MDR逆转因子筛选技术P-gp细胞系的建立及其生物学特性评价

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达Pgp的细胞系,用于筛选特异性逆转Pgp的药物。方法经RTPCR反应得到小鼠肿瘤细胞PgpDNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染BMDC1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞PgpmRNA和Pgp分子的表达;以MTT法分析细胞的增殖活性;应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性。结果成功构建了稳定表达特异性Pgp基因和Pgp分子的BMDC1(ADR+/+)细胞系。经阿霉素诱导,BMDC1(ADR+/+)细胞Pgp的表达明显增高,在阿霉素增加至12000ng/mL时,仍有80%的细胞保持良好增殖状态,而BMDC1(wt)细胞在1000ng/mL时100%细胞死亡。BMDC1(ADR+/+)较(wt)细胞对MD123有较低的聚集量和较高的排放量,加入Pgp逆转剂Verapamil后,BMDC1(ADR+/+)细胞MD123聚集量增加,药物外排作用消失。结论BMDC1(ADR+/+)细胞系具有较强的药物耐受性,可用于筛选特异性逆转Pgp的药物,Verapamil可逆转Pgp耐药性,具有Verapamil特性者可视为具有逆转Pgp耐药性。