P^（53） PROTEIN OVEREXPRESSION IN PREMALIGNANT AND MALIGNANT LESIONS OF ORAL MUCOSA：IMMUNOHISTOCHEMICAL OBSERVATION

Ｐ^（５３） ＰＲＯＴＥＩＮ ＯＶＥＲＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＩＮ ＰＲＥＭＡＬＩＧＮＡＮＴ ＡＮＤ ＭＡＬＩＧＮＡＮＴ ＬＥＳＩＯＮＳ ＯＦ ＯＲＡＬ ＭＵＣＯＳＡ：ＩＭＭＵＮＯＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬ ＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＰ^（５３）ＰＲＯＴＥＩ...

P^(53) FUSION PROTEIN EXPRESSION IN PROKARYOTE AND PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODY TO P^(53)

Objective: Conventional immunohistochemistry (IHC) is available to assess P53 mutations, and expensive imported antiP53 monoclonal antibody has been used in China, it is necessary to study a new monoclonal antibody. Methods: The P53 DNA fragment enconding Nterminal 180 amiao acide was obtained by PCR and was cloned into PGEX2T plasmid expressing glutathione Stransferase (GST). The P53GST fusion protein expressed by JM109 was used for immunizing BALB/C mice. We have raised one hybridoma strain secreting McAb to human P53 (named M126). Results: The IHC analysis of 52 paraffinembedded sections from human breast cancer with M126 and PAB1801 (Zymed Co.) has showed that the positive immunoreactions were 25 cases (48%) and 22 cases (42.3%) respectively. The staining of M126 was stronger and preferable to PAB1801. Conclusion: M126 can be instead of PAB1801 for studying immunohistochemical analysis on P53 protein.

戊四氮致痫大鼠脑P^(53)蛋白表达与神经细胞凋亡关系的研究

目的 探讨戊四氮诱导癫痫发作大鼠脑 P53蛋白表达与神经细胞凋亡的关系。方法 采用戊四氮诱导癫痫发作大鼠模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)法和免疫组织化学方法分别检测大鼠脑海马 CA1 区神经细胞凋亡及 P53蛋白表达的动态变化。结果 戊四氮致痫后 6 h海马周白质出现 P53蛋白较弥散的表达 ,12 h时海马 CA1 区可见少量锥体细胞凋亡 ,细胞核出现 P53蛋白的微弱表达 ,2 4 h时凋亡的锥体细胞数明显升高 ,P53蛋白表达开始增加 ,至 4 8h两者同时达高峰 (P <0 .0 0 1) ,此后开始下降。结论 P53是调节戊四氮诱导癫痫发作大鼠脑神经细胞凋亡的重要分子之一。

达纳康抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后P^(53)蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的 研究达纳康在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用及其分子机制。方法 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉 ( MCAO)缺血 1h再灌注 2 4 h模型 ,18只雄性大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组和达纳康治疗组 ,每组 6只。采用 Zea- L onga评分法观察神经功能缺损程度 ,采用免疫组织化学方法、TUNEL 法分别观察各组 P53蛋白表达和细胞凋亡。结果 假手术组神经功能缺失评分为 0分 ,高倍视野下无 P53蛋白染色阳性细胞及凋亡细胞 ;达纳康治疗组神经功能缺失评分 ( 0 .4 8± 0 .3 7分 )、P53蛋白染色阳性细胞数 ( 5 .16± 1.84个 /高倍视野 )、凋亡细胞数 ( 4 .18± 1.2 1个 /高倍视野 )均较生理盐水对照组 ( 2 .76± 0 .82分、10 .4 3± 1.5 6个 /高倍视野、8.16± 1.5 0个 /高倍视野 )显著减少 ( P<0 .0 1)。结论 达纳康可明显减轻局灶性脑缺血再灌注损伤 ,其抑制神经细胞P53蛋白的表达 ,进而抑制细胞凋亡 ,是其脑保护作用的分子机制之一。

亚低温对脑缺血区P^(53)蛋白表达的影响

目的 在尿激酶溶解大鼠脑血栓治疗中，研究亚低温对溶栓复流后大脑中动脉缺血区 Ｐ５３蛋白表达的影响。方法 应用肾血管性高血压大鼠（ Ｒ Ｈ Ｒ Ｓ Ｐ），用光化学法制成一侧大脑中动脉闭塞（ Ｍ Ｃ Ａ Ｏ）模型，在血栓形成后 ０．５ｈ 应用尿激酶静脉溶栓复流后，用免疫组织化学的方法研究 Ｐ５３蛋白的表达。结果 亚低温组 Ｐ５３蛋白的表达，明显弱于正常体温组。结论 亚低温降低脑缺血区域的 Ｐ５３蛋白的表达，可能是亚低温产生脑保护的机制之一。

神经生长因子对红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡和野生型P^(53)表达的影响

目的 探讨外源性神经生长因子 ( NGF)对癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡与野生型 P5 3 ( wt P5 3 )蛋白表达有无抑制作用。方法 采用 KA诱导癫痫发作大鼠模型。以 TUNEL方法标记 DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化 SP法检测 wt P5 3 蛋白。观察大鼠癫痫发作 4 0 h(注射 KA4 8h)后其海马 CA1神经细胞凋亡和 wt P5 3 蛋白表达情况及外源性 NGF对它们的影响。结果 大鼠急性癫痫发作后 ,其凋亡细胞和 wt P5 3 蛋白表达均明显增加 ,wt P5 3 蛋白表达与细胞凋亡呈正相关 ( r =0 .83 9,P <0 .0 1 ) ;给予 NGF,凋亡细胞数及 wt P5 3 表达均显著性降低 ( P<0 .0 1 )。结论 外源性 NGF对癫痫所致神经细胞凋亡有抑制作用 ,其抑制凋亡的分子机制可能是通过抑制 wt P5 3蛋白表达而实现的。

PCNA与P^(53)蛋白在先天性胆管扩张症患者胆管中的表达及意义

目的 增殖细胞核抗原 (PCNA)与抑癌蛋白 (P53蛋白 )在先天性胆管扩张症 (CBD)胆管粘膜上皮细胞中的表达 ,了解上皮细胞的增殖分化情况 ,探讨可能的胆管癌变机制。方法 应用免疫组化方法检测胆管上皮中 PCNA与 P53蛋白表达 ,以胆管癌和正常胆总管组织作为对照 ,进行相关关系分析。结果 CBD的 PCNA与P53蛋白表达阳性率为 (4 3.5± 2 5 .5 ) %和 (2 8.5± 2 0 .0 ) % ,正常胆管表达阳性率为 (7.4± 5 .0 ) %和 (1.0± 2 .5 ) % ,胆管癌为 (74 .9± 18.9) %和 (6 4 .5± 16 .8) %。三者之间差别有极显著差异。 PCNA在化生部位表达率增高。结论 CBD胆管上皮细胞的增殖分化处于高增殖状态 。

大鼠全脑缺血再灌流后脑组织P^(53)及P^(21)蛋白的表达

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌流后Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达及其与迟发性神经元死亡（ＤＮＤ）的关系。方法 在４ 血管闭塞法全脑缺血模型上，采用ＨＥ及ＬＳＡＢ染色法，观察脑组织病理改变，检测脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，以及蛋白合成抑制剂放线菌酮对其的影响。结果 全脑缺血１５ ｍ ｉｎ 再灌流后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，且两者分布接近。海马结构、丘脑、下丘脑等白质区（再灌流后６ ｈ）较皮层、海马的神经细胞核（２４ ｈ）先检测到Ｐ５３、Ｐ２１蛋白，７２ ｈ 表达达高峰。并且以缺血损伤最严重的海马ＣＡ１ 区Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达为强。另外，放线菌酮可抑制脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，并对ＤＮＤ具有一定的保护作用。结论 全脑缺血再灌流损伤后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，放线菌酮可抑制其表达，并对ＤＮＤ起保护作用，提示Ｐ５３、Ｐ２１蛋白参与了全脑缺血后ＤＮＤ的凋亡机制。

尼膜同对戊四氮致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p^(53)蛋白表达的影响

目的 :探讨尼膜同对癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡与 p53蛋白表达的影响。方法 :采用戊四氮致痫大鼠模型 ,以原位末端标记 ( TUNEL)法检测凋亡细胞 ;免疫组化法检测 p53蛋白。观察大鼠癫痫发作后 48h其海马 CA1区神经细胞凋亡和 p53蛋白表达变化及尼膜同对它们的影响。结果 :戊四氮致痫后 ,大鼠海马 CA1区凋亡细胞和 p53蛋白表达均明显增加 ,p53蛋白表达与细胞凋亡呈正相关 ( r=0 .846,P<0 .0 0 1 ) ;尼膜同干预后 ,凋亡细胞数及 p53蛋白表达均显著性降低 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :尼膜同对癫痫所致神经细胞凋亡有抑制作用 ,其抑制凋亡的分子机制可能是通过抑制

20例原发性输卵管癌组织中ER、PR与p^(53)蛋白的表达

目的：分析原发性输卵管腺癌的ＥＲ、ＰＲ及ｐ５３蛋白的表达，研究其与该肿瘤的临床分期、病理分级及患者预后的关系。方法：材料选自２０份原发性输卵管腺癌及１０份正常输卵管组织的存档石蜡包埋标本，采用免疫组化法检测。结果：在２０份原发性输卵管癌标本中，ＥＲ、ＰＲ的阳性表达率分别为２５％和１５％，稍高于正常输卵管组的１０％，但差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；ｐ５３蛋白在癌症组的阳性表达率为４０％，对照组则无１例阳性表达，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；ｐ５３蛋白在晚期、分化差及预后不良的输卵管癌病例中的表达呈上升趋势，但未达到统计学意义（Ｐ＞０．０５）；对侧输卵管炎症的存在与ｐ５３蛋白的阳性表达呈负相关（Ｐ＜０．０５）。结论：在原发性输卵管癌中，ＥＲ、ＰＲ有一定程度的表达，但均较低；ｐ５３基因的突变可能参与了该肿瘤的发生，并可作为综合判断其恶性程度及患者预后的指标之一。

P^(53)蛋白、增殖细胞核抗原及胎盘型谷胱甘肽S—转移酶在胃癌中的表达及其意义

目的：研究胃癌中Ｐ５３、ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达及意及。方法：应用免疫组织化学ＳＰ方法检测５例正常胃组织和５４例胃癌组织中Ｐ５３蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）的表达水平。结果：５例正常组织中未见Ｐ５３ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达。５４例胃癌组织中Ｐ５３，ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ阳性检出率分别为６１１１％，７０３７％和６８５２％。表达阳性Ｐ５３和ＰＣＮＡ均定位于肿瘤细胞核内，ＧＳＴπ定位于胞浆。Ｐ５３、ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达率与胃癌组织类型和淋巴转移关系密切。结论：检测Ｐ５３。

康尔爱片诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡及对P^(53)基因表达影响的研究

目的 :观察康尔爱片诱导人胃腺癌SGC - 90 1细胞凋亡及对P5 3基因表达的影响。方法 :应用流式细胞仪检测康尔爱片体外给药后人胃腺癌SGC - 790 1细胞DNA含量变化和P5 3基因表达情况。结果 :康尔爱片中、大剂量组细胞凋亡百分率分别为 9.0 6 %、96 .32 % ,与对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) ;小、中、大 3个剂量组P5 3基因表达率分别为 95 .0 9%、89.47%、5 2 .0 4% ,与对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1)。结论 :康尔爱片中、大剂量组可以明显诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡 ,且小、中、大 3个剂量组均可降低突变型P5 3基因表达率。

唾液腺腺样囊性癌P^(53)基因蛋白表达与临床病理特征的关系

目的 探讨唾液腺腺样囊性癌(ACC) P53基因蛋白表达与临床病理特征的关系。方法 选择38例唾液腺ACC病理标本,采用免疫组织化学法进行P53基因蛋白检测。分析P53基因蛋白表达与ACC病理类型、局部复发、远处转移及临床分期的关系。结果 P53基因蛋白检出率为6 0 .5 % ,其过度表达与唾液腺ACC的复发、远处转移及术后生存有关(P均<0 .0 5 ) ,与肿瘤病理类型、临床分期无关(P均>0 .0 5 )。结论 P53基因蛋白过度表达在唾液腺ACC中有较高的检出率。

胃粘膜异型增生的PCNA、P^(53)和C-erbB-2表达及其诊断价值

应用免疫组化SP方法，对65例异型增生胃粘膜PCNA（PC10）、CerbB－2（PAb1）和P53蛋白进行了测定。胃粘膜异型增生Ⅰ级PCNA平均指数22．34％，Ⅱ级32．58％，Ⅲ级46．08％，各组间比较差异有显著性（P＜0．01），PCNA平均指数与异型增生病理分级间有很好地相关性（r＝0．966，P＜0．0005）；Ⅰ、Ⅱ级异型增生无P(53)和C－erbB－2蛋白表达，Ⅲ级中P(53)蛋白阳性8例（32％），C－erbB－2蛋白阳性7例（28％）。本文还就PCNA指数和P(53)、C－erbB－2蛋白表达的意义进行了讨论。

SRRS方剂抑制消化道恶性肿瘤P^(53)基因突变的实验研究

目的：从分子水平探讨ＳＲＲＳ方剂治疗消化道癌的可能机制。方法：选用Ｌｏｖｏ结肠腺癌细胞裸小鼠移植瘤模型，观察中药ＳＲＲＳ方剂抑制移植瘤生长的作用，并用ＰＣＲＳＳＣＰ银染色法研究ＳＲＲＳ方剂对Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因突变的影响情况。结果：对照组有５０％（５／１０）发生Ｐ５３基因第七外显子突变，ＳＲＲＳ方剂治疗组无（０／１０）此现象（Ｐ＜００５）。结论：提示ＳＲＲＳ方剂能抑制Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因的突变。

胃癌组织P^（53）蛋白产物的表达与病人预后的关系

采用免疫组化方法对Ｐ￣（５３）蛋白的表达进行观察。结果表明：胃癌组织Ｐ￣（５３）蛋白染色阳性率为３６．５％，肿瘤大于５ｃｍ组、有淋巴结转移和浆膜侵犯及Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织Ｐ￣（５３）蛋白染色阳性率分别显著高干肿瘤小于５ｃｍ、无淋巴结转移和浆膜侵犯及Ⅰ、Ⅱ期胃癌组（Ｐ＜０．０１）。Ｐ￣（５３）染色阳性者５年存活率为２１．１％，染色阴性者为５０．０％，两组５年存活率差非常显著（Ｐ＜０．０１）。以上结果提示检测胃癌组织Ｐ￣（５３）蛋白有助于判断胃癌患者预后。

有和无内分泌分化大肠癌P^(53)和表皮生长因子受体表达的比较研究

目的：研究大肠癌内分泌分化与P53表皮生长因子受体（EGFR）表达的关系及意义。方法：采用免疫组织化学ABC法，检测79例大肠癌手术切除组织中嗜铬蛋白A（CGA），P53及EGFR的表达变化。结果：大肠癌组织中CGA，P53及EGFR的表达率分别为：35.4％（28／79〕，60．8％(48／79）和30．4％（24／79），有内分泌分化的大肠癌P53表达率及其免疫阳性细胞数分别为78．6％（22／28）和984．3士702．0／mm2，无内分泌分化者分别为51．0％和589．5士489．5／mm2，前者明显高于后者（P<O．025；P＜0．05）。有和无内分泌分化的大肠癌EGFR的表达率分别为46．4％（13／28）和21．6％（11／51），差异有显著性（P＜0．025）。结论：有内分泌分化的大肠癌P53及EGFR的表达明显高于无内分泌分化者。

胃癌患者P^(16)和P^(53)蛋白的表达及其相互关系

目的 探讨P16、P53 基因产物在胃癌中表达的生物学意义及其相互关系。方法 用辣根酶标记链霉卵白素免疫组化法对 33例胃癌的临床病理特征进行分析 ,同时与 17例癌旁和 13例正常胃粘膜中P16和P53 蛋白的表达进行了比较。结果 胃癌患者P16蛋白阳性表达率明显高于正常胃粘膜 (P <0 .0 5 ) ,伴淋巴结转移的胃癌阳性细胞密度高于未转移者 (P <0 .0 5 )。P53 蛋白在正常胃粘膜未见表达 ,胃癌中P53蛋白阳性表达显著高于癌旁组织 (P <0 .0 5 )。P53 与P16在胃癌中共同表达 10例 (30 .30 % ) ,P53 和P16蛋白表达与胃癌的病理学分期、分化程度无关。结论 P16基因异常有促进胃癌转移的效应 ,这对判定胃癌患者的预后有一定的指导意义。P53 与P16在胃癌中有协同作用 ,二者异常表达参与胃癌的发生与发展。

人胃癌和胃癌前病变组织中P^（53）蛋白的表达及其亚细胞定位

用人抗鼠Ｐ（５３）（ＤＯ－１）单克隆抗体以ＡＢＣ免疫组织化学法检测了３８例胃癌、１１例异型增生、５例肠化生、１９例胃非癌性疾病组织及５例正常胃组织中Ｐ（５３）蛋白的表达，观察结果表明，在胃癌组织中Ｐ（５３）蛋白阳性率为５０％，异型增生中为３６％，５例肠化生中４例Ｐ（５３）蛋白呈阳性，正常胃及胃非癌性疾病组织中Ｐ（５３）蛋白均呈阴性。Ｐ（５３）蛋白阳性率与胃癌组织学类型之间看不出相关性（Ｐ＞０．０５），采用免疫胶体金标记电镜技术对胃癌细胞中Ｐ（５３）蛋白进行亚细胞定位结果，Ｐ（５３）蛋白分布于细胞核内及胞浆线粒体和粗面内质网中。Ｐ（５３）基因突变引起的Ｐ（５３）蛋白过度表达在胃癌组织中较常见，很可能在胃癌发生、发展中起重要作用。

胃癌组织中Survivin、PTEN、P^(53)基因的表达及意义

目的 探讨凋亡抑制基因 Survivin和抑癌基因 PTEN、P53在胃癌组织中的表达及其与胃癌发生发展、临床病理特征之间的关系。方法 应用免疫组织化学链霉亲和素方法 (SABC) ,检测 Survivin、PTEN和 P53基因在 6 5例胃癌、2 6例不典型增生胃黏膜、10例浅表性胃炎和 30例正常胃黏膜组织中的表达。结果 胃癌组织中Survivin、PTEN、突变型 P53基因的阳性表达率分别为 70 %、4 8%、6 5 % ,不典型增生胃黏膜中分别为 4 2 %、85 %、31% ,Survivin和突变型 P53基因在正常胃黏膜和浅表性胃炎组织中不表达 ,PTEN基因在正常胃黏膜和浅表性胃炎组织中全部呈阳性表达。胃癌组织中 PTEN基因的表达与正常胃黏膜组织中的表达差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,胃癌组织、不典型增生胃黏膜以及正常胃黏膜中 Survivin和突变型 P53基因的表达差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。随临床分期增加、胃癌分化程度降低、浸润深度加深、淋巴结的转移 ,突变型 P53基因的阳性表达率逐渐上升 (P<0 .0 5 ) ,PTEN基因的阳性表达率逐渐降低 (P<0 .0 5 )。在胃癌组织中 Survivin与突变型 P53基因的表达呈正相关 (P<0 .0 5 ) ,与 PTEN基因的表达呈负相关 (P<0 .0 5 ) ,PTEN基因与突变型 P53基因的表达呈负相关 (P<0 .0 5 )。结论 Survivin、PTEN和