栀子厚朴汤中p-香豆酸在正常及抑郁大鼠尿液中排泄动力学差异研究

目的建立一种基于HPLC-UV的快速稳定方法,测定栀子厚朴汤灌胃给药后大鼠尿液中p-香豆酸的含量,并应用于正常及抑郁大鼠的尿液排泄动力学研究。方法采用慢性温和不可预知应激进行大鼠抑郁造模,甲醇沉淀蛋白进行尿液样本前处理。色谱柱:Phenomenex C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈∶0.1%甲酸水溶液为21∶79,等度洗脱;柱温:35℃;检测波长:310 nm;进样量:20μL;流速:1.0 mL/min。结果方法学结果表明回收率在98%~104%,RSD<3%,在0.2~64μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=1);尿液排泄动力学结果表明,单次灌胃给予栀子厚朴汤后,正常及抑郁大鼠体内的p-香豆酸在24 h内均基本排泄完全;p-香豆酸在抑郁组大鼠体内以原型形式经肾脏排泄率较正常组大鼠高。结论该研究所建立的p-香豆酸测定方法灵敏、快速、可靠,可用于正常及抑郁大鼠p-香豆酸尿液排泄动力学的研究。抑郁组大鼠的尿液总排泄率较空白组大鼠高,提示可能与抑郁大鼠肠道菌群及肝脏代谢酶功能变化有关。

p-香豆酸对西洋参的化感作用及生理机制

西洋参(Panax quinquefolium L.)栽培中存在严重的连作障碍现象,前期发现p-香豆酸在以滤纸片为基质的条件下,能够显著抑制西洋参胚根的生长。为了明确p-香豆酸在土壤基质中对种胚的化感活性以及对成株西洋参生长的作用及生理机制,以自然土壤为基质,观察p-香豆酸作用后种胚的生长情况;采用室内水培试验,观察p-香豆酸作用下2年生西洋参种根从出苗至结果期的生长及部分生理指标的变化。种胚生长实验在土壤中分别添加0.0024、0.012、0.06、0.3、1.5、7.5 mg/g的p-香豆酸,处理7 d后测定西洋参种胚的胚根长和胚芽长。水培试验中全营养液中分别添加0.012 mg/m L、0.06 mg/m L、0.3 mg/m L p-香豆酸,处理后每隔5 d测定植株叶片展开情况、株高、冠幅等生长指标;于展叶期(10 d)、现蕾期(20 d)、结果期(30 d)测定地上部分及新生须根的生物量,同时测定新生须根苯丙氨酸解氨酶(PAL)活力;叶片完全展开后测定植株净光合速率(Pn)、表观电子传递速率(ETR)和最大光化学效率(Fv/Fm)等光合特性参数。结果表明,土壤中添加0.0024—7.5 mg/g p-香豆酸西洋参胚根长度降低28.52%—100%,胚芽长度降低1.09%—100%,并呈现一定的剂量抑制效应。实验浓度内的p-香豆酸可显著抑制西洋参植株地上部分生长,推迟展叶期;结果期地上部生物量比对照降低17.17%—54.55%(P<0.05,Dunnett-t test);同时,叶片的Pn、ETR受到抑制(P<0.05),但Fv/Fm不变;对须根的影响主要表现为0.06 mg/m L p-香豆酸处理组在展叶期PAL酶活力提高69.05%,之后PAL活力和生物量均比对照下降,浓度增加至0.3 mg/m L时整个培养期内PAL酶活力和生物量均低于对照。由此推论,根系环境中的p-香豆酸在自然土壤中对西洋参种胚具有显著抑制其生长的化感作用;对成株西洋参的作用主要为抑制地上部分生长,并通过降低成株西洋参叶片光合能力,从而表现出明显的化感作用,0.06 mg/m L p-香豆酸诱导须根PAL酶活力先升高再降低并最终降低生物量的结果也表明p-香豆酸是西洋参根系生长的胁迫因素。结果证实p-香豆酸对西洋参种胚和成株的生长均具有自毒作用,其抑制生长的生理机制在于抑制叶片的光合作用。

HPLC法同时测定不同配伍比例三棱-莪术药对中P-香豆酸、阿魏酸的含量

目的:建立同时测定三棱-莪术药对中P-香豆酸、阿魏酸含量的方法,探讨不同比例药对中二者含量的变化。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent 20RBAX XDB-C_(18),流动相为乙腈-0.1%冰醋酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为266 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:P-香豆酸、阿魏酸检测质量浓度线性范围分别为4.218 6~21.093μg/m L(r=0.999 8)、1.836 0~9.180μg/m L(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为98.72%~100.30%(RSD=0.18%,n=9)、99.11%~100.45%(RSD=0.46%,n=9)。三棱-莪术药对4个配伍比例(1∶1、2∶1、1∶2、1∶0,m/m)中,三棱-莪术比例(m/m)为2∶1时P-香豆酸、阿魏酸含量最高。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于三棱-莪术药对中P-香豆酸、阿魏酸含量的同时测定;该药对中三棱-莪术比例(m/m)为2∶1时主要有效成分含量最高。

外源p-香豆酸处理对采后桃果实苯丙烷代谢和抗氧化能力的影响

为探究外源p-香豆酸(p-coumaric acid,p-CA)处理对采后桃果实冷害和相关机制的影响,本实验以‘沙红’桃果实为试材,研究了0、0.5、1.0 mmol/L p-CA浸泡处理对采后桃果实于4℃贮藏期间冷害指数和丙二醛含量的影响,并得出最优浓度(0.5 mmol/L),在此条件下继续研究其对桃果实苯丙烷代谢和抗氧化能力的影响。结果显示:p-CA处理延缓了桃果实冷害的发生和丙二醛的生成;p-CA处理激活了莽草酸脱氢酶、苯丙氨酸脱氨酶、肉桂酸-4-羟化酶和4-香豆酸辅酶A连接酶活力,并抑制了多酚氧化酶及过氧化氢酶活力,这使桃果实中总酚含量增加,进而提高了清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、羟自由基、O2-的能力。以上结果表明p-CA处理对桃果实低温贮藏期间冷害发生的延缓作用与其对苯丙烷代谢和抗氧化能力的调控有关。

p-香豆酸对小鼠急性缺氧性脑水肿的预防作用

目的:研究p-香豆酸(p-CA)对急性缺氧引发的小鼠脑水肿的预防作用。方法:45只健康雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(25 mg·kg-1·d-1人参皂苷Rg1)、p-CA低剂量组(25 mg·kg-1·d-1)和p-CA高剂量组(100 mg·kg-1·d-1),连续灌胃(ig)给药7 d后急性缺氧(9. 5%O2)处理6 h。检测小鼠脑组织含水量、抗氧化能力(T-AOC,SOD,CAT和MDA)、ATP的含量及无氧代谢酶(LDH,PK和PFK)和Na+,K+-ATP酶活力,并观察脑组织的苏木精-伊红(HE)染色切片。结果:与正常组相比,急性缺氧6 h后小鼠脑组织含水量显著增加2. 63%(P <0. 05),而高剂量的p-CA干预能有效抑制该指标的上升(P <0. 05),与HE染色切片观察结果一致;同时,高剂量的p-CA能显著提高小鼠脑组织抗氧化能力(T-AOC↑,SOD↑,CAT↑和MDA↓)和Na+,K+-ATP酶活力(P <0. 05)。结论:p-CA对小鼠缺氧性脑水肿具有较好的预防效果,其作用机制可能与提升急性缺氧下脑组织抗氧化能力和Na+,K+-ATP酶活力有关。

老参地土壤中的酚酸类化合物对4种作物的化感作用

目的：探讨种植过西洋参的老参地土壤中积累的酚酸类化感物质对其他作物的影响,为选择合适的后茬作物提供依据。方法：以田间实测的酚酸种类和含量为依据,对比老参地土壤中9种混合酚酸（总酚酸）对小麦、玉米、萝卜、紫花苜蓿4种作物种胚萌发及生长的作用,并与其中含量最高的p-香豆酸进行比较。结果：总酚酸在接近老参地田间浓度的实验浓度下（0.55-2.2 mg·mL^-1）,仅对小麦、紫花苜蓿的发芽率有弱的抑制作用,对其他作物均无影响（P〉0.05）;对4种作物的胚根、胚芽的生长均有抑制作用,2.2 mg·mL^-1浓度下分别比对照降低62%-92%、27%-58%（P〈0.05）。根据IC50值,总酚酸对4种作物胚根的毒力依次为：紫花苜蓿〉萝卜〉玉米〉小麦;对胚芽的毒力依次为：萝卜〉紫花苜蓿〉小麦〉玉米。对比总酚酸与p-香豆酸的毒力发现,总酚酸对萝卜和玉米胚根的毒力低于p-香豆酸,而对紫花苜蓿胚根、萝卜胚芽的毒力高于p-香豆酸。结论：老参地土壤中存在的酚酸类化合物对萝卜、紫花苜蓿等直根系作物毒力较强,对小麦、玉米毒性相对较弱,轮作应优先考虑禾本科须根系作物。

高效液相色谱法测定半枝莲药材中3种化合物的含量

目的:建立一种快速、准确同时测定半枝莲药材中的原儿茶酸、p-香豆酸和木樨草素含量的高效液相色谱-电化学检测(HPLC—ECD)法。方法:采用 Gemini-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5.0μm)色谱柱;以甲醇(A)-3%醋酸(B)为流动相,梯度洗脱[0 min 时 A-B(25∶75),5 min 时 A-B(25∶75),10 min 时 A-B(37.5∶62.5),15 min 时 A-B(25∶75),20 min 时 A-B(37.5∶62.5),30 min 时 A-B(60∶40)];流速为0.8 mL·min^(-1);柱温为30℃;电化学检测器的工作电位为0.9 V;采用标准曲线法对3种化合物进行定量。结果:原儿茶酸、p-香豆酸和木樨草素的线性范围分别为0.14～11.28μg·mL^(-1)(r=0.9990),0.29～9.25μg·mL^(-1)(r=0.9994),0.58～9.31μg·mL^(-1)(r=0.9993);3次加样的平均回收率分别为97.7%(RSD≤1.8%),100.1%(RSD≤5.6%),100.9%(RSD≤4.6%)。结论:与用于半枝莲约材中3种化合物测定的 HPLC—DAD 法相比较,HPLC—ECD 法不仅具有灵敏度高的特点,还可避免用 DAD 时由于不同物质的最大吸收波长不同而难以在同一波长下进行同时灵敏测定的问题。

燕山红栗种子休眠与种胚形态、种皮及内含物的关系

以燕山红栗为试验材料,从种胚形态、种皮障碍、内含物变化等多方面,探讨板栗种子休眠的原因.结果表明:种胚发育不成熟是板栗种子休眠的主要原因,随着沙藏时间的延长,板栗种胚长度逐渐增长,子叶与胚轴和胚根长度的比值也逐渐增大;种皮对板栗种子萌发有一定机械束缚作用,去皮程度越高,板栗种子的发芽率也越高;沙藏过程中,种皮中P-香豆酸的含量明显减少,因此认为P-香豆酸可能是抑制板栗种子萌发的另一个原因,而种仁中GA3/ABA比值的变化与板栗种子萌发没有明显的相关性.在此基础上用不同浓度P-香豆酸对板栗种子进行处理,证明P-香豆酸对板栗种子存在抑制作用.