三七总皂苷通过ERK/Akt通路改变HepG2/阿霉素细胞耐药性

目的:观察三七总皂苷对人肝癌阿霉素耐药细胞(HepG2/Adr)耐药性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)/蛋白激酶B(Akt)通路主要蛋白表达的影响,从ERK/Akt通路探讨三七总皂苷逆转HepG2/Adr细胞耐药的可能作用机制。方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法检测三七总皂苷对HepG2/Adr细胞增殖的影响,利用(100,50,25 mg·L^(-1))三七总皂苷分别与(20μmol·L^(-1))阿霉素联合处理HepG2/Adr细胞,同时设置空白组,采用高内涵筛选平台检测药物作用40 min,3 h,6 h阿霉素在HepG2/Adr细胞内的积累;采用蛋白免疫印迹法检测P-糖蛋白/多药耐药基因1/ATP家族所介导的ABC家族转运蛋白(P-gp/MDR1/ABCB1)等耐药相关蛋白及ERK/Akt信号通路主要蛋白表达量;激光共聚焦显微镜检测MDR1在细胞膜上分布的改变。结果:与人肝癌细胞HepG2比较,HepG2/Adr细胞MDR1表达量显著升高(P<0.01);与阿霉素组比较,三七总皂苷(25,50,100 mg·L^(-1))与阿霉素(20μmol·L^(-1))联合给药在体外对HepG2/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),逆转倍数最高为10倍;与阿霉素组比较,联合给药组3,6 h可明显提高阿霉素在细胞内的积累(P<0.05),呈剂量依赖性;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷(50,100 mg·L^(-1))与阿霉素(20μmol·L^(-1))联合给药组MDR1,ABC半转运蛋白(ABCG2),多药耐药相关蛋白1(MRP1),ERK,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK),Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达明显降低(P<0.05);与空白组比较,阿霉素组与三七总皂苷(25 mg·L^(-1))组MDR1在细胞膜上的分布差异无统计学意义;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷(100,50 mg·L^(-1))组可明显减少MDR1在细胞膜上的分布(P<0.05)。结论:三七总皂苷可抑制ERK/Akt通路,降低MDR1的表达,明显提高阿霉素在HepG2/Adr细胞中的积累,可能是三七总皂苷逆转耐药的机制之一。