新型p-21活化激酶4抑制剂的研发进展

目的研究p-21活化激酶4(p21-activated kinase 4,PAK4)抑制剂在肿瘤治疗中的应用,为新型PAK4抑制剂的研发提供参考。方法从母核结构、共晶结构、药物活性、药代动力学、作用机制等方面,对小分子PAK4抑制剂进行论述。结果在多种PAK4抑制剂结构类型中,苯并呋喃类化合物KPT-9274对PAK4的抑制活性显著,对多种癌症具有抗肿瘤作用,是目前唯一处于临床试验阶段的PAK4抑制剂,可以作为今后PAK4抑制剂设计的基础。结论对苯并呋喃类化合物进一步结构优化,有望获得活性更优的PAK4抑制剂用于抗肿瘤研究。

人脑星形细胞瘤P^(21WAF1)/CIP1的表达与P^(53)、MDM2及细胞增殖指数间的关系

目的 探讨P^(21)、P^(53)和MDM2表达与人脑星形细胞瘤发生、发展及与细胞增殖指数间的关系。方法 用免疫组化技术检查41例石蜡包埋的人脑星形细胞瘤标本P^(21)、P^(53)和MDM2蛋白的表达和由增殖细胞核抗原（PCNA）反映的细胞增殖程度，同时用RNA原位杂交技术检测24例新鲜人脑星形细胞瘤标本的p21 mRNA表达情况。结果p21 mRNA原位杂交检查中无论是高级别肿瘤组或低级别肿瘤组，表达均有明显的差异。免疫组化检查中P^(21)、P^(53)、 MDM2和PCNA的阳性率分别为75．6%、68．3%、65．9%和100%。P21蛋白表达在高级别肿瘤中较高(P ＝ 0．001)，且与细胞增殖指数明显相关，但与P^(53)表达和MDM2表达无明显相关。P^(53)表达与肿瘤组织学分级无关(P ＝0．424)，但与细胞增殖指数明显相关。MDM2表达与肿瘤组织学分级无关(P ＝ 0．812)，与细胞增殖指数亦无明显相关性。多元线性逐步回归分析表明，细胞增殖指数(PCNALI)和P21标记指数与肿瘤组织学分级有密切关系(P ＝ 0．000和P ＝ 0．001)。结论 （1）p21 mRNA和P21蛋白在人脑星形细胞瘤中过度表达,其与细胞增殖指数相关,但与P^(53)表达无关,表明可能有不依赖于P^(53)的通路诱导P^(21)表达。仅有P^(21)过度表达对抑制肿瘤生长是不够的,还需要PCNA参与；（2）P^(53)?

p^(21)/waf1调节血管紧张素Ⅱ的抗增生作用

为了研究血管紧张素 (Ang )的抗内皮细胞增生作用及其分子生物学调节机制 ,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第 3代 ,用 Ang 培养并在不同时间计数细胞密度。用 TUNEL 或 EL ISA方法证明 Ang 或 CGP42 112 A诱导内皮细胞凋亡。用 RT- PCR和 Western Blot检测 p2 1 / waf1m RNA和 P2 1 蛋白的表达并测定条带的光密度。结果表明 ,在 Ang 培养后不同时间 ,细胞密度比对照减少 30 %左右 (P<0 .0 1)。Ang 作用后可以诱导典型的凋亡 ,阳性率极显著高于阴性对照组并具有剂量依赖性。Ang 组或 CGP42 112 A组的 p2 1 / waf1m RNA表达分别是对照组的 (4 73.6 9± 39.97) %和 (391.5 8± 48.2 4) %(P<0 .0 1)。Ang 组的 P2 1 蛋白表达比对照组极显著地增加并具有时间依赖性。认为 Ang 具有抗内皮细胞增生作用 ,其细胞内机制是同时诱导凋亡和 p2 1 / waf1m RNA与 P2 1 蛋白的高表达 ,使细胞发生 G1 期阻滞 ,增殖受抑。

胃癌和非癌病变rasP^（21）表达的定量研究

应用流式细胞术对胃癌和胃粘膜的非癌病变组织细胞ｒａｓ癌基因蛋白产物Ｐ￣（２１）表达进行了定量研究，并探讨了ｒａｓＰ￣（２１）表达与ＤＮＡ倍体与增殖指数的关系。结果表明，胃癌Ｐ￣（２１）表达量明显高于非癌病变组织的表达量。胃粘膜非癌病变组织中，胃癌前病变组织Ｐ￣（２１）表达量明显高于慢性萎缩性胃炎组织的表达量，并发现Ｐ￣（２１）蛋白的表达量与胃癌和癌前病变组织学分级、ＤＮＡ倍体、增殖指数密切相关。

大鼠全脑缺血再灌流后脑组织P^(53)及P^(21)蛋白的表达

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌流后Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达及其与迟发性神经元死亡（ＤＮＤ）的关系。方法 在４ 血管闭塞法全脑缺血模型上，采用ＨＥ及ＬＳＡＢ染色法，观察脑组织病理改变，检测脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，以及蛋白合成抑制剂放线菌酮对其的影响。结果 全脑缺血１５ ｍ ｉｎ 再灌流后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，且两者分布接近。海马结构、丘脑、下丘脑等白质区（再灌流后６ ｈ）较皮层、海马的神经细胞核（２４ ｈ）先检测到Ｐ５３、Ｐ２１蛋白，７２ ｈ 表达达高峰。并且以缺血损伤最严重的海马ＣＡ１ 区Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达为强。另外，放线菌酮可抑制脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，并对ＤＮＤ具有一定的保护作用。结论 全脑缺血再灌流损伤后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，放线菌酮可抑制其表达，并对ＤＮＤ起保护作用，提示Ｐ５３、Ｐ２１蛋白参与了全脑缺血后ＤＮＤ的凋亡机制。

舌鳞状细胞癌组织中p^(53)、p^(21)和bcl-2基因蛋白的表达

【目的】研究 p5 3、p2 1和bcl 2基因蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。【方法】用免疫组化SP法检测 5 4例舌鳞状细胞癌组织标本p5 3、p2 1和bcl 2癌基因蛋白表达。【结果】舌鳞状细胞癌组织中p5 3、p2 1和bcl 2蛋白阳性率分别为 46 %、6 1%、46 % ;p5 3和 p2 1蛋白表达与肿瘤细胞分化程度及颈淋巴结转移有关 (P <0 0 5 ) ;p5 3蛋白表达与 p2 1蛋白表达有关 (P <0 0 5 ) ,bcl 2基因蛋白表达与 p5 3或p2 1基因蛋白表达无关 (P >0 0 5 )。【结论】舌鳞状细胞癌组织中具有较高的 p5 3、p2 1和bcl 2癌基因蛋白表达 ;p5 3和 /或p2 1蛋白阳性病例恶性程度高 ,易发生颈淋巴结转移。p5 3和 /或 p2

幽门螺杆菌L型感染与PCNA、P^(21)、P^(53)表达关系的探讨

目的：探讨幽门螺杆菌L型（Hp-L型）可能的致癌机理。方法：应用免疫组化S-P法对Hp-L型阳性和阴性胃病变组织的PCNA、P21、P53表达进行对比分析。结果：胃癌、癌前病变的PCNA、P21、P53表达显著高于慢性浅表性胃炎和正常粘膜；Hp-L型阳性组的PCNA、P21、P53表达也明显高于Hp-L型阴性组（P＜0．01，P＜0·05）。表明Hp-L型感染与胃病变组织的PCNA、P21、P53过度表达存在着相关性。提示，Hp-L型感染时胃粘膜处于高增殖状态。结论：Hp-L型参与了ras原癌基因激活和P53抑癌基因的失活，基因突变可能是Hp-L型致胃癌作用的机制之一。

碳酸锂对抗黄曲霉素B_1诱导大鼠肝癌前病变过程中P^(21)、Bcl-2蛋白的表达

采用肝癌发生的动物模型，观察了碳酸锂（Ｌｉ２ＣＯ３）对抗黄曲霉素Ｂ１（ＡＦＢ１）诱发的大鼠肝癌前病变的组织形态学变化及其Ｐ２１、Ｂｃｌ－２蛋白的表达状况。Ｗｉｓｔａｒ大鼠１４４只随机分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组，分别为阴性、阳性对照及Ｌｉ２ＣＯ同时给药和Ｌｉ２ＣＯ３先期给药组。于实验第６、９、１０ｗｋ分批断头处死动物，取动物的肝脏进行组织形态学检查及免疫组织化学染色。结果发现：Ｃ、Ｄ两组动物健康状况明显改善，肝癌前病变程度明显减轻；Ｐ２１、Ｂｃｌ－２蛋白在诱癌早期（实验第６ｗｋ）即有表达，第９、１０ｗｋ显著提高，呈Ｂ组＞Ｃ组＞Ｄ组＞Ａ组的趋势，与各组肝脏组织形态学变化一致。提示：Ｌｉ２ＣＯ３具有明显地对抗和预防化学诱导肝癌的作用，Ｐ２１、Ｂｃｌ－２蛋白的动态检测有助于肝癌的早期发现及判断预后。

口腔白斑及鳞癌病理组织中ras癌基因P^(21)蛋白表达

口腔白斑及鳞癌为口腔临床中常见的癌前病损和恶性病变。本研究应用免疫组化技术（ＡＢＣ法）检测口腔鳞状细胞癌及白斑组织中ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１蛋白的表达。检测结果表明：在４０例口腔鳞癌中Ｐ２１蛋白阳性表达率为９２．５０％；２１例口腔白斑病变中其阳性率为１９．０５％。Ｐ２１阳性表达位于分化差的癌细胞膜及胞浆内，且阳性表达与临床病理分级呈正相关，提示Ｐ２１蛋白检测可以作为癌及癌前病损预后观察的客观指标。

角化棘皮瘤和鳞状细胞癌P^(21)和P^(53)蛋白表达的比较研究

目的：通过检测P21和P53蛋白在角化棘皮瘤（KA）和鳞状细胞癌（SCC）中的表达，探讨两病之间的关系。方法：用免疫络化技术检测11例KA和28例SCC皮损部位P21和P53蛋白的表达。结果：P21蛋白在KA和SCCⅠ-Ⅱ中的表达密度分级有统计学意义（P＝0．02）。P53在两病的表达无统计学差异。结论：P21和P53在KA和SCC中表达的异同不能作为KA和SCC的鉴别诊断指标。

P^(21)、nm23-H1与食管癌浸润和转移的关系分析

目的探讨P21、nm23-H1与食管癌浸润和转移的关系。方法应用免疫组织化学法,检测食管癌P21和nm23-H1的表达。结果P21和nm23-H1在食管癌中的阳性率分别为55.0%和63.3%。P21与浸润深度相关,nm23-H1与淋巴结转移相关。结论P21和nm23-H1可作为判断食管癌浸润和转移的指标之一。

腺苷三磷酸对人横纹肌肉瘤细胞系P^(21)和c-myc蛋白表达的影响

为进一步研究腺苷三磷酸抑制癌细胞增殖诱导分化的作用机理，用ＡＴＰ作用于人横纹肌肉瘤单细胞克隆亚系ＲＤＬ６细胞，用免疫荧光细胞化学方法观察ＡＴＰ作用后的ＲＤＬ６细胞核内Ｐ２１蛋白表达增强，ｃ－ｍｙｃ蛋白表达降低，膜下胞质内微丝束－应力纤维组装改善，粘着斑内的主要粘附蛋白——纽蛋白（ｖｉｎｃｕｌｉｎ）表达增强，正常小鼠成肌细胞Ｃ２Ｃ１２细胞核内Ｐ２１蛋白高表达，ｃ－ｍｙｃ蛋白不表达。结果表明：ＲＤＬ６细胞Ｐ２１表达的丢失和ｃ－ｍｙｃ表达的活化与细胞的增殖和分化异常相关，从而表明Ｐ２１表达增强和ｃ－ｍｙｃ表达的降低在ＲＤＬ６细胞表型逆转过程中起重要作用。

肺鳞癌细胞p^(53)蛋白及ras p^(21)的免疫组织化学定量研究

应用免疫组织化学方法检测２２例肺鳞癌组织标本的ｐ５３及ｒａｓｐ２１表达，用显微图像分析仪测定阳性细胞百分率Ｐ／Ａ（％）和平均光密度（ＡＯＤ），并采用阳性水平指数（ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｅｖｅｌｉｎｄｅｘ，ＰＬＩ）作为免疫组化反应水平指标，对癌基因蛋白进行比较研究。结果显示：ｐ５３表达阳性率为５０％，ｒａｓｐ２１表达阳性率为６３６％。ｐ５３蛋白表达在非角化型鳞癌组高于角化型鳞癌组；ｒａｓｐ２１的表达随组织分化程度的增高而增高，ｒａｓｐ２１与ｐ５３的表达水平无直线相关关系。

软肝冲剂对四氯化碳肝硬化大鼠P^(21)mRNA表达的影响

目的探讨软肝冲剂对四氯化碳肝硬化大鼠P2 1mRNA表达及细胞周期各时相DNA含量的影响 ,从mRNA、DNA水平探讨软肝冲剂阻止肝硬化的作用机理。方法采用RT PCR及流式细胞计数仪分别检测四氯化碳肝硬化大鼠P2 1mRNA表达、DNA含量。结果软肝冲剂能降低四氯化碳肝硬化大鼠P2 1mRNA表达 ,与模型组比较有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,大剂量组的疗效与小剂量组比较无明显差异 (P >0 .0 5 )。正常肝组织P2 1mRNA呈相当低水平表达 ,其表达相对值为 (0 .1 7± 0 .0 6)U。定量DNA图像分析发现模型组中处于G1期的细胞数要明显多于其它各组 (P <0 .0 1 ) ,软肝冲剂大剂量组中处于G1期的细胞数要明显少于软肝冲剂小剂量组 (均P <0 .0 1 )。结论软肝冲剂能调节P2 1基因表达 ,调节细胞周期 ,促进肝细胞再生 ,抑制肝纤维化、肝硬化的形成。

非小细胞肺癌中的PCNA、P53r、asP^(21)的表达

目的探讨PCNA、P53r、asP21与肺癌临床病理特征的关系及联合表达的意义。方法应用免疫组化S-P法检测了81例肺癌组织(鳞癌46例、腺癌35例)、20例正常肺组织中PCNA、P53r、asP21的表达情况。结果PCNA、P53、ras-P21在肺癌组织中分别表达67%、54%、56%,而在正常肺组织中的阳性表达率分别为5%、5%、0%。结论PCNA、P53、rasP21对肺癌发生、发展有密切关系,如果能排除肿瘤类型、分期、淋巴结转移等因素的相互干扰,其准确性可能会进一步提高。

P^(21/waf1/cip1)在U937细胞分化过程中的表达

目的 :探讨 P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化中表达情况。方法 :用佛波脂 ( PMA)诱导 U937细胞向单核 -巨噬细胞分化 ,经流式细胞术测定细胞 P2 1/ waf1/ cip1基因表达及细胞周期的变化。用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化。结果 :U937细胞向单核 -巨噬细胞分化过程中细胞由分散和悬浮转变为粘附和贴壁 ,呈现了 P2 1/ waf1/ cip1高度表达 ,同时细胞周期停滞于 G1和 G2 /M期 ,无细胞凋亡。结论 :P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化过程中有高表达 ,并伴随细胞周期变化。

胃复宁对大鼠胃黏膜异型增生的预防及对P^(53)、P^(21)蛋白表达调节的影响

目的观察胃复宁对实验大鼠CAG伴DYS的预防作用和对P53、P21基因蛋白表达的干预作用。方法胃炎组用去氧胆酸钠联合无水乙醇制造大鼠CAG伴DYS的实验模型;胃复宁组在胃炎组造模的基础上再施予不同剂量的胃复宁,以观察胃复宁对大鼠CAG伴DYS的防预效果,同时检测P53、P21蛋白表达率。比较胃炎组、胃复宁组、果胶铋组和空白对照组之间CAG伴DYS的发生率和P53、P21基因蛋白的表达情况。结果胃炎组CAG的发生率为100%,DYS发生率为83%;胃复宁(高、中剂量)组CAG的发生率为13%~20%,DYS发生率仅为6.6%~13%;两组比较有显著的差异(P<0.01)。胃炎组P53蛋白阳性表达率为58.33%,胃复宁(高、中剂量)组P53蛋白阳性表达率为20%~26%,两组比较有显著的差异(P<0.01)。胃炎组P21蛋白阳性表达率为50.00%,胃复宁(高、中剂量)组P21蛋白的表达为13%~26%,两组比较有显著的差异(P<0.01)。结论胃复宁(高、中剂量)组通过干预P21、P53基因蛋白的表达,防止了细胞过度增生和癌变,有效防治大鼠CAG的形成,抑制胃上皮DYS的发生,降低了CAG伴DYS发展为胃癌的危险性。

P^(16)、P^(53)、P^(21)/WAF1蛋白的表达与原发性肝癌诊断与预后关系的研究

目的:探讨肝癌和癌旁组织中P^(16)、P^(53)、P^(21)/WAF1蛋白的表达与原发性肝癌的诊断和预后的关系。方法:应用免疫组化技术检测48例手术切除肝癌及癌旁组织中肿瘤相关基因的表达。结果:P^(16)、P^(53)、P^(21)/WAF1蛋白在肿瘤组织中的阳性表达分别为39.6％、56.2％、43.7％,与癌旁组织中的表达差异有显著性(P<0.05),瘤体直径大于5cm、包膜不完整的肿瘤、生存期小于2年和伴有瘤栓的肿瘤组中,P^(21)、P(53)、P^(16)与癌旁组织的表达差异有显著性(P<0.05);在生存期大于2年和复发时间大于6个月的病例中,肿瘤组织表达P^(16)蛋白明显高于生存期小于2年和复发时间小于6个月的病例(P<0.05);在伴有瘤栓和侵润生长的肿瘤组织中P^(53)蛋白表达与不伴有瘤栓和膨胀生长的表达差异有显著性;P^(21)在低分化和早期复发的肿瘤组织中表达显著高于高分化和复发时间较晚的肿瘤组织(P<0.05)。结论:P^(53)基因突变与肝癌的分期、门静脉癌栓的形成、肿瘤的侵袭性有关,是肝癌发展的晚期事件,P^(21)与肝癌的分化和预后有关;P^(16)与肝癌的复发和预后有关。P^(16)、P^(53)、P^(21)可以作为对肝癌分化、侵袭、转移和预后进行预测的标志。

胃癌术后硫酸性肠化切缘P^（53）和ras P^（21）蛋白的表达及其意义

目的探讨硫酸性肠化切缘Ｐ５３和ｒａｓＰ２１蛋白的表达，进一步从分子生物学水平证实硫酸性肠化与胃癌术后切缘复发的关系。方法应用流式细胞术和细胞免疫荧光染色技术，对１８例硫酸性和１７例非硫酸性肠化切缘粘膜上皮细胞的Ｐ５３和ｒａｓＰ２１蛋白的表达量进行了定量研究．结果硫酸性肠化切缘上皮的Ｐ５３和ｒａｓｐ２１蛋白的表达量显著高于非硫酸性肠化切缘和正常粘膜上皮，而低于胃癌细胞．结论硫酸性肠化切缘的ｐ５３和ｒａｓＰ２１蛋白有过量表达，可能与胃癌术后复发有关。

rasP^(21)表达早期诊断大肠腺瘤的临床价值

采用流式细胞术（ＦＣＭ）对４４ 例散发性大肠腺瘤组织、腺癌组织和２３ 例正常组织进行了Ｐ２１表达、ＤＮＡ倍体分析。结果为Ｐ２１标记率、ＤＮＡ异倍体检出率在正常大肠粘膜－腺瘤－腺癌的顺序中依次增高，各组间有显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）；随着腺瘤的增大，二指标亦趋增高（Ｐ＜ ０．０５），且呈同相变化趋势；Ｐ２１标记率在异倍体腺癌中明显高于二倍体腺癌。说明用流式细胞术检测Ｐ２１标记率结合ＤＮＡ倍体分析，