Rb与p53途径及相关抗癌药物的研究进展

由多种因子在体内构成的两条复杂的反馈调节途径,控制着细胞周期的正常运行并抑制肿瘤的发生,成视网膜细胞瘤蛋白(retinoblastoma,Rb)和p53是这一过程的核心。两条途径中的主要成员发生突变经常导致不同类型的肿瘤发生。人们对这两条途径的作用方式、相互联系及其与肿瘤的关系进行了大量研究,并在此基础上,针对诱发肿瘤的不同原因,合理地开发出了大量抗癌药物。

IL-27通过信号通路p38 MAPK和PI3K途径调节中性粒细胞Mac-1、fMLP-R及IL-1β表达

本研究探讨IL-27调节人外周血中性粒细胞中黏附分子Mac-1、趋化因子受体fMLP-R和促炎因子IL-1β表达的信号通路。采用Ficoll密度梯度离心及低渗裂解残存红细胞方法分离高纯度的外周血中性粒细胞。用RT-PCR方法检测中性粒细胞IL-27受体(WSX-1/TCCR和gp130)mRNA表达。分别应用IL-27及信号通路p38 MAPK、PI3K和ERK抑制剂SB203580、LY294002、U0126处理中性粒细胞,用实时定量RT-PCR检测作用前后fMLP-R和IL-1βmRNA水平变化;应用放射免疫法检测作用前后培养上清液中IL-1β的水平变化;流式细胞术检测作用前后Mac-1表达水平变化。结果表明:人外周血中性粒细胞协同表达IL-27受体的两个亚单位WSX-1/TCCR和gp130,IL-27下调中性粒细胞表面黏附分子Mac-1表达(p<0.05),SB203580阻断了IL-27对Mac-1的下调作用(p<0.05),而LY294002及U0126无阻断作用(p>0.05)。相反,IL-27上调中性粒细胞中fMLP-R和IL-1βmRNA的表达并能增加IL-1β释放(p<0.05),LY294002阻断了IL-27对fMLP-R和IL-1β的上调作用(p<0.05),而SB203580及U0126无阻断作用(p>0.05)。结论:IL-27与IL-27R相互作用,可能通过p38 MAPK和PI3K信号途径调节人外周血中性粒细胞中Mac-1、fMLP-R及IL-1β表达。

PI3K-Akt-mTORC1信号途径在细胞生长增殖中的调控作用

PI3K-AKT-mTORC1信号途径在细胞生长增殖中起重要调控作用,PI3K-Akt-mTOR1信号途径能够调节细胞周期相关蛋白基因的表达来调控细胞的增殖;同时,PI3K-Akt-mTOR1信号途径也能够调控细胞的生长和大小;PI3K-Akt-mTORC1信号途径的异常活化与肿瘤发生紧密相关。就PI3K-AKT-mTORC1信号途径在细胞生长增殖中的作用作一综述。

Nucleostemin通过p53与非p53途径调控细胞增殖的研究进展

Nucleostemin(NS)是一种可在细胞核仁和核浆内穿梭的GTP结合蛋白,主要定位于核仁内,其在维持干细胞未分化状态、细胞周期进程、肿瘤细胞及干细胞的增殖与凋亡中发挥着重要作用。就NS调控细胞增殖的机制而言,目前仍存在争议。一部分研究认为,NS通过结合p53,发挥维持细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用;另一部分研究则认为,NS通过细胞内其他通路及参与核糖体的生物合成,进而影响细胞的生物学功能。

亚低温通过PI3K/Akt途径对脑缺血/再灌注起保护作用

目的通过观察亚低温(32℃,3 h)对大鼠全脑缺血/再灌注5天后海马CA1区锥体细胞的保护作用及PI3K抑制剂LY294002的作用,探讨亚低温神经保护的可能机制。方法采用四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型,15 min全脑缺血后再灌注5天。大鼠随机分为假手术组、常温缺血/再灌注组、低温缺血/再灌注组、低温缺血/再灌注给药组和低温缺血/再灌注溶剂对照组。给药方法为缺血前20 min脑室注射。复灌5天后用焦油紫染色法检测海马CA1区的细胞。结果3 h亚低温可有效降低大鼠缺血/再灌注5天后海马CA1区细胞的死亡;缺血前20 min脑室注射PI3K抑制剂LY294002显著抑制了3 h亚低温对海马CA1区细胞的保护作用。结论3 h亚低温对大鼠15 min全脑缺血有确切的保护作用。PI3K/Akt信号通路介导了亚低温的保护作用。

稳定转染HBx基因的HepG2细胞株的建立及其对p53-p21途径的影响

目的将构建的乙型肝炎病毒X基因的真核表达载体稳定转染HepG2细胞株,并研究转染后对p53-p21途径的影响。方法用基因转染的方法将已构建的载体pcDNA3.1-HBx转染入肝癌细胞HepG2中,G418筛选出稳定转染X基因的细胞株。细胞生长曲线、平板克隆形成实验检测转染后肝癌细胞的恶性表型,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Western blot检测p53蛋白的表达,RT-PCR检测p21基因。结果成功筛选出pcDNA3.1-HBx稳定转染的HepG2细胞株;细胞生长实验、平板克隆形成实验显示稳定转染乙型肝炎病毒X基因的肝癌细胞恶性表型增高;流式细胞仪结果显示,转染后的细胞株凋亡率增高,G1/G0期细胞减少,G2期细胞增多;Western blot和RT-PCR分别显示,转染株p53蛋白表达增高,且下调p21基因水平。结论乙型肝炎病毒X蛋白可刺激肝癌细胞生长,稳定转染X基因的细胞株可能通过p53-p21途径增加肝癌细胞的恶性表型。

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病(CML)细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达(其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38)及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明:CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关(P<0.01),与P27蛋白表达呈负相关(P<0.01)。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论:CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。

大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探究大鼠增殖抑制基因(r HSG)过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法:体外培养C6细胞,感染运载r HSG基因的腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP),倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率;应用流式细胞仪分析C6细胞周期;Western blot检测细胞r HSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb,Rb)表达变化。结果:腺病毒可以高效的将目的基因导入C6靶细胞;Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白的表达量明显高于PBS组和Adv-GFP组(P<0.01);r HSG过表达的C6细胞停滞于G0/G1期细胞的数量明显增加(P<0.01);P53、P21cip1蛋白表达量明显增加(P<0.01),p-Rb蛋白表达降低(P<0.01),Rb蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:r HSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。

Akt1/p27^(kip1)途径介导脂氧素A_4抑制TNF-α所致的系膜细胞增殖(英文)

目的 :研究脂氧素A4 (LXA4 )是否抑制肿瘤坏死因子 α(TNF α)所致的肾小球系膜细胞增殖 ,并探讨LXA4 作用的信号转导机制。方法 :用不同浓度的脂氧素A4预外理培养的大鼠肾小球系膜细胞 ,再加入TNF α(10ng ml)共同孵育 ;或单用TNF α刺激肾小球系膜细胞。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ;用RT PCR法检测细胞周期素E与mRNA表达 ;用Westernblot检测 30 8位苏氨酸(Thr30 8)磷酸化的蛋白激酶Akt1及细胞周期负调控蛋白P2 7kipl表达量。结果 :LXA4 呈剂量依赖性地抑制TNF α诱导的系膜细胞增殖。在系膜细胞增殖同时TNF α引起的细胞周期素E的蛋白表达也被LXA4 下调。LXA4 减少TNF α诱导的肾小球系膜细胞中 30 8位苏氨酸磷酸化的Akt1蛋白。LXA4 呈剂量依赖性地阻止TNF α所致的P2 7kipl表达下调。结论 :LXA4 能够抑制TNF α所致的大鼠系膜细胞的增殖 ,其机制依赖于Akt1 P2 7kipl信号转导途径。

叶酸通过调节p53/p21(waf1/cip1)信号途径促进小鼠神经干细胞增殖和分化

目的:研究叶酸对体外培养小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响及作用机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测叶酸对NSCs增殖的影响;撤除生长因子后,用含10%胎牛血清的培养基诱导分化培养6 d后,采用Tuj1(神经元标记物)和GFAP(胶质细胞标记物)免疫荧光双标记法检测叶酸对NSCs分化的影响;并应用流式细胞术、RT-PCR法检测给予叶酸对NSCs细胞周期、p53和p21(waf1/cip1)mRNA水平的影响。结果:与对照组相比,MTT法测定结果显示,叶酸组NSCs增殖能力明显增强;分化后免疫荧光双标法测定显示,叶酸组Tuj1阳性细胞的比率明显增加,且差异具有显著性(P<0.01);流式细胞仪测定结果显示,叶酸组NSCs在G0/G1期细胞数量明显减少(P<0.01),而G2/M期细胞数量明显增多(P<0.01);RT-PCR结果显示,叶酸组NSCs中p53和p21 mRNA表达量明显降低。结论:叶酸能促进NSCs增殖及向神经元分化;叶酸对NSCs增殖和分化的影响与调节NSCs细胞周期及p53/p21(waf1/cip1)信号转导途径相关。

肠道病毒A71型结构蛋白和非结构蛋白对p85表达及p38途径活化的影响

目的探讨肠道病毒A71型(EV-A71)结构蛋白和非结构蛋白对p85表达和p38途径活化的影响。方法通过RT-PCR扩增EV-A71的12个基因片段,经酶切反应和连接反应将目的片段连接到pcDNA3.1(+)/myc-His A真核表达载体,制备去内毒素的重组质粒;使用SuperFect转染试剂将2μg重组真核质粒转染至HEK293细胞24h后,免疫印迹检测p85表达和p38的磷酸化。结果正确构建12个EV-A71结构蛋白和非结构蛋白的真核重组质粒;与未转染细胞相比,EV-A71 P1区结构蛋白(VP1、VP3和VP4)、P2区非结构蛋白(2A、2B、2C和2BC)和P3区非结构蛋白(3A、3C、3D和3AB)均能不同程度的改变p85的表达和p38的磷酸化水平;EV-A71结构蛋白VP2虽不能显著提升p85的表达,但能提升p38的磷酸化水平。结论EV-A71的12个亚单位蛋白可与宿主细胞发生互作,进而调控宿主细胞的生物学过程。

5-氮杂胞苷通过p53／Gadd45α信号途径影响小鼠神经干细胞的增殖

目的:通过研究DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)对小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的影响,进一步阐明DNA甲基化模式的变化对神经发生的影响及机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测5-Aza对NSCs增殖的影响;应用流式细胞仪检测5-Aza对NSCs细胞周期和凋亡的影响;并用RT-PCR、Western Blot法检测给予5-Aza对NSCs细胞p53和Gadd45αmRNA水平和蛋白表达的影响。结果:MTT法测定结果显示:与对照组相比,5-Aza能够明显抑制NSCs的增殖;流式细胞仪测定结果显示,5-Aza组NSCs在G0/G1期细胞数量较对照组明显减少(P<0.01),而S期、G2/M期细胞数量则明显增多(P<0.01),表明5-Aza可引起细胞周期在G2/M期停滞;且5-Aza组NSCs的凋亡率与对照组相比明显增加(P<0.01)。RT-PCR结果显示:5-Aza组NSCs中p53和Gadd45αmRNA水平较对照组明显增高(P<0.05);Western Blot结果也显示:与对照组相比,5-Aza组NSCs中p53和Gadd45α蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论:5-Aza可能通过影响NSCs细胞周期和诱导凋亡抑制小鼠NSCs增殖;5-Aza阻滞NSCs细胞周期的作用机制可能与p53/Gadd45α信号途径相关。

花生四烯酸代谢基因对小鼠肝细胞癌中环氧化酶P450途径的影响

目的探讨在小鼠肝细胞癌(HCC)微环境中花生四烯酸(AA)代谢相关内质网膜基因在HCC发生中的可能作用。方法以AA代谢相关基因为背景,以小鼠HCC瘤体组织和癌旁组织为材料,以RNA-seq和生物信息学分析参与AA代谢的差异表达内质网膜基因(ADEGs)的功能,并用RT-qPCR验证ADEGs的表达情况。结果HCC中共有35个ADEGs(基因表达以每百万测序碱基中每千个转录子测序碱基中所包含的测序片断数(FPKM)≥2或≤0.5且错误发现率(FDR)≤0.05);它们参与了2个生物学程序(BPs)、5个细胞组分(CCs)、9个分子功能(MFs)、1个蛋白位点序列特征(US)和6个信号通路(KPs)。这些基因的功能主要集中在内质网膜上铁离子结合(IIB)对环氧化酶P450途径(EPP)的影响上。进一步分析发现,IIB中的ADEGs在HCC微环境中发生了广泛的单核苷酸位点变异(SNV)和插入、缺失(INDEL)现象,且其发生频率与基因表达正相关(r=0.83)。结论HCC微环境中的ADEGs可能通过内质网中的IIB引起EPP异常,从而在HCC发生、发展中发挥重要作用,而SNV和INDEL则可能是其中重要的基因表达调控方式。

p53途径在肿瘤代谢中的主要作用及其在肿瘤治疗中的应用

众所周如，肿瘤细胞代埘过程出现明显变化，其中包括高速率的糖酵解和乳酸生成、脂质和核酸等生物大分子的大量合成，这些代谢改变作为肿瘤发生的起因或结局，在肿瘤进展过程中发挥重要作娟：近来研究发现，肿瘤抑制因子p53在肿瘤代谢过程中发挥重要作用。因此，我们对p53存调控肿瘤代谢中的作川进行简要综述。我们尤其关注p53在调控肿瘤有氧酵解、氧化磷酸化、磷酸戊糖途径、脂肪酸的合成和氧化、谷氨酰胺代谢等方面的作用，并讨论了p53在抑制肿瘤恶性进程中的治疗策略。

红花黄色素B对肝癌细胞中miR-34a和p53/Caspase凋亡途径的影响

目的:研究就红花黄色素B(Safflower Yellow B,SYB)对肝癌细胞HepG2中miR-34a的表达及p53/半胱氨酸蛋白酶(Caspase,CASP)凋亡途径的影响进行了探讨。方法:通过细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞的存活情况,通过Annexin V检测细胞凋亡情况,通过聚合酶链式反应检测miR-34a表达,通过蛋白质免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤2(BCL2 Apoptosis Regulator,BCL2)、CASP3(剪切后)、CASP8、CASP9、p53的表达情况。结果:在本研究发现SYB可以抑制HepG2细胞生长、增殖活性,诱导肿瘤细胞凋亡,同时促进miR-34a、CASP3(剪切后)、CASP8、CASP9和p53的表达,而对Bcl-2的表达产生抑制作用。结论:miR-34a在对SYB抗HepG2细胞的作用机制中起着很重要的作用。

银屑病p53通路表观遗传机制的研究动态

p53途径是DNA损伤后介导细胞周期阻滞的关键路径,它的异常可导致细胞凋亡或过度增殖。众多表观遗传修饰模式如甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化等修饰导致的染色质重构是抑制p53表达的重要机制;银屑病是一类具有特征性细胞过度增殖的慢性炎症性皮肤病。p53途径中的p14ARF、MDM2、p21WAF1、Bcl-2/Baxc、-myc等效应分子以及缺氧诱导因子HIF-1α的表观遗传修饰机制参与了银屑病的发生。

落新妇苷通过激活PI3K/AKT信号通路和抑制P38MAPK信号通路减轻H2O2诱导的PC12细胞损伤

目的研究落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞影响。方法将PC12细胞分为5组:对照组、H 2O 2组及不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)落新妇苷组。采用CCK8实验检测各组细胞的活力;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡率;Western blot检测PI3K、AKT、Caspase3和P38蛋白及其磷酸化激活蛋白的表达水平。结果与H 2O 2组相比,落新妇苷组细胞的活力显著提高,细胞凋亡率明显降低,活化的凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3表达水平降低,PI3K/AKT途径相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平升高,P38 MAPK途径重要蛋白p-P38的表达水平降低。结论落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞有明显保护作用;这种保护作用可能是通过激活PI3K/AKT信号通路及抑制P38MAPK信号通路实现的。

糖尿病仓鼠视网膜p38MAPK和TGFβ_2的表达

目的探讨p38MAPK、TGFβ2在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发生发展中的作用及其机制。方法用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导仓鼠糖尿病(DM)模型,提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表达情况,Western blotting检测DM仓鼠p38MAPK、TGFβ2蛋白情况。结果DM仓鼠视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表达呈显著升高,蛋白表达增多。结论p38MAPK信号途径参与DR的发病机,制阻断p38MAPK的活性可能有助于阻断DR的发生和发展。

Mieap与线粒体的质量控制

线粒体在细胞能量代谢和细胞凋亡中起着至关重要的作用.质量控制是线粒体在细胞中维持正常状态的关键机制.2011年Miyamoto等发现Mieap参与线粒体质量控制的两个新机制.Mieap诱导的溶酶体样细胞器,进入线粒体内,并在线粒体积累,能通过特异性的清除氧化的线粒体蛋白来修复异常线粒体,使得线粒体维持在正常状态.Mieap诱导的通过细胞膜内吞机制形成的囊泡,识别异常线粒体,并对其特异性的清除.Mieap诱导的这两个过程参与了线粒体质量控制,并决定线粒体的命运.