一株鸡大肠杆菌1型及P型菌毛蛋白结构基因的克隆

据国外发表的人致病性大肠杆菌 1型及P型菌毛蛋白结构基因 (pilA及papA)序列 ,设计并合成了分别位于PilA及papA保守区的 2对引物。经PCR从 1株带有甘露糖敏感血凝特性 (MSHA)及甘露糖抵抗血凝特性 (MRHA)的鸡致病性大肠杆菌 (HJ2 0e)染色体中扩增到大小分别在 6 5 7bp及 5 41bp的 2种阳性产物。通过核酸序列测定分别确证所扩增的DNA片段分别为pilA及papA基因。经酶切、连接、转化和筛选 。

鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因(papA)的克隆与序列测定

根据国外发表的 4种来源不同的人尿道致病性大肠杆菌 pap A基因序列 ,在其保守区设计了带有 Sac /Bam H 酶切位点及保护碱基的 1对引物 ,应用 PCR从 1株带有 MRHA特性的鸡大肠杆菌染色体上扩增到 1个阳性产物 ,经酶切、连接、转化和筛选 ,得到 PCR产物的阳性克隆。通过对 PCR产物核酸序列测定 ,确证所扩增和克隆的 DNA片段为 pap

3株致病性鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析

用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA)。将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T○R载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得到含阳性重组子的菌株,提取质粒后用BamH和Sal双酶切进行鉴定。所得阳性重组子进行DNA序列测定,测序结果经DNAStar核酸分析软件包分析比较,结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应完整papA基因,其开放式阅读框架大小为549bp,编码182个氨基酸。此3株菌的P型菌毛结构基因的同源性为98.9%～100%,其中O1株和O78株的P型菌毛基因的ORF序列100%相同,O2株有2个碱基与前两者不同。

尿路致病性大肠埃希菌1型菌毛、P型菌毛黏附能力与药敏情况之间的关系

目的研究尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)1型菌毛、P型菌毛的黏附情况及抗菌药物的药敏情况,分析二者的相互关系,为UPEC的治疗和预防提供新思路。方法收集UPEC菌株,采用梅里埃公司VitekⅡ进行细菌鉴定与13种常见抗菌药物的药敏试验,通过1型菌毛与酵母细胞的黏附实验、P型菌毛与人红细胞的黏附实验,分别检测1型菌毛、P型菌毛的黏附情况,比较两种菌毛黏附特性与药敏之间的关系。结果根据两种菌毛的黏附特性分为四组(1型阳性P型阳性组、1型阳性P型阴性组、1型阴性P型阳性组、1型阴性P型阴性组),比较各组间的药敏差异,结果显示头孢呋辛(χ^2=16.42,P=0.001)在1型阴性P型阳性组耐药率低于其他组。分析单种菌毛黏附特性与药敏的关系,结果显示头孢呋辛(χ^2=6.01,P=0.014)在1型菌毛黏附阳性组的耐药率高于阴性组。对药敏情况与两种菌毛黏附特性进行相关性分析时发现,1型菌毛黏附阳性菌株相较于阴性菌株,头孢西丁、哌拉西林/三唑巴坦的耐药率降低,头孢呋辛的耐药率增加,P型菌毛黏附阳性菌株相较于阴性菌株,头孢呋辛的耐药率降低。结论通过比较UPEC 1型菌毛、P型菌毛黏附与药敏的关系,在临床治疗UPEC所致尿路系统感染时,为抗菌药物的选择提供了新的方向。

禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因克隆与基因分型分析

为克隆禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因,确定其基因分型并分析其变异性,从GenBank数据库中查找大肠杆菌P型菌毛papA基因,并运用Snap Gene 3.2.1软件设计合成3对引物。其中,第1对引物为扩增不同基因分型通用引物,预计扩增片段大小为281 bp;第2对和第3对引物是为了扩增完整papA基因并分析有无变异而设计的,预计扩增片段大小分别为522 bp和943 bp。以禽大肠杆菌HJ2、TK3菌株的基因组为模板进行PCR扩增;将所有扩增片段回收、酶切,并分别与pTG19-T载体进行连接,转化进入DH5α受体菌,提取获得含扩增片段的重组质粒,测序并进行序列分析。结果表明,用引物1从HJ2、TK3菌株的基因组中均扩增获得接近281 bp大小的片段,用引物2则只从HJ2菌株基因组中扩增获得接近522 bp大小的片段,而未能从TK3菌株基因组中扩增出片段;用引物3从TK3菌株基因组中扩增出接近943 bp大小的片段,而未能从HJ2菌株基因组中扩增出产物。经过基因碱基序列分析比对,完整的papA基因则位于943 bp的片段之中,确定HJ2和TK3两个菌株P型菌毛papA基因均属基因11型,但发现二者papA基因存在一定的碱基差异。PapA蛋白氨基酸序列比对发现,同属于基因11型的papA基因编码的PapA蛋白氨基酸序列也存在位点差异。

地高辛标记P菌毛基因检测探针鸡大肠杆菌

用地高辛标记鸡大肠杆菌Ｐ型菌毛结构基因（ＰａｐＡ）制成核酸探针，作斑点杂交试验，检测２８个血清型鸡大肠杆菌５０个菌株与该探针的同源性。结果表明有５个菌株被检测为阳性，阳性率为１０％。