Ozanimod(RPC1063)在少突胶质前体细胞分化中的作用和机制

目的:研究Ozanimod(RPC1063)在少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)分化中的作用,并初步探讨其分子机制。方法:利用免疫吸附法直接分离OPC诱导培养,使用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)对细胞进行鉴定。qRTPCR法检测大脑皮层发育、OPC分化过程中的S1pr家族基因mRNA水平变化。OPC经不同浓度RPC1063处理后,使用MTT法、ATP细胞活性检测法、免疫荧光染色、qRT-PCR和Western blot检测RPC1063对OPC分化细胞数目、mRNA或蛋白水平的影响。结果:利用免疫吸附法可获得高纯度的OPC;而MTT、ATP检测结果显示在0、0. 1、1、5、50、100nmol/L浓度下,RPC1063对细胞活性无明显影响。进一步研究发现,RPC1063处理OPC后,O4、MBP阳性细胞形态舒展,MBP蛋白表达量增加,OPC分化相关基因Mbp、Mag、Sox10、Cnp的mRNA水平增加。机制上,少突胶质细胞系Oli-neu或OPC经RPC1063处理5min后,AKT-mTOR信号通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR、p-4EBP1显著增加,OPC经RPC1063处理48h后,p-AKT、p-mTOR蛋白水平增加;而抑制m TOR活性,RPC1063作用减弱。结论:RPC1063通过AKT-mTOR信号通路促进少突胶质前体细胞的分化。