甲硫腺苷磷酸化酶、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶(SETD2)蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法将2018年11月至2019年11月在苏州市中西医结合医院进行手术治疗并经术后病理学检查证实的86例结直肠癌病人作为研究对象,并收集齐其癌组织标本以及对应的癌旁组织标本。采用免疫组织化学染色法检测所有标本MTAP、SETD2蛋白表达水平。采用χ^(2)检验和多因素Cox回归法探讨MTAP、SETD2蛋白表达与结直肠癌病人临床病理特征、预后的关系。结果结直肠癌组织中MTAP、SETD2阳性表达率(30.23%、27.91%)分别低于癌旁组织(58.14%、62.79%)(P<0.05)。MTAP、SETD2阳性表达水平随着TNM分期越晚、分化程度越低、伴有淋巴结转移而降低(P<0.05)。MTAP阳性3年生存率(73.08%)明显高于阴性(43.33%)(P=0.011);SETD2阳性3年生存率(70.83%)高于阴性(45.16%)(P=0.011)。单因素、多因素分析得出,TNMⅢ~Ⅳ期、伴淋巴结转移、低分化、MTAP阴性、SETD2阴性表达均为影响结直肠癌预后的危险因素(P<0.05)。结论直肠癌组织中MTAP、SETD2蛋白均呈低表达,其表达水平可能参与疾病发展,可成为评估病人预后不良的有效生物学指标。

金属有机框架Cu@Sc-MOF纳米酶对5'-三磷酸腺苷的比色/荧光检测

通过溶剂热法制备了一种铜/钪金属有机框架(Cu@Sc-MOF)纳米酶,在H2O2存在下,Cu@Sc-MOF可催化氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)得到蓝色氧化产物oxTMB,并在652 nm处产生特征吸收峰。同样,Cu@Sc-MOF也可氧化邻苯二胺(OPD)生成2-氨基吩嗪(DAP),并在570 nm产生特征荧光发射峰(激发波长为390 nm)。由于5’-三磷酸腺苷(ATP)与Cu2+络合,抑制了Cu@Sc-MOF的催化活性,使得652 nm处的吸光度和570 nm处的荧光强度减弱,基于Cu@Sc-MOF的类过氧化物酶活性,构建了一种用于检测ATP的比色/荧光双模式光谱法。比色和荧光分析法的线性范围分别为2.50~40.00μmol/L和1.00~22.50μmol/L,检出限(LOD)分别为0.60和0.27μmol/L。将上述比色/荧光双模式分析法用于肝癌细胞HepG2细胞裂解液中ATP的检测,加标回收率分别为92.0%~101%和93.2%~97.9%,具有良好的应用前景。

转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2 shRNA的人骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡能力观察

目的观察转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)shRNA的骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡的变化。方法以qRT-PCR法和Western blotting法分别检测人骨肉瘤细胞(U2-OS、MG-63、SaOS-2)和人正常成骨细胞(h FOB1.19)中ATAD2 mRNA、蛋白。在U2-OS细胞中转染ATAD2 shRNA慢病毒载体,采用qRT-PCR法和Western blotting法检测转染效果,CCK8方法检测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-Caspase-3)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK2)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(C-Caspase-9)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白。结果骨肉瘤细胞中ATAD2 mRNA、蛋白表达水平高于正常成骨细胞(P均<0.05)。ATAD2 shRNA慢病毒载体转染后的骨肉瘤细胞中ATAD2表达水平下降(P<0.05)。转染ATAD2 shRNA后的骨肉瘤细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达升高,CDK2、CyclinD1蛋白表达降低(P均<0.05)。结论转染ATAD2 shRNA可抑制U2-OS细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

胃癌组织中三磷酸腺苷酶家族蛋白2的表达变化及意义

目的观察三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)在胃癌组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择配对的胃癌本和癌旁组织标本129例,分别采用Real-time PCR法和免疫组化法检测其ATAD2 mRNA和蛋白表达,随访记录患者生存时间,收集其临床资料。结果胃癌组织ATAD2 mRNA相对表达量为7.67±2.09,癌旁组织为1.00±0.11,P<0.01。胃癌组织中ATAD2蛋白定位在细胞核,其中高表达77例、低表达52例,癌旁组织中未见ATAD2蛋白表达。胃癌组织ATAD2 mRNA高表达患者生存时间为(22±2)个月,低表达患者为(34±5)个月,P<0.05。ATAD2 mRNA表达与胃癌患者的性别、年龄、分化程度和TNM分型无关(P均>0.05),与肿瘤浸润深度、淋巴结转移数和肿瘤大小有关(P均<0.05)。结论胃癌组织中ATAD2表达升高,其检测有助于判断患者病情及预后。

跖肌肌球蛋白腺苷三磷酸酶与琥珀酸脱氢酶染色的相关性探讨

研究大鼠、家兔和人跖肌的肌纤维型构成比例与分布。应用肌球蛋白腺苷三磷酸酶 (ATP酶 )和琥珀酸脱氢酶 (SDH酶 )染色法 ,观察比较各型肌纤维的组织化学特性。结果表明 :肌球蛋白ATP酶染色 ,大鼠、家兔和人跖肌的肌纤维可分成Ⅰ型、ⅡA 型、ⅡB 型肌纤维 ,横切面呈多边形或椭圆形 ,分别约占2 5 %、35 %和 4 0 % ;琥珀酸脱氢酶染色 ,肌纤维呈蔚蓝色 ,以镶嵌交叉排列 ,可分为中染SO、深染FOG和浅染FG三型 ,分别约占 2 5 %、30 %和 4 5 % ,种系间无显著性差异。ATP酶活性反应肌纤维收缩的生理特性 ,而SDH活性反应肌纤维的代谢特征 ,两种分型的方法有所差异。

三磷酸腺苷酶家族蛋白-2在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的通过实验分析骨肉瘤患者样本中三磷酸腺苷酶家族蛋白-2(ATAD-2)的表达情况以及对临床诊断和治疗的意义。方法收集骨肉瘤样本以及骨肉瘤周围组织的样本,各50例,检测ATAD-2表达情况。结果骨肉瘤样本中的ATAD-2的mRNA的表达量高于骨肉瘤周围组织的样本。结论临床上发现某些组织疑似骨肉瘤且三磷酸腺苷酶家族蛋白-2表达程度较高时,可考虑患骨肉瘤的可能性较大。

三磷酸腺苷酶家族蛋白2在不同病变胃组织中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)在不同病变胃组织中的表达及意义。方法收集12例新鲜胃腺癌及相应癌旁相对正常组织标本,利用实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)检测两种组织中ATAD2 mRNA的表达;同时应用免疫组化法检测ATAD2在121例胃腺癌及相应癌旁相对正常组织、121例非瘤变胃组织、29例高低级别上皮内瘤变组织中的表达情况。结果 RT-qPCR方法检测结果表明,与相应癌旁相对正常组织相比,新鲜胃腺癌组织中ATAD2 mRNA表达明显上调,差异具有统计学意义(t=4.664,P<0.01);ATAD2在非瘤变胃组织中均不表达,在高低级别上皮内瘤变中均为低表达,在胃腺癌组织中有23例(23/121)呈高表达。在胃腺癌组织中ATAD2的表达明显高于相应癌旁相对正常组织(z=-12.588,P<0.01);在低级别上皮内瘤变中的表达高于非瘤变胃组织(z=-7.984,P<0.01);在胃腺癌、高级别上皮内瘤变组织中的表达均高于低级别上皮内瘤变组织(z=-2.531、-2.285,P<0.05);在胃腺癌与高级别上皮内瘤变、慢性萎缩性胃炎与慢性浅表性胃炎中的表达差异均不具有统计学意义(P>0.05)。ATAD2在胃腺癌组织中的表达与肿瘤大小、分化程度相关(χ~2=5.506、8.412,P<0.05),而与病人年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期无关(P>0.05)。结论 ATAD2参与了胃腺癌的发生发展过程;ATAD2表达检测对临床判定某些胃黏膜病变性质有重要的参考价值。

心肌收缩蛋白三磷酸腺苷酶及其生理病理意义

心肌收缩蛋白三磷酸腺苷酶(ATPase)与心功能的变化在多种生理及病理情况下存在着一定的关系,并与心肌代谢、心肌肥厚及心衰密切相关。

三磷酸腺苷酶家族蛋白2过表达作为胃癌预后标志物可行性研究

目的探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)表达与胃癌患者疾病预后关系。方法采用定量PCR方法检测15例新鲜胃癌组织和临近非肿瘤组织中ATAD2 mRNA表达情况,采用免疫组织化学方法检测166例胃癌组织石蜡包埋样本中ATAD2表达情况,分析ATAD2表达与166例胃癌患者疾病临床病理学特征的关系。结果与临近非肿瘤组织比较,胃癌组织中ATAD2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。肿瘤临床分期、肿瘤侵袭深度、淋巴结转移及远处转移为影响胃癌组织ATAD2过表达的显著性因素。生存分析结果显示,ATAD2过表达是胃癌患者疾病预后不良的独立预后因素(P<0.001)。结论 ATAD2过表达胃癌患者的总生存率低于低表达患者,ATAD2过表达可以作为胃癌患者疾病预后生物标志物。

蛇床子素对小麦赤霉病菌葡萄糖、钙吸收和三磷酸腺苷酶活性的抑制

蛇床子素可抑制小麦赤霉病菌菌丝生长干重;含有14C标记的葡萄糖培养基中培养小麦赤霉病菌,以100μg/mL蛇床子素处理,其菌体内14C放射强度比对照降低43%,表明蛇床子素能抑制小麦赤霉病菌对葡萄糖的吸收;以100μg/mL蛇床子素处理小麦赤霉病菌12h,菌体内总钙含量仅为对照的60%,表明蛇床子素能抑制菌体对钙的吸收;蛇床子素处理对β-1,6葡聚糖酶活性没有显著影响;离体条件下,蛇床子素能抑制小麦赤霉病菌三磷酸腺苷(ATP)酶活性。

四种拟除虫菊酯类杀虫剂对枸杞蚜虫的毒力及对三磷酸腺苷酶和谷胱甘肽S-转移酶活性的影响

为寻找防治枸杞蚜虫的适用药剂，采用玻璃管药膜法，测定了4种拟除虫菊酯类杀虫剂对枸杞蚜虫的毒力及对其三磷酸腺苷酶（ ATPase）和谷胱甘肽S-转移酶（ GSTs）活性的影响。结果表明：枸杞蚜虫对联苯菊酯最敏感，LC50值为4.34 mg/L；氯菊酯、高效氯氰菊酯和甲氰菊酯的LC50值分别为17.08、40.50和184.84 mg/L。4种杀虫剂对枸杞蚜虫两种ATPase活性均有抑制作用，药剂浓度为1×10－4 mol/L 时，4种药剂对 Na＋-K＋-ATPase 活性的抑制率均高于对 Ca2＋-Mg2＋-ATPase的抑制率，其中对Na＋-K＋-ATPase活性的抑制率从高到低依次为：联苯菊酯＆gt;高效氯氰菊酯＆gt;氯菊酯＆gt;甲氰菊酯，而对Ca2＋-Mg2＋-ATPase的抑制率则是联苯菊酯最高（46.41％），高效氯氰菊酯最低（33.04％）。4种药剂对枸杞蚜虫GSTs活性的影响差异较大：联苯菊酯在低浓度时对GSTs具有诱导作用，高浓度时则表现为一定的抑制作用；不同浓度高效氯氰菊酯和氯菊酯对GSTs活性均表现为抑制作用，抑制率最高达85.02％；而甲氰菊酯处理后 GSTs 的活性则升高了193.07％~249.96％。

条石鲷鳃的组织发育及鳃上钠钾三磷酸腺苷酶活性的早期变化

为完善条石鲷的早期组织发育过程,探索条石鲷仔鱼早期高死亡率的内在发育机制,实验对鳃器官的早期发育进行观察,结果显示:条石鲷仔鱼在1日龄时出现鳃原基;2日龄,原始鳃弓形成;3日龄,鳃丝原基出现;6日龄,鳃丝两侧的扁平细胞向外突出而形成原始的鳃小叶,假鳃出现;7日龄,鳃小叶基部出现泌氯细胞;8日龄,泌氯细胞开始分泌蛋白样物质;14日龄,鳃的结构分化发育完善。钠钾三磷酸腺苷酶(Na+,K+-ATPase)的相对活性从胚胎分裂期不断增加,直至器官分化期。此后活性逐渐降低,并保持在一个较低的水平,直至9日龄活性才开始上升。而12日龄之后又不断下降,到14日龄降至最低值(0.246±0.126)U/g。此后急剧上升,到18日龄升至最高值(4.731±0.309)U/g。从20日龄起,Na+,K+-ATPase的相对活性保持稳定上升,直至本次实验结束。结果表明,Na+,K+-ATPase活性的变化与鳃组织,尤其是与泌氯细胞的发育密切相关,而且在其活性较低的阶段,条石鲷仔鱼的死亡率较高。

氟化物对家蚕幼虫中肠(钙,镁)-三磷酸腺苷酶活性的影响

添食NaF抑制家蚕幼虫中肠(钙,镁)-三磷酸腺苷酶[(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPase]的活性。该抑制作用随添食NaF的浓度提高,或添食日数延长而增加,有累积效应。添食适量的CaCl_2或CaCl_2和Na_2ATP能降低NaF对(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPase活性的抑制。试验结果说明,应用Lee的(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPase动力学模型可获得满意的解释。氟化物抑制家蚕幼虫体内组织细胞膜上(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPasc活性,致使Ca^(2+)在蚕体内平衡失调,是家蚕氟中毒的一种重要的毒理学上的分子机制。

喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2、抗磷酸化致癌基因和张力蛋白同源的磷酸酶基因的表达及意义

目的检测喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2（ATAD2）、抗磷酸化致癌基因（C—MYC）和张力蛋白同源的磷酸酶基因（PTEN）的表达，分析其临床价值。方法收集2012年3月-2014年2月经宁波市鄞州第二医院诊断并行喉鳞癌根治术的患者99例，选择术中留取的癌组织标本作为观察组，选择其中78例患者癌旁正常组织标本为对照组。采用免疫组化检测二组中ATAD2、C—MYC和PTEN的表达。结果观察组中ATAD2（63．64％比12．82％）和C—MYC（70．71％比16．67％）表达的阳性率明显高于对照组。PTEN的表达明显低于对照组（20．20％比82．50％），差异有高度统计学意义（P〈0．01）。观察组中ATAD2、C—MYC和PTEN表达的阳性率与肿瘤体积、淋巴结转移、脉管浸润和Ki67的表达有关（P〈0．05）。相关性分析显示观察组中ATAD2与C—MYC的表达呈正相关（r=0．43，P〈0．05），ATAD2与PTEN的表达呈负相关（r=～0．46，P〈0．05）。结论喉鳞癌组织中ATAD2、C—MYC高表达、PTEN低表达，对肿瘤的发生和进展有促进作用，ATAD2与C—MYC、PTEN可能具有一定的协同作用。

三七皂甙Rg1、Rb1对肝纤维化大鼠线粒体DNA三磷酸腺苷酶6、8亚基的作用机制研究

目的探讨三七皂甙(panax notoginseng saponins,PnS)Rg1、PnS Rb1干预下,肝纤维化大鼠线粒体DNA三磷酸腺苷(adenine triphosphate,ATP)酶6亚基、ATP酶8亚基的基因突变和ATP含量变化。方法 96只Wistar大鼠分为对照组、四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝纤维化大鼠模型组、PnS Rg1组、PnS Rb1组各24只。除对照组外,其余3组用5%CCl4橄榄油按5 ml/kg灌胃制作肝纤维化大鼠模型。PnS Rg1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射PnSRg1(5 mg/kg)。PnS Rb1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射Rb1(5 mg/kg)。用生物发光法测定各组大鼠实验前及实验开始2、4、6周末时线粒体内ATP含量并比较。提取肝细胞线粒体总RNA,逆转录为互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,cDNA),用基因重组、测序,通过GenBank与线粒体DNA已知序列进行比较,研究PnS Rg1、PnS Rb1干预6周后线粒体DNA的ATP酶6亚基7904-8584区域和ATP酶8亚基7743-7946区域基因突变情况。结果 (1)与对照组相比,模型组大鼠线粒体DNA ATP酶6亚基7904-8584区域有3处突变:C8294G、T8505G、G8584A。用Fisher确切概率法分析,突变增加有显著性意义(P<0.01)。PnS Rg1组、PnS Rb1组与对照组相比突变增加没有显著性意义(P>0.05)。(2)与对照组相比,ATP酶8亚基7743-7946区域有2处突变:A7797non、T7863C。用Fisher确切概率法分析,突变增加有显著性意义(P<0.01)。PnS Rg1、Rb1组与对照组相比突变增加没有显著性意义(P>0.05)。(3)各组肝纤维化大鼠线粒体ATP含量与CCl4处理时间的相关性分析,用pearson's检验r=-0.935,呈负相关。(4)肝纤维化大鼠线粒体内ATP含量与ATP酶6亚基突变的相关性分析,用pearson's检验r=-0.943,呈负相关;肝纤维化大鼠线粒体内ATP含量与ATP酶8亚基突变的相关性分析,用pearson's检验r=-0.961,呈负相关。结论 PnS Rg1、Rb1可以显著抑制线粒体ATP含量下降,可以显著抑制线粒体DNA ATP酶6亚基、ATP酶8亚基突变,从而推断PnS Rg1、Rb1可能通过减少线粒体DNA ATP酶6、8亚基突变而抑制线粒体ATP含量下降,从而延缓肝纤维化发生发展。

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂AG014699联合化疗对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制剂AG014699联合多西他赛（DTX）或卡铂（CBP）对三阴性乳腺癌细胞株MDA—MB-231增殖的影响，探讨PARP抑制剂AG014699联合化疗是否有协同抗肿瘤效应。方法PARP抑制剂AG014699与DTX、CBP单独或联合作用于MDA—MB-231细胞，细胞增殖及细胞毒性实验法检测细胞增殖并用联合用药公式分析合用效应（q值0.85—1．15为单纯相加，〉1．15为协同，〈0．85为拮抗）；流式细胞仪分析细胞凋亡及周期分布。结果PARP抑制剂AG014699、DTX、CBP单独作用于MDA—MB-231细胞，均可抑制增殖，诱导凋亡，引起细胞周期阻滞；PARP抑制剂AG014699（10μmol／L）与DTX（10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）、CBP（10^-5、10^-4mol／L）联合作用时，q值在0．85—1．15，显示相加效应；PARP抑制剂AG014699与CBP（10^-3mol／L）联合作用时，q值〉1．15，显示协同效应。PARP抑制剂AG014699联合DTX或CBP能进一步促进凋亡，并使G2／M期细胞比例增加。结论PARP抑制剂AG014699联合化疗药物DTX或CBP能显著抑制MDA—MB．231细胞增殖，发挥相加或协同抗肿瘤作用。

黄芪总苷对一次性力竭游泳大鼠脑组织三磷酸腺苷酶活性的影响

目的:探讨黄芪总苷对一次性力竭游泳大鼠脑组织三磷酸腺苷(ATP)酶活性的影响。方法:24只SD大鼠随机均分为3组(对照组、模型组、黄芪总苷组),对照组大鼠常规饲养3周后处死取材,黄芪总苷组预防性给药3d,模型组和黄芪总苷组在一次力竭性游泳运动后取样,观察大鼠脑组织ATP酶活性的变化。结果:力竭游泳大鼠脑组织Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase和Ca2+Mg2+-ATPase活力均较正常对照组有明显降低(P<0.05),黄芪总苷能提高力竭运动大鼠脑组织的ATP酶活性,虽均尚不能恢复到正常水平,但Mg2+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase的活力已与模型组有显著性差异(P<0.05)。结论:黄芪总苷预防给药具有保护力竭运动大鼠脑组织的作用。