肝癌及癌旁组织中P^53基因及AFP、CEA表达异常及相关研究

目的：从分子生物及病理学角度对肝癌中抑癌基因P^53和瘤标志物AFP（甲胎蛋白）、CEA（癌胚抗原）的表达及相关性进行研究。方法：收集40例肝细胞肝癌（HCC）患者癌组织连带部分癌旁组织，用免疫组织化学法检测P^53基因、AFP、CEA等。结果：P^53基因癌内表达率为805，癌旁组织为505；AFP癌内表达率为87．55，癌旁组织为80％；CEA癌内表达率为55％，癌旁组织表达不明显，结论：检测P^53基因，并与其他肿瘤标志物和相关基因一起，在基因水平诊断肝癌、估计预后及制定术后治疗方案等方面有着重要作用。

小细胞肺癌中P^53基因突变的检测及临床意义

应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析的方法，检测了３２例手术切除、甲醛固定、石蜡包埋的小细胞肺癌组织第７、８外显子的突变情况，突变率达５３．１３％（１７／３２），且Ｐ＾５３突变与性别、吸烟史、临床分期及淋巴结转移情况无关（Ｐ〉０．０５）；对所有患者进行随访，发现Ｐ＾５３突变组与未突变组的３年术后生存率的差异有显著性（Ｐ〈０．０５），而１年、２年的术后生存率两组均无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。

康尔爱片诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡及对P^(53)基因表达影响的研究

目的 :观察康尔爱片诱导人胃腺癌SGC - 90 1细胞凋亡及对P5 3基因表达的影响。方法 :应用流式细胞仪检测康尔爱片体外给药后人胃腺癌SGC - 790 1细胞DNA含量变化和P5 3基因表达情况。结果 :康尔爱片中、大剂量组细胞凋亡百分率分别为 9.0 6 %、96 .32 % ,与对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) ;小、中、大 3个剂量组P5 3基因表达率分别为 95 .0 9%、89.47%、5 2 .0 4% ,与对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1)。结论 :康尔爱片中、大剂量组可以明显诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡 ,且小、中、大 3个剂量组均可降低突变型P5 3基因表达率。

SRRS方剂抑制消化道恶性肿瘤P^(53)基因突变的实验研究

目的：从分子水平探讨ＳＲＲＳ方剂治疗消化道癌的可能机制。方法：选用Ｌｏｖｏ结肠腺癌细胞裸小鼠移植瘤模型，观察中药ＳＲＲＳ方剂抑制移植瘤生长的作用，并用ＰＣＲＳＳＣＰ银染色法研究ＳＲＲＳ方剂对Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因突变的影响情况。结果：对照组有５０％（５／１０）发生Ｐ５３基因第七外显子突变，ＳＲＲＳ方剂治疗组无（０／１０）此现象（Ｐ＜００５）。结论：提示ＳＲＲＳ方剂能抑制Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因的突变。

氯化甲基汞对大鼠脑神经细胞凋亡及P^(53)基因表达的影响

选用Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠，经皮下注射给予１０ｍｇ／Ｋｇ体重氯化甲基汞（ＣＨ３ＨｇＣｌ），连续７天，第１５天取其脑组织，利用细胞和分子生物学技术进行ＤＮＡ电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析。实验结果，染毒组大鼠脑组织ＤＮＡ电泳呈现特征性梯形电泳带；ＦＣＭ分析染毒组大鼠脑神经细胞的凋亡率、Ｐ５３基因表达率显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ＣＨ３ＨｇＣｌ以诱导凋亡方式导致脑神经细胞损伤，Ｐ５３基因参与ＣＨ３ＨｇＣｌ诱导脑神经细胞凋亡的基因调控过程。

急性白血病骨髓细胞增殖细胞核抗原、P^(53)基因表达及其意义

目的 探讨骨髓细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)及P53 基因在儿童急性白血病 (AL)中表达及其临床意义。方法 用SP免疫组化法检测儿童AL骨髓细胞的PCNA和P53 。结果 急性淋巴细胞白血病 (ALL)组、急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)组PCNA、P53 表达与对照组比较均有显著差异 ,组间比较均无差异 ;PCNA表达在ALL标危组显著高于高危组。PCNA阳性表达者缓解率显著高于阴性表达者 ,3年无病生存率无差异 ;P53 阳性表达者缓解率较阴性表达者无差异 ,而 3年无病生存率显著低于阴性表达者。结论 PCNA、P53 基因均参与了儿童AL发病过程 。

人野生型P^(53)与反义mdm_2基因融合体真核表达载体的构建及其在Mc3细胞中的表达

目的构建P53与反义mdm2cDNA序列真核表达载体,并探讨其在人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3细胞中的表达。方法应用分子克隆技术,将mdm2cDNA序列反向插入到含有P53基因序列pDOR-Neo中的P53基因序列下游,构成含有P53基因与反义mdm2基因融合基因的逆转录病毒表达载体。经酶切分析鉴定后命名为pDOR-Neo-P53-Fmdm2并将重组载体通过脂质体转染Mc3细胞,通过G418筛选转染阳性细胞,并采用Westernblot方法检测P53蛋白表达。结果酶切鉴定证实重组载体含有P53与反义mdm2cDNA片段,实验结果表明:转染后P53蛋白(1.35±0.14)较对照组P53蛋白(6.26±0.11)含量显著减低(P<0.01),转染空载体P53蛋白(6.24±0.12)与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论P53与反义mdm2基因融合体真核表达载体构建成功,并表达野生型P53蛋白和封闭mdm2基因,为今后进一步研究打下了基础。

肝癌及癌旁组织中P^(53)基因第七外显子转录水平的表达差异及临床意义

目的 :研究启东区肝癌中 P53基因第七外显子转录水平的表达及其与患者临床病理特征间的关系。方法 :通过 RT- PCR确定 P53基因第七外显子在 47对肝癌标本中的表达 ,并分析其与肝癌患者临床病理特征间的关系。结果 :P53基因第七外显子在肝癌及其癌旁组织中均显示差异表达 ,其中 1 7例为上调表达 ,30例为下调表达 ,上下调表达之间差异显著 ;女性、年龄≥ 45岁、AFP( + )、HBs Ag( + )、癌栓 ( + )、肝硬化、病理 Edmondson's 级的病例中 P53基因第七外显子均呈显著下调表达 ;Edmondson's I级病例肝癌组织中 P53基因的 EI显著高于 Edmondson's 级病例。结论 :启东肝癌中 P53基因第七外显子转录水平上存在表达差异 。

子宫颈疾病中P^(21WAF1/CIP1)和P^(53)基因的表达及其意义

目的 :探讨抑癌基因 P2 1WAF1/CIP1(简称 P2 1)和 P53 与子宫颈疾病发生、发展的关系。方法 :用原位杂交组织化学技术检测 P2 1与 P53 基因在 50例子宫颈疾病组织和 1 0例正常宫颈组织标本中表达状况 ,并进行相关性分析。结果 :正常宫颈组织 P2 1与 P53阳性表达均为90 %。宫颈疾病组织中 P2 1阳性表达为 3 8% ,P53 阳性表达为 46%。宫颈癌组织中 P2 1与 P53 两基因阳性表达与宫颈慢性炎和正常宫颈组织阳性表达有显著性差异 ( P<0 .0 1 ) ,而与宫颈上皮非典型增生组织中阳性表达无差异 ( P>0 .0 5)。两基因在正常宫颈组织和宫颈疾病组织中表达有相关性 ( P<0 .0 1 )。结论 :P2 1的突变或缺失可能与宫颈癌、宫颈上皮非典型增生的发生、发展有关 ,野生型 P53基因对细胞增殖的抑制作用可能是通过 P2

抑癌基因P^(53)突变及其蛋白表达与早期胃癌预后的关系

对 1 0 3例早期胃癌 ,采用免疫组织化学的方法 ,进行 P53基因突变蛋白检测 ,结果显示 :P53蛋白表达率在早期胃癌为 2 9.1 %。P53蛋白表达与肿瘤分化有关 ,阳性表达多见于分化型腺癌 (P<0 .0 1 )。当肿瘤侵入粘膜下层 ,P53蛋白表达阳性肿瘤淋巴结转移率显著升高 (P<0 .0 5 )。同时 ,P53蛋白表达与早期胃癌预后有关 ,表达阴性病例 5年生存率明显高于P53 蛋白表达阳性组 (P<0 .0 5 )。此项研究表明在肿瘤早期 ,P53 突变基因已在肿瘤浸润、发展及预后方面起到相应作用。

逆转录病毒介导野生型P^53与反义mdm2融合基因对Mc3细胞凋亡的影响

目的探讨P^53与反义mdm2 cDNA序列真核表达载体诱导人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3细胞凋亡的影响。方法将P^53与反义mdm2 cDNA序列真核表达载体通过脂质体转染Mc3细胞，采用形态学观察凋亡细胞；琼脂糖凝胶电泳检测“梯状条带”；末端转移酶标记法（TUNEL）检测凋亡指数；透射电镜检测凋亡小体。结果转染48h后形态学观察到细胞体积缩小；核浓染碎裂成大小不等的碎片；核染色质成新月形，琼脂糖凝胶电泳可见180～200bp典型的凋亡带，TUNEL检测凋亡指数为25．22±1．01（转染后），与对照组2．01±1．10（转染前）比较差异有统计学意义（P〈0．05），转染空载体（2．02±1．11）与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05），透射电镜可见染色质浓集分布不均，形成由核膜包裹断裂的核碎片的凋亡小体。结论P^53与反义mdm2基因融合体真核表达载体能诱导和促使体外培养的人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3细胞发生凋亡。

HPV感染和bcl-2、P^(53)基因产物在宫颈癌组织中表达及其意义

目的:探讨HPV感染和宫颈癌组织中P53、bcl-2基因产物的表达及临床意义。方法:应用原位标记技术和SP法对61例宫颈癌,23例CIN,15例正常宫颈组织进行HPV16检测和P53、bcl-2基因产物的表达。结果:宫颈癌组和CIN组的HPV16感染率明显高于正常宫颈组;P53、bcl-2基因产物阳性表达率宫颈癌组分别为47.5%、59.0%,高于正常宫颈组0及13.3%;随临床分期越晚,组织学分级越高,P53表达率越高,淋巴结转移组高于无转移组;bcl-2表达与临床分期、组织学分级呈负相关,淋巴结转移组低于无转移组;P53和HPV16及bcl-2有相关性。结论:HPV感染和P53、bcl-2基因产物的表达与宫颈癌的发生、发展及转移密切相关,HPV可能通过造成P53、基因突变失活,导致宫颈癌的发生。

食管癌手术切缘组织P^(53)基因突变的临床研究

目的 检测食管癌手术切缘组织P53基因突变 ,并对食管癌切除后的效果进行评价。 方法 采用PCR -SSCP对 60例食管癌组织、切缘组织P53基因突变进行分析 (切缘病理切片无癌细胞残留 )。 结果 60例原癌组织中有 2 8例 ( 4 5 % )切缘组织检测P53基因突变 ,切缘组织P53突变患者预后差 ,其肿瘤复发率 ( 5 4% ) ( 15 /2 8) ,而P53基因无突变者无 1例复发。两组复发率存在显著性差异 (P <0 .0 5 )。 结论 检测切缘组织P53基因突变为“分子定界” 。

p^(53)基因在U 937细胞生长和分化过程中的调节作用

本文报道了p^(53)基因对人白血病细胞系U 937细胞生长和分化的调节作用。重组人GM-CSF(rhGM-CSF)可诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,这反映在分化后的细胞表达有巨噬细胞许多表型特征和功能活性。在这一分化过程中同时伴随着p^(53)基因的表达增加和U 937细胞生长受抑。进一步,用反义脱氧寡聚核苷酸抑制试验特异性地抑制p^(53)基因表达,结果发现p^(53)反义脱氧寡聚核苷酸可以明显抑制rhGM-CSF诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,同时也明显解除rhGM-CSF介导细胞分化过程中的细胞生长抑制作用。这些结果说明p^(53)基因在U 937细胞的生长和分化过程中可能起偶联调控作用。

P^(53)、bcl-2、c-fos基因在脑胶质瘤表达及意义

目的 :探讨 P5 3、Bcl- 2、c- fos基因在脑胶质瘤表达水平以及和细胞凋亡的相关性。方法 :采用免疫组织化学 S- P染色法对 47例脑胶质瘤组织蜡块标本进行 P5 3、Bcl- 2、Fos蛋白的检测。结果 :47例脑胶质瘤中 P5 3、Bcl- 2、Fos蛋白的阳性率分别为 48.9% (2 3/ 47) ;5 7.4% (2 7/ 47) ;46 .8% (2 2 / 47) ;其中多形性胶质母细胞瘤的 P5 3蛋白阳性水平要高于星形细胞瘤 ,而 Bcl- 2蛋白阳性水平则是星形细胞瘤组显著高于多形性胶质母细胞瘤。结论 :P5 3、 Bcl- 2、 c- fos基因的异常表达与脑胶质瘤的发生、发展关系密切 ,而 P5 3、Bcl- 2的表达水平则与脑胶质瘤的恶性及分化程度有关 ,并可能使肿瘤细胞凋亡过程障碍。

乳腺穿刺涂片细胞中P^(53)基因增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨 P5 3基因增殖细胞核抗原 (PCNA)在乳腺肿瘤穿刺涂片中的异常表达 ,提高乳腺肿瘤穿刺细胞学诊断的正确率 ,提供临床乳腺癌综合治疗及术前化疗的客观依据。方法 应用免疫组织化学 S- P法 ,对 35例乳腺穿刺涂片进行 P5 3、PCNA标记。结果 2 1例细胞学诊断为乳腺癌的涂片中 ,P5 3阳性表达率 5 2 .2 % ,PCNA阳性表达率 38.1%。 10例细胞学诊断为乳腺良性病变的涂片中 ,P5 3、PCNA均为阴性表达。 4例细胞学诊断为可疑乳腺癌的涂片中 ,P5 3、PCNA2例为阳性表达 ,2例为阴性表达。P5 3、PCNA阳性表达物定位于肿瘤细胞核内。结论 P5 3、PCNA在乳腺癌和可疑乳腺癌的涂片中阳性表达显著高于乳腺良性病变的涂片中阳性表达 (P<0 .0 1)。

肺癌切除组织和支气管切缘P^(53)基因突变的研究

目的 检测肺癌切除组织和支气管切缘P53基因突变 ,了解肺癌手术切除后的效果及局部复发情况。方法 用PCR -SSCP方法将40例肺癌和10例肺部良性肿瘤手术切除标本的支气管切缘 (切缘病理切片无癌细胞残留 ) ,肺癌组织和正常肺组织中的P53基因突变 ,同时对手术后切缘癌复发及转移情况作了随访。结果 12例 (30 % )肺癌支气管切缘和24例肺癌组织存在P53 基因突变 ,至于正常肺组织和良性病变肺组织未发现P53基因突变。本组研究表明 ,肺癌组织P53基因突变以小细胞癌 (98% )最高 ,次为鳞癌 (70% ) ,腺癌(40% ) ,P53基因突变以TNM分期的 ,Ⅲ期 (71.4 % )最高 ,次为Ⅱ期 (58% ) ,Ⅰ期 (26% ) ,术后3～8个月随访 ,支气管切缘P53阳性中5例(41.6% )发生支气管残端复发 ,肺癌组织中P53 阳性有13例 (54% ) ,通过随访发现有癌复发及转移 ;P53 阴性者有3例 (27 % )发现癌复发。两组复发有显著差异 (P<0.05)。结论 本文通过分子检测支气管切缘P53基因突变 ,对早期预测部份肺癌术后残留复发具有重要临床意义。