减轻缺血性脑损伤,防止脑梗死出血转化和再发,并同时提高了患者的近期疗效。

动脉粥样硬化早期病变过程CD36的表达与oxLDL的摄取作用

清道夫受体CD36最初被认为是一种血小板膜糖蛋白和一种血栓反应蛋白受体(TSP1)。近来,CD36也被认为是单核细胞产生的活性氮物质修饰的低密度脂蛋白(LDL)的主要受体,参与包括动脉粥样硬化(AS)在内的许多病理生理过程。该文介绍CD36的生物学特性及其在巨噬细胞源性泡沫细胞形成和AS形成中的作用,以及CD36表达的调控机制。

茶色素及维生素E对冠心病患者血浆vWF、oxLDL水平的影响

目的:本文观察了65例冠心病(CHD)患者口服茶色素及维生素E(VitE)后血浆血管性假血友病因子(vWF)和氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)的改变,并探讨其改变的临床意义。方法:65例确诊为冠心病患者随机给予口服茶色素(375mg/d)、VitE(100mg/d)和安慰剂(粒/天),时间8周。采用酶标法测定血浆vWF和oxLDL。结果:服药前3组CHD患者血浆vWF和oxLDL水平高于正常对照组(P<0.01);与服药前相比,服药4周后,茶色素组、VitE组病人的血浆vWF和oxLDL水平下降(P<0.05);服药8周时,血浆oxLDL水平在茶色素组和VitE组患者均可见进一步下降(P<0.01),而血浆vWF水平则有所不同,茶色素组进一步下降(P<0.01),VitE组病人未见进一步下降,与服药4周时相当(P<0.05);服药前茶色素组、VitE组及安慰剂组3组患者的血浆vWF和oxLDL水平无统计学差异(P>0.05)。结论:CHD患者存在内皮功能不全和动脉血栓形成倾向,茶色素和VitE具有改善内皮功能不全、抑制动脉血栓形成和抑制LDL氧化作用,因而对阻止动脉粥样硬化(AS)的进一步发展可能起到有益作用。

OxLDL诱发大鼠血管内皮细胞凋亡模型的建立

目的 建立OxLDL诱发大鼠血管内皮细胞凋亡的模型。方法 SD大鼠尾静脉注射非氧化的LDL ,2 4h后取主动脉血管内皮细胞铺片 ,采用光学显微镜和荧光显微镜进行形态学观察 ,TUNEL法染色计算凋亡细胞比例。结果 ( 1)静脉注射LDL组观察到明显的凋亡形态学改变 ,对照组未见凋亡内皮细胞 ;( 2 )静脉注射LDL ( 4mg/kg、 6mg/kg、8mg/kg)组凋亡细胞比例分别为 8 10 %、 18 92 %、 2 2 0 3 % ,三组间有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论 ( 1)尾静脉注射LDL后 2 4h可引起血管内皮细胞凋亡 ;( 2 )

oxLDL对U937细胞SR-AⅠ及ABCA1 mRNA表达的影响

目的以人单核细胞株U937为研究对象,观察在氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下U937细胞清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA的表达情况。方法以不同质量浓度的oxLDL(0、25、50、75、100、125 mg/L)与U937细胞共同培养48 h,然后进行油红O染色以了解其胞内脂质含量,同时用实时荧光定量PCR方法检测其ABCA1和SR-AⅠmRNA的表达量。结果单核细胞ABCA1和SR-AⅠmRNA在无oxLDL干预下其表达最低;oxLDL可诱导ABCA1和SR-AⅠmRNA的表达,与无oxLDL干预组比较差异有统计学意义(P均<0.01);ABCA1 mRNA在50 mg/L oxLDL干预下表达最强,其后随着oxLDL培养浓度的增加其表达反而下降;SR-AⅠmRNA表达为逐渐增高,50 mg/L oxLDL干预时表达最强。结论 U937细胞随着oxLDL干预浓度的提高其ABCAl mRNA和SR-AⅠmRNA表达呈先增高后降低的趋势,在50 mg/L oxLDL时表达最高;二者在泡沫细胞形成过程中起着非常重要的作用。

人oxLDL自身免疫复合物的体外致动脉粥样硬化作用

目的:观察oxLDL自身免疫复合物对U937巨噬样细胞泡沫化和活化的影响,以探讨oxLDL免疫学反应致动脉粥样硬化的机制。方法:采用密度离心法从健康人血浆中提取低密度脂蛋白(LDL),用铜离子氧化成oxLDL;用亲和层析法从136例住院患者血清中提取oxLDL自身抗体。在体外制成2种形式不同的免疫复合物:聚乙二醇沉淀的不溶性免疫复合物(PEG IC)和RBC吸附的可溶性免疫复合物(RBC IC),把这2种免疫复合物加至U937巨噬样细胞的培养基中,以oxLDL作阳性对照,并用热聚合人γ球蛋白(HAGG)封闭Fcγ受体作阻断对照,检测干预后的各组U937巨噬样细胞内胆固醇和胆固醇酯及培养基中基质金属蛋白酶1 (MMP 1 )的水平。结果:RBC IC干预组与RBC吸附oxLDL(RBC oxLDL)干预组比较,U937巨噬样细胞培养基中MMP 1蛋白表达[ (0. 769±0. 030)ng/mlvs(0. 513±0. 034)ng/ml,P<0. 01]和细胞内胆固醇酯蓄积[ (20. 271±1. 668)μg/mgvs(17. 226±1. 298)μg/mg,P<0. 05]明显升高;而在PEG IC组这种作用则更为明显,且呈剂量依赖性。用10mg/ml的HAGG封闭Fcγ受体后,MMP 1的水平下降约71%,其对巨噬样细胞泡沫化和活化的作用都受到明显的抑制。结论:oxLDL自身免疫复合物能够促进巨噬细胞泡沫化和活化,

辛伐他汀及oxLDL对人脐静脉内皮细胞蛋白激酶C活性和胞质内游离钙水平的影响

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (ox L DL)及 3-羟基 - 3甲基戊二酰辅酶 A(HMG- Co A)还原酶抑制剂辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞 (HU VEC)蛋白激酶 C(PKC)活性和胞质内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。 方法 :HUVEC的 PKC活性采用γ- 32 P- ATP磷酸转移法 ,细胞内游离钙采用 Fluo- 3/ Am荧光负载 ,流式细胞术检测。 结果 :ox L DL呈剂量依赖方式促进 HU -VEC PKC活性增加 ,12 min时达峰值 ,然后缓慢下降 ,30 m in时仍维持较高水平 ;胞质内 [Ca2 + ]i升高分快速相和持续相 2个时相 ;移去细胞外液钙 ,ox L DL仍引起快速相 ,但持续相消失 ;辛伐他汀则能明显抑制 ox L DL引起的 HU VEC PKC活性增加 ,并显著降低持续相胞质内钙水平 ,而对快速相无影响。 结论 :ox L DL能引起 HUVEC内信号通路 PKC及 [Ca2 + ]i的动态变化 ,二者密切相关。 ox L DL刺激 HUVEC [Ca2 + ]i升高的快速相是由胞质钙池释放引起 ,持续相升高主要由胞外钙内流引起。辛伐他汀抑制 HU VEC PKC活性可能是通过胞内 [Ca2 +

急性冠状动脉综合征患者血清抗apoA-1IgGs与oxLDL的相关性研究

目的研究急性冠状动脉综合征患者血清抗载脂蛋白A-l抗体的阳性率、血清oxLDL的水平和PON-1的活性,并探讨它们之间的相关性。方法选取68例急性冠状动脉综合征患者,以健康中老年人体检者70例为对照组,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗apoA-1IgGs的阳性率和血清oxLDL的水平,紫外分光光度法测定PON-1的活性。结果急性冠状动脉综合征组患者体内的apoA-1IgG和oxLDL水平比对照组明显升高(P<0.001),急性冠状动脉综合征组患者的抗apoA-1 IgGs阳性率为14.7%,阳性患者血清抗apoA-1IgG的滴度与其oxLDL水平存在正相关(r=0.469,P<0.05),而血清PON-1的活性差异无统计学意义。结论自身抗体抗apoA-1IgGs可能参与冠状动脉粥样硬化反应的发生与发展;急性冠状动脉综合征患者升高的oxLDL水平可能与抗apoA-1IgGs有关。

oxLDL/β_2GPⅠ复合物与自身免疫背景下AS的关系

在动脉粥样硬化发展过程中,动脉内膜上形成的oxLDL/β2GPⅠ复合物可以释放到循环血液中。在SLE、APS等自身免疫疾病中,可以检测到抗oxLDL/β2GPⅠ复合物的自身抗体,与动脉血栓的形成有高度相关性。本文就自身免疫疾病背景下,对oxLDL/β2GPⅠ复合物的存在、生物学功能及其与动脉粥样硬化关系的研究进展进行综述。

应用原子力显微镜实时观察oxLDL对大鼠脑微血管内皮细胞膜结构的影响

目的 应用原子力显微镜 (AFM)实时观察体外培养的内皮细胞膜表面超微结构 ,并观察氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)的影响。方法 以体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞为材料 ,用AFM观察 80 μg/mloxLDL对细胞膜的影响。 结果 AFM可以观察内皮细胞表面纳米超微结构 ,oxLDL可引起超微结构改变。结论 首次用AFM观察oxLDL对微血管内皮膜的影响 ,AFM在高脂血症实验研究中有应用前景。

L-4F对oxLDL刺激下脂肪细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察载脂蛋白A-I模拟肽L-4F对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下3T3-L1脂肪细胞分泌表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL(50μg/ml)刺激脂肪细胞,给予L-4F(1-50μg/ml),H-89(10μmol/L)及H-89+L-4F(50μg/ml)干预,收集细胞,测定脂肪细胞MCP-1上清液中的浓度和mRNA表达水平,以及脂肪细胞核因子C/EBPα、β的蛋白质水平;改良Boyden小室法检测不同干预组上清液对人外周血单核细胞趋化活性的影响。结果 OxLDL(50μg/ml)刺激使分化成熟的3T3-L1脂肪细胞表达及分泌MCP-1明显增加,并使得诱导的单核细胞移动距离明显增加。L-4F以浓度依赖的方式减少脂肪细胞MCP-1的表达和分泌,降低单核细胞趋化活性;50μg/ml L-4F使MCP-1 mRNA的表达降低(91±6)%(P<0.01)。PKA抑制剂H-89(10μmol/L)干预oxLDL刺激的脂肪细胞后MCP-1 m RNA的表达也显著减少(P<0.01),但是,在50μg/ml L-4F作用的基础上,H-89(10μmol/L)的孵育并未使得MCP-1 mRNA的表达进一步降低(P>0.05)。50μg/ml oxLDL刺激对脂肪细胞C/EBPα的含量无明显影响,但增加C/EBPβ蛋白量,且该作用呈时间依赖性;L-4F和H-89干预均降低C/EBPβ的蛋白质含量。结论 OxLDL时间依赖性地诱导脂肪细胞C/EBPβ的蛋白合成,并增强脂肪细胞MCP-1的表达分泌,L-4F以浓度依赖的方式对抗oxLDL的致炎作用,cAMP/PKA-C/EBPβ信号通道可能是L-4F的作用途径之一。