RNA干扰靶向抑制PI3K p85α表达对5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达对5-FU诱导大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法培养已成功沉默PI3Kp85α表达的大肠癌LoVo细胞(PI3Kp85α/RNAi-LoVo)及LoVo对照组细胞,MTT法计算两组细胞5-FU的半数抑制率(IC50),JC-1染色检测线粒体膜电位(Δψm)的变化,Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达。结果 PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞组5-FU的IC50值(1.056±0.03562μmol/L)显著低于LoVo对照组(2.796±0.10947μmol/L)(P=0.000),JC-1染色显示5-FU刺激48h后,PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞线粒体膜电位较LoVo对照组细胞显著降低,表明PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞对5-FU更敏感。5-FU刺激48h后,PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞组凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达较LoVo对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达可促进5-FU诱导大肠癌细胞LoVo的凋亡。

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌细胞的促凋亡作用

探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达联合5-FU对大肠癌LoVo细胞的促凋亡作用。方法复苏培养PI3K p85α干扰组LoVo细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-LoVo)和LoVo对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,MTT法检测5-FU对两组细胞的半数抑制浓度(IC50),Annexin-FITC标记法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示LoVo干扰组细胞PI3K p85α蛋白抑制率为59%,MTT结果显示干扰组细胞5-FU的IC50值(4.57±0.16)μmol/L明显低于对照组细胞5-FU的IC50值(8.07±0.30)μmol/L(P=0.000),细胞凋亡实验显示,干扰组细胞对5-FU诱导凋亡的敏感性增加(P=0.000)。结论 PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU可促进大肠癌LoVo细胞凋亡,为基因治疗和化学药物联合治疗大肠癌提供新的策略。

PI3Ks新型抑制剂NVP-BEZ235对食管鳞癌的抑制作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)新型抑制剂NVP-BEZ235(Dactolisib)对食管鳞癌体内外模型的抑制作用,为食管鳞癌的靶向治疗提供参考。方法采用免疫印迹(Western blot)法检测食管鳞癌细胞系中磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(PI3K-p85α)蛋白的表达情况;对食管鳞癌的细胞系分别给予0,1,4,8,16,32,64,128 nmol/L浓度的NVP-BEZ235,采用MTT法检测生长情况,计算细胞生存率及半数抑制浓度(IC50);对PI3K-p85α高表达及低表达的食管鳞癌细胞系分别予10 nmol/L NVP-BEZ235,观察细胞集落形成情况;建立裸鼠皮下移植瘤模型,评估NVP-BEZ235的体内治疗效果。结果PI3K-p85α高表达的食管鳞癌细胞系KYSE30,KYSE70,KYSE510,TE1对NVP-BEZ235更敏感,IC50分别为4.92,5.43,4.76,7.78 nmol/L;而PI3K-p85α低表达的细胞系KYSE150,KYSE180,KYSE270,KYSE450对NVP-BEZ235的敏感度较低,IC50分别为13.21,18.44,20.37,48.45 nmol/L。加入10 nmol/L NVP-BEZ235进行的集落形成实验结果相似,KYSE30,KYSE70,KYSE510,TE1的集落数目少于KYSE150,KYSE180,KYSE270,KYSE450的集落数目。在裸鼠皮下移植瘤模型中,较低浓度(10 mg/kg)的NVP-BEZ235即可抑制食管鳞癌皮下移植瘤的生长。结论NVP-BEZ235对食管鳞癌细胞系和裸鼠移植瘤都有明显的抑制作用,在PI3K-p85α高表达的食管鳞癌细胞系中抑制效果更明显,在食管鳞癌中具有一定靶向性,可为后期的临床试验提供参考。

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制

目的:探讨PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌SW480细胞促凋亡作用的机制。方法:复苏培养PI3Kp85α干扰组SW480细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480)和SW480对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,采用Western blot方法比较两组细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim表达的差异。结果:Western blot结果显示SW480干扰组细胞PI3Kp85α蛋白抑制率为84%,5-FU刺激48h后,PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480细胞组凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim的表达较SW480对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU可通过增加促凋亡蛋白的表达促进大肠癌SW480细胞凋亡,为进一步阐明大肠癌细胞恶性增值的分子机制打下基础。

P-85离心机卸盐槽磨损的原因与对策

离心机是加工盐生产线上的关键设备,离心机的运行直接影响生产线的产能和成品质量,卸盐槽是离心机的重要部件,由于其承载盐粒的打击、磨损及腐蚀,往往会造成使用寿命太短,经常要更换,造成运行成本增加,文章分析了原因,找出了对策,可供参考。

PI3K p85α在大肠癌癌变过程中的表达及意义

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3K p85α)在大肠癌癌变过程中,即大肠正常组织、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测116例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有明显统计学意义(P<0.05)。统计分析显示在大肠癌中PI3K p85α蛋白与患者的肿瘤分化程度无关,但是与临床分期相关(P<0.05)。结论在大肠癌的发生发展过程中存在PI3K p85α蛋白的异常表达并与临床分期密切相关,PI3K/AKT信号传导通路在大肠癌癌变过程中有重要作用。

PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法、Western blot和ELISA法检测116例甲状腺乳头状癌组织、90例甲状腺乳头状增生组织中PI3Kp85α蛋白的表达情况,并分析蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。利用ROC曲线评价PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌诊断中的价值。结果:PI3Kp85α蛋白的阳性表达率在甲状腺乳头状癌组织中显著高于甲状腺乳头状增生组织(69.8%vs.31.1%),2组间差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺乳头状癌中,PI3Kp85α蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05);PI3Kp85α诊断甲状腺乳头状癌的ROC曲线下面积为0.966,当cut-off值取2.100时,诊断灵敏度(为92.2%)和特异度(为91.1%)较高。结论:甲状腺乳头状癌组织中PI3Kp85α蛋白的阳性表达率明显升高,且其表达水平与淋巴结转移和肿瘤分期相关,可能作为评估甲状腺乳头状癌侵袭性及预后的指标。

RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白对大肠癌细胞侵袭与转移的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的LoVo细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达77%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。细胞划痕实验显示,干扰组细胞的划痕愈合能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失可明显降低大肠癌LoVo细胞的迁移运动能力,PI3Kp85α可能成为治疗大肠癌转移的新靶点。

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞增值的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。

体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的探讨小干扰RNA(siRNA)技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组(P<0.05)。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80%,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85αsiRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85αsiRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组(P<0.05)。Transwell实验显示,PI3Kp85αsiRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组(P<0.05)。结论通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

PI3KP85α在高脂高糖喂养妊娠期大鼠肝脏中的表达及其与胰岛素抵抗的关系

目的探讨高糖高脂喂养妊娠大鼠肝脏组织磷脂酰肌醇3激酶p85α(PI3KP85α)mRNA的表达及其对妊娠期胰岛素抵抗的影响。方法健康6周龄雌性SD大鼠40只,分为4组:高糖高脂饮食-孕鼠组(SFP)、高糖高脂饮食-未孕组(SFV)、普通饮食组-孕鼠组(NP)及普通饮食组-未孕鼠(NV),每组各10只。SFP、NV组大鼠与雄性大鼠配对受孕,在妊娠第20天禁食水12小时后测空腹血糖和胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数;应用RT-PCR测定肝脏组织PI3KP85αmRNA的表达。结果 SFP组胰岛素抵抗指数(11.29±0.28)肝脏组织P13KP85αmRNA的表达量(1.04±0.16)明显高于其他组,差异有统计学意义(F=38.67,P<0.01;F=36.70,P<0.01);SFV组P13KP85αmRNA的表达与胰岛素抵抗指数呈正相关(F=0.81,P<0.01)。结论高糖高脂喂养妊娠大鼠,肝脏组织PI3KP85αmRNA明显升高,P13KP85α的高表达可能是导致妊娠期胰岛素抵抗进而发生妊娠期糖尿病的原因之一。

槐耳颗粒对MDA-MB-231细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路表达的影响

目的探讨槐耳颗粒对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的影响。方法将三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞用含不同浓度的槐耳颗粒的DMEM高糖培养基(分组为0、2、4、8 mg/mL)进行培养,采用细胞计数试剂法检测24小时、48小时、72小时的细胞活性,原位末端转移酶标记技术法细胞爬片染色检测干预48小时后的细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法测定细胞内磷脂酰肌醇3、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达情况。结果(1)与空白对照组(0 mg/mL)相比,槐耳颗粒(2、4、8 mg/mL)组的MDA-MB-231细胞均出现活力下降,且呈时间及浓度依赖性,具有统计学意义(P<0.05);(2)与空白对照组相比,槐耳颗粒组的MDA-MB-231细胞凋亡增高,呈浓度依赖,且具有统计学意义(P<0.05);(3)与空白对照组相比,经槐耳颗粒处理的MDA-MB-231细胞磷脂酰肌醇3、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达均出现不同程度下降,具有统计学意义(P<0.05)。结论槐耳颗粒具有针对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤作用,且具浓度及时间依赖性,其机制可能与对磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路的抑制有关。

亚硒酸钠提高青春期大鼠胰岛素敏感性的作用途径

目的探讨亚硒酸钠改善青春期胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性的细胞机制。方法以高脂饮食制备的青春期胰岛素抵抗大鼠模型离体肝细胞为研究对象,分别用阴离子交换树脂层析法和RT-PCR法检测肝细胞肌醇三磷酸(IP3)含量、磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚基(PI3Kp85α)mRNA和硒蛋白P(Se-P)mRNA表达量,同时观察体内外补硒对上述指标的影响。结果青春期胰岛素抵抗大鼠离体肝细胞Se-PmRNA、PI3Kp85αmRNA表达量和IP3含量均降低,以前两者更加明显;补硒组大鼠肝细胞Se-PmRNA水平升高,PI3Kp85αmRNA和IP3达正常组水平;在胰岛素刺激下,补硒组大鼠肝细胞PI3Kp85αmRNA和IP3水平与正常组相似,均较单纯高脂组明显改善;PI3K特异性抑制剂wortmannin抑制后,补硒组肝细胞IP3水平虽然升高,但仍低于正常组水平。结论亚硒酸钠改善青春期胰岛素抵抗大鼠的胰岛素敏感性,可能与改善肌醇磷脂PI3K信号通路有关,而对IP3水平的调节作用不及胰岛素。

白藜芦醇通过PI3K p85/Akt信号轴抗HepG2肝癌细胞增殖

目的研究白藜芦醇对肝细胞癌细胞增殖的影响,并进一步研究其影响机制。方法以不同浓度(0、12.5、25.0和50.0μmol/L)的白藜芦醇分别处理对数生长期的HepG2细胞,采用CCK8法和实时细胞分析仪(RTCA)系统检测细胞的增殖情况。4组细胞处理48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p85、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、总蛋白激酶B(t-Akt)和细胞周期素A2(CyclinA2)蛋白的表达。结果白藜芦醇对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,并且随着时间的延长和白藜芦醇浓度的增高,HepG2细胞的活力越来越低。白藜芦醇作用48 h后,各个浓度白藜芦醇对细胞的抑制效应逐渐增大,且50.0μmol/L浓度下细胞的抑制效应最大。进一步的RTCA系统研究也发现,白藜芦醇对HepG2细胞的NCI值降低作用具有时间浓度依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,12.5、25.0和50.0μmol/L白藜芦醇可以诱导HepG2肝癌细胞发生细胞凋亡。Western-blot结果表明,与0μmol/L比较,12.5、25.0和50.0μmol/L白藜芦醇可以降低HepG2细胞内PI3K p85、p-AKT和CyclinA2蛋白的表达水平(P<0.05),但4组细胞内的t-Akt的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇可能通过PI3K p85/Akt信号轴来达到抗肝癌细胞增殖的作用,这为HCC的药物治疗提供了新的思路。

匙羹藤提取物干预KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的实验研究

目的:探讨匙羹藤(GS)改善KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法:KKAy小鼠分为模型组(DM)和GS组,C57BL/6J小鼠为正常组(NC),给药8周后测定血清胰岛素(Fins)、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶增殖体受体-γ(PPAR-γ)、PI3κ-p85、Cb1衔接蛋白(CAP)、葡萄糖转运蛋白4(GluT-4)mRNA水平。结果:与DM比较,FPG、Fins降低,ISI升高,PPAR-γmRNA、PI3κ-p85mRNA、CAPmRNA、GluT-4 mRNA表达量升高。结论:GS可上调脂肪组织PPAR-γ、PI3κ-p85、CAP、GluT-4mRNA的表达量,改善IR。

PI3K p85α在大肠癌侵袭转移过程中的表达及意义

目的研究PI3K p85α在大肠癌侵袭和转移过程中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测123例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系;培养已成功沉默PI3K p85α表达的大肠癌Lovo细胞(PI3K p85α/RNAi-Lovo)及Lovo对照组细胞,肿瘤细胞侵袭实验(transwell)和划痕愈合实验观察PI3K p85α对lovo细胞的侵袭和转移能力的影响,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果 PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。PI3K p85α/RNAi-Lovo细胞组侵袭和转移能力明显低于对照组;MMP-2表达量及活性显著降低。结论 PI3K p85α蛋白可能在大肠癌的侵袭和转移中起重要作用,沉默PI3K p85α基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶的分泌及活性,因而PI3K p85α影响lovo细胞的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关。

人参皂苷Rb_1和罗格列酮联合用药对2型糖尿病痴呆小鼠记忆功能的影响及机制

目的:研究人参皂苷Rb1和罗格列酮联合用药对2型糖尿病记忆障碍小鼠动物学习记忆能力及胰岛素信号通路的影响。方法:雄性10周龄C57BL小鼠16只为正常组(N组),雄性10周龄Kkay小鼠64只为模型组,高糖高脂饲料喂养6周后,检测随机血糖≥13.9 mmol·L-1后随机分为模型组(M组)、阳性组(P组)、联合给药高、中、低剂量组(C1,C2,C3组)。P组每天用马来酸罗格列酮片按3.0 mg·kg-1灌胃,C组每天用马来酸罗格列酮片(3.0 mg·kg-1)和人参皂苷Rb1(60,30,15mg·kg-1)灌胃,N组和M组每天用等体积生理盐水灌胃,持续42 d。给药前后分别进行1次Morris水迷宫试验,记录结果并做比较。水迷宫后及时于冰上开颅取海马。采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)小鼠血浆胰岛素水平;半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠大脑海马中1-磷脂酰肌醇-3激酶亚基p85(PI-3K/p85)的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果:与正常组相比,模型组在水迷宫试验中寻找平台的时间及错误率明显偏高(P<0.05),血浆胰岛素水平和PI-3K/p85水平均明显升高(P<0.05);与模型组相比,罗格列酮组与之各项指标差异均不明显,复合给药组平台潜伏期均明显降低(P<0.05),血浆胰岛素水平和PI-3K/p85水平均明显降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rb1能在改善血浆胰岛素水平的基础上,有效提高胰岛素抵抗型糖尿病记忆障碍小鼠学习、记忆能力,其可能的作用机制为通过降低PI-3K/p85表达水平改善大脑海马胰岛素信号传导通路。